稀釋溶液的各12個質(zhì)量濃度中，得到黃芩苷稀釋溶液 的質(zhì)量濃度為 640、320、160、80、40、20、10、5、2· 5、1· 25、0· 625、0· 3125 mg/L ;取后 9 個質(zhì)量 濃度并進(jìn)樣測定的峰面積與對應(yīng)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；各質(zhì)量濃度液體分別過〇. 22 μ m微 孔濾膜，進(jìn)樣5 UL進(jìn)行色譜分析；以峰面積J對濃度C(mg/L)進(jìn)行線性回歸，得黃芩苷工 作曲線：A=26. 564C-37. 311 r=0. 9988 ;黃芩苷在質(zhì)量濃度80?0. 3125 mg/L之間與峰面 積呈良好的線性關(guān)系，按照信噪比3/1，黃芩苷最低檢測質(zhì)量濃度為5. 056 μ g/L。
[0025] 2.3.4黃芩素工作曲線 在得到的四種單體混合對照品稀釋溶液的各12個質(zhì)量濃度中，得到黃芩素稀釋溶液 的質(zhì)量濃度為 145、72· 5、36· 25、18· 125、9· 0625、4· 531、2· 266、1· 133、0· 566、0· 283、0· 142、 0. 0708 mg/L ;取后9個質(zhì)量濃度并進(jìn)樣測定的峰面積與對應(yīng)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；各質(zhì)量濃 度液體分別過0.22 μπι微孔濾膜，進(jìn)樣5 μ L進(jìn)行色譜分析；以峰面積J對濃度C (mg/ U進(jìn)行線性回歸，得黃芩素工作曲線：A=88. 612C+12. 808 r=0. 9998 ;黃芩素在質(zhì)量濃度 18. 125?0.0708 mg/L之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系；按照信噪比3/1，黃芩素的最低檢 測質(zhì)量濃度為1. 029 μ g/L。
[0026] 2· 4色譜分離 分別對供試樣本中的馬錢素、芍藥苷、黃芩苷和黃芩素進(jìn)行色譜分離，結(jié)果見圖1、2?？?見，各組分的分離均能達(dá)到基線分離，峰型對稱，分離度好，且無明顯雜質(zhì)峰干擾。馬錢素 的保留時間為4. 464 min ;芍藥苷的保留時間為7. 423 min ;黃芩苷的保留時間為20. 906 min ;黃苳素的保留時間為24. 169 min。
[0027] 分別做供試樣本陰性對照試驗，結(jié)果見圖3、4、5。圖3是不加山茱萸的供試樣本陰 性對照色譜圖；圖4是不加黃芩的供試樣本陰性對照色譜圖。圖5是不加白芍的供試樣本 陰性對照色譜圖?？梢?，圖3沒有檢測到馬錢素的色譜峰；圖4沒有檢測到黃芩苷與黃芩素 的色譜峰。圖5沒有檢測到芍藥苷的色譜峰。說明在檢測這四種單體成分時沒有干擾峰出 現(xiàn)。
[0028] 2. 5精密度試驗 對馬錢素濃度為8. 542 mg/L、芍藥苷濃度為10. 729 mg/L、黃芩苷濃度為10 mg/L、黃 芩素濃度為2.266 mg/L的同一混合對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，分別測得相應(yīng)單體成分的 色譜峰面積數(shù)值，并經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，得到馬錢素 RSD為1. 69%、芍藥苷RSD為1. 56%、黃芩苷 RSDL 97%、黃芩素 RSD 為 L 89% (/?= 5)。
[0029] 2. 6重復(fù)性試驗 按照上述供試品的制備方法同時制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣1次，測得相應(yīng)單體成 分的色譜峰面積數(shù)值，并經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理法，得到馬錢素 RSD為1. 75%、芍藥苷RSD為1. 69%、 黃芩苷RSD為1. 88%、黃芩素 RSD為1. 90% (/?= 6)。
[0030] 2. 7平均加樣回收率試驗 在3份0. 9 mL含有馬錢素、芍藥苷、黃芩苷和黃芩素的混合供試樣本溶液中(檢測馬錢 素質(zhì)量濃度為1. 635 mg/L ;芍藥苷為I. 361mg/L ;黃芩苷為9. 238mg/L ;黃芩素為0· 953mg/ L)分別加入0,1 mL混合對照品溶液，馬錢素質(zhì)量濃度分別為10. 625、21. 25、42. 5 mg/L ;芍 藥苷質(zhì)量濃度分別為7. 812、15. 620、31. 25 mg/L ;黃芩苷質(zhì)量濃度分別為10. 625、21. 25、 42. 5 mg/L;黃芩素質(zhì)量濃度分別為6.406、12.813、25,625 mg/L。進(jìn)樣測得其質(zhì)量濃度， 計算其回收率，結(jié)果馬錢素平均回收率為101. 95%，RSD為1. 55% ;芍藥苷平均回收率為 98. 79%，RSD為1. 61% ;黃芩苷平均回收率為99. 01%，RSD為1. 77% ;黃芩素平均回收率為 99. 16%，RSD 為 L 79%。
