一種固本益腸制劑中有效成分的含量檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種藥品中有效成分的含量檢測(cè)方法，特別是涉及測(cè)定固本益腸制劑 中白巧和補(bǔ)骨脂含量的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 潰瘍性結(jié)腸炎、慢性腸炎、慢性腹瀉是臨床常見病與多發(fā)病。在全世界人口中，國 外患有慢性結(jié)腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎及慢性腹瀉疾病患者比例高于國內(nèi)人口患者比例，主要 是飲食習(xí)慣和一些國家自然環(huán)境所致。目前，國內(nèi)潰瘍性結(jié)腸炎、慢性腸炎、慢性腹瀉等消 化道系統(tǒng)患者占各種疾病患者比例35%，大約有7000萬人左右，還不包括兒童患者1800萬 人左右。
[0003] 固本益腸制劑具有健脾溫腎，澀腸止瀉的作用。主要用于脾虛或脾腎陽虛所致慢 性泄瀉，腹痛腹瀉，大便清稀或有粘液及粘液血便，食少腹脹，腰酸乏力，形寒肢冷，舌淡苔 白，脈虛。在治療慢性結(jié)腸炎與潰瘍性結(jié)腸炎方面效果顯著。
[0004] 臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，固本益腸制劑有如下幾項(xiàng)性能療效： (1)止瀉。314例臨床病歷顯示，黏液便、黏液血便、稀便、水樣便治療7?10天大便 變稠，連續(xù)用藥2?3療程，泄瀉消失率為86. 05%。
[0005] (2)止痛。腹痛患者210例，腹壓痛患者268例，經(jīng)該產(chǎn)品臨床治療后，消失率分別 為 88. 24%、93. 06〇/〇。
[0006] (3)止血。臨床腸粘膜出血或出血患者比例，治療后患者消失56例，治愈率 84. 85%〇
[0007] (4)消腫。臨床結(jié)腸粘膜充血患者305例，水腫259例，治療后經(jīng)檢查充血、水腫消 失率分別為 62. 62%、63. 73〇/〇。
[0008] (5)生肌斂瘡。臨床中有119例腸粘膜發(fā)現(xiàn)糜爛、潰瘍病患者，治療后腸鏡檢查消 失者109例。
[0009] (6)健脾益腸、溫腎助陽。臨床中乏力、腰酸膝軟、形寒肢冷、舌淡、脈虛患者經(jīng)治療 后，轉(zhuǎn)愈率最低在78%比例W上。
[0010] 上述臨床數(shù)據(jù)完全可W說明固本益腸制劑具有明顯的止瀉、止痛、止血、消腫、生 肌斂瘡、健脾益腸、溫腎助陽作用。
[0011] 固本益腸制劑收載于《中國藥典》2010年版，是由覺參、炒白術(shù)、補(bǔ)骨脂、款炒山藥、 黃茂、炮姜、酒當(dāng)歸、炒白巧、醋延胡索、爆木香、地偷炭、鍛赤石脂、兒茶、炙甘草等十四味中 藥材組成。臨床用于健脾溫腎，澀腸止瀉。常用于脾虛或脾腎陽虛所致慢性泄瀉，腹痛腹瀉， 大便清稀或有粘液及粘液血便，食少腹脹，腰酸乏力，形寒肢冷，舌淡苔白，脈虛。
[0012] 固本益腸制劑中的重要處方組成成分炒白巧，味苦酸、微寒，具有補(bǔ)血養(yǎng)血、平抑 肝陽、柔肝止痛、斂陰止汗等功效，其主要成份為巧藥巧。
[0013] 固本益腸制劑中的另一重要處方組成成分補(bǔ)骨脂，具有補(bǔ)腎壯陽，固精縮尿，腎虛 腰痛，小便頻數(shù)，小兒遺尿，腎漏，溫脾止瀉，納氣平喘等功效。主要治療腎虛陽瘦、腰膝酸軟 冷痛、腎虛遺精、遺尿、尿頻、脾腎陽虛引起的五更泄瀉、腎不納氣之虛寒喘咳等，其主要成 份為補(bǔ)骨脂素及異補(bǔ)骨脂素。
[0014] 現(xiàn)有的檢測(cè)固本益腸制劑中白巧含量的方法是： 用高效液相色譜儀測(cè)定，W十八焼基娃焼鍵合娃膠為填充劑，W甲醇-己睛-0. 17%磯 酸水溶液（2:13:85)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，理論培板數(shù)按巧藥巧峰計(jì)算應(yīng)不低于 7000。
[0015] 對(duì)照品溶液的制備；稱取巧藥巧對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含 50 yg的溶液，即得。
[0016] 供試品溶液的制備；取固本益腸制劑約Ig，加水50ml，超聲處理（250W、頻率 33KHZ)，搖勻，濾過，即得。
[0017] 測(cè)定方法；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 y 1，注入高效液相色譜 儀，測(cè)定。
[0018] 現(xiàn)有的固本益腸制劑中白巧含量方法的缺點(diǎn)是配制方法繁瑣，不易重復(fù)，不能同 時(shí)檢測(cè)補(bǔ)骨脂素及異補(bǔ)骨脂素。
[0019] 現(xiàn)有的補(bǔ)骨脂中有效成分補(bǔ)骨脂素及異補(bǔ)骨脂素的含量測(cè)定方法是： 用高效液相色譜儀測(cè)定，W十八焼基娃焼鍵合娃膠為填充劑；W甲醇一水巧5:45)為 流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為246nm。理論板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
[0020] 對(duì)照品溶液的制備取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，精密稱定，分別 加甲醇制成每1ml各含20 y g的溶液，即得。
[0021] 供試品溶液的制備取補(bǔ)骨脂粉約〇.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適 量，加熱回流提取2小時(shí)，放冷，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液， 即得。
[0022] 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5?10 y 1，注入液相色譜儀， 測(cè)定，即得。
[0023] 補(bǔ)骨脂含量測(cè)定方法中采用流動(dòng)相為甲醇-水，供試品溶液制備的采用索氏提取 器提取，極易出現(xiàn)因不同操作人員的差異而出現(xiàn)不同的結(jié)果，方法重現(xiàn)性不好；不能同時(shí)檢 測(cè)白巧巧。
[0024] W上現(xiàn)有的兩種檢測(cè)方法均不能同時(shí)檢測(cè)白巧藥材及補(bǔ)骨脂藥材中有效成分的 含量，并且在檢測(cè)巧藥巧和補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素過程中，在色譜柱中分離效果均不好，靈 敏度低，方法操作繁瑣，重復(fù)性及重現(xiàn)性差。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0025] 本發(fā)明的目的是在于提供一種固本益腸制劑中有效成分的含量檢測(cè)方法，采用此 方法可W同時(shí)檢測(cè)白巧及補(bǔ)骨脂的有效成分含量，用高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，采用流動(dòng) 相梯度洗脫的方法，巧藥巧、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素在色譜柱中分離效果好，靈敏度高，方法 操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性及重現(xiàn)性好。
[0026] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的： 一種固本益腸制劑中有效成分的含量檢測(cè)方法，該方法中含有白巧、補(bǔ)骨脂的含量測(cè) 定方法，其步驟如下：用高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，W十八焼基娃焼鍵合娃膠為填充劑，采 用梯度洗脫方法，W己膳為流動(dòng)相A, W磯酸溶液為流動(dòng)相B，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，理論培板 數(shù)按巧藥巧峰計(jì)算應(yīng)不低于7000,在流動(dòng)相洗脫過程中，在0?22分鐘使用含流動(dòng)相A為 12%和流動(dòng)相B為88%的混合液進(jìn)行洗脫，在22?40分鐘使用含流動(dòng)相A為35%和流動(dòng)相 B為65%的混合液進(jìn)行洗脫；對(duì)照品溶液的制備；精密稱取巧藥巧對(duì)照品、補(bǔ)骨脂素對(duì)照品、 異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，各對(duì)照品分別加醇類溶劑制成每1ml含50]i g、10]i g、10]i g的溶液； 供試品溶液的制備；取固本益腸制劑Ig，精密加入醇類溶劑，超聲處理，濾過，即得；測(cè)定方 法；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10y 1，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，W對(duì)照 品溶液和供試品溶液的溶液濃度與峰面積進(jìn)行計(jì)算；檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)：每ig固本益腸制劑中含白 巧W巧藥巧計(jì)算不得少于1. 60mg，每Ig固本益腸制劑中含補(bǔ)骨脂W補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂 素的總量計(jì)算不得少于0. 80mg。
[0027] 上述的己膳為色譜純己膳或分析純己膳。
[002引上述的流動(dòng)相B為質(zhì)量百分比濃度0. 05%?0. 15%的磯酸溶液。
[0029] 上述的流動(dòng)相B為質(zhì)量百分比濃度0. 08%?0. 12%的磯酸溶液。
[0030] 上述的流動(dòng)相B為質(zhì)量百分比濃度0. 1%磯酸溶液。
[0031] 上述的供試品溶液的制備步驟中精密加入醇類溶劑的量為30?70ml。
[0032] 上述的精密加入醇類溶液的量為50ml。
[0033] 上述的醇類溶劑為甲醇、己醇或甲醇與己醇體積比1:1的混合液。
[0034] 上述的醇類溶劑為甲醇。
[003引 上述的超聲處理為功率250W、頻率33KHZ。
[0036] 上述的超聲處理時(shí)間為30?50分鐘。
[0037] 上述的超聲處理時(shí)間為40分鐘。
[003引上述的固本益腸制劑為顆粒齊U、膠囊劑、片齊U、口服液體制齊U、針劑、外用貼膏劑、 凝膠劑、膜劑、氣霧劑、搔劑或町劑。
[0039] 由于采用上述技術(shù)方案，使得本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)和效果如下： 白巧的有效成份為巧藥巧，補(bǔ)骨脂的有效成份為補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素，W本發(fā)明檢 測(cè)方法，可W很好的兼顧巧藥巧、補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的紫外吸收，同時(shí)分時(shí)間段的梯度 洗脫可W很好的將H種有效成分分離，所W本方法所測(cè)得樣品能真實(shí)反映藥品的質(zhì)量。
[0040] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)方案的區(qū)別是，現(xiàn)有技術(shù)方案中流動(dòng)相的配制及提取方法過程 繁雜，不同時(shí)間、不同人員配制的流動(dòng)相、