[0031] 2.8穩(wěn)定性試驗 將同一供試樣本分別在〇、4、8、12、24、48 1!測定相關(guān)對應(yīng)的色譜值。結(jié)果馬錢素的1?0 為1. 46% ;芍藥苷的RSD為1. 64% ;黃芩苷的RSD為1. 59% ;黃芩素的RSD為1. 62%。顯示供 試樣本48 h內(nèi)樣本穩(wěn)定。
[0032] 2. 9供試樣本測定 分別測得5個供試樣本中馬錢素、芍藥苷、黃芩苷和黃芩素的含量，結(jié)果見表1。
【主權(quán)項】
1. 一種同時測定馬錢素芍藥苷黃芩苷與黃芩素單體質(zhì)量濃度的方法，其特征在于：包 括以下步驟： a. 樣品的預(yù)處理 干燥至恒重的山茱萸、白芍、黃芩，粉碎后過40目篩，按重量份數(shù)比分別稱取山茱萸 4. 5份、黃芩1份、白芍4. 5份，混合后加入100份的甲醇，超聲波提取，濾液過0. 22 y m微孔 濾膜，進(jìn)樣量3?9iU ; 供試樣品缺山茱萸陰性對照溶液的制備：精稱黃芩1份、白芍4. 5份，加入55份的甲 醇，提取、制備、進(jìn)樣量同上； 供試樣品缺黃芩陰性對照溶液的制備：精稱山茱萸1份、白芍1份，加入20份的甲醇， 提取、制備、進(jìn)樣量同上； 供試樣品缺白芍陰性對照溶液的制備：精稱山茱萸4. 5份、黃芩1份，加入55份的甲 醇，提取、制備、進(jìn)樣量同上； b. 高效液相色譜操作條件 色譜柱：150 X46 mm，5 iim，ZORBAX SB-C18;流動相為乙腈：0. 1%磷酸水溶液，梯度 洗脫：〇?15 min時，乙腈為14%?16. 5% ; 15?30 min時，乙腈為16. 5%?80% ;30?31 min時，乙腈為80%?14% ;波長在0?15 min時為236 nm，在15?30 min時為278 nm， 在30?31 min時為平衡；體積流量0? 8~1. 2 mL/min ;柱溫25~40 °C ; 超聲波提取的條件為2501，401(抱，201：，超生提取301^11; c. 工作曲線的制備 分別精密稱取馬錢素對照品〇. 82 mg、芍藥苷對照品1. 03 mg、黃芩苷對照品0. 96 mg、 黃芩素對照品〇. 29 mg，配成lmL的甲醇混合對照品溶液，并進(jìn)行倍比稀釋，共得到四種單 體混合對照品稀釋溶液的12個質(zhì)量濃度，取后9個質(zhì)量濃度進(jìn)樣測定的峰面積與對應(yīng)濃度 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；各質(zhì)量濃度液體分別過〇. 22 y m微孔濾膜，進(jìn)樣5 y L進(jìn)行色譜分析，以峰 面積J對濃度竊I行線性回歸，同時得到四種單體成分工作曲線； d. 四種單體成分的色譜分離及含量的測定 將經(jīng)過預(yù)處理的山茱萸、白芍、黃芩樣品進(jìn)行上機測定，對馬錢素、芍藥苷、黃芩苷、黃 芩素四種單體成分進(jìn)行色譜分離，并根據(jù)供試樣品中每個中藥單體成分對應(yīng)的峰面積由相 應(yīng)的工作曲線分別計算出四種單體成分的含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時測定馬錢素芍藥苷黃芩苷與黃芩素單體質(zhì)量濃 度的方法，其特征在于：四種單體混合對照品稀釋溶液中，得到馬錢素稀釋溶液的12個質(zhì) 量濃度分別為 546. 667、273. 333、136. 667、68. 333、34. 167、17. 083、8. 542、4. 270、2. 135、 1. 068、0. 534、0. 267mg/L ;取后9個質(zhì)量濃度并進(jìn)樣測定的峰面積與對應(yīng)濃度得到馬錢素 工作曲線：A=17. 850C+13. 141 r=0. 9997 ; 馬錢素在質(zhì)量濃度68. 333?0. 267 mg/L之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系；按照信噪 比3/1，馬錢素最低檢測質(zhì)量濃度為4. 865 y g/L。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時測定馬錢素芍藥苷黃芩苷與黃芩素單體質(zhì)量濃 度的方法，其特征在于：四種單體混合對照品稀釋溶液中，得到芍藥苷稀釋溶液的12個質(zhì) 量濃度分別為 686. 667、343. 333、17L 667、85. 833、42. 917、21. 458、10. 729、5. 365、2. 682、 1. 341、0. 671、0. 335mg/L ;取后9個質(zhì)量濃度并進(jìn)樣測定的峰面積與對應(yīng)濃度得到芍藥苷 工作曲線：A=14. 598C+12. 659 r=0. 9997 ; 芍藥苷在質(zhì)量濃度85. 833?0. 335 mg/L之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系；按照信噪 比3/1，芍藥苷最低檢測質(zhì)量濃度為9. 180 y g/L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時測定馬錢素芍藥苷黃芩苷與黃芩素單體質(zhì)量濃度 的方法，其特征在于：四種單體混合對照品稀釋溶液中，得到黃芩苷稀釋溶液的12個質(zhì)量 濃度分別為 640、320、160、80、40、20、10、5、2. 5、1. 25、0. 625、0. 3125 mg/L ;取后 9 個質(zhì)量濃 度并進(jìn)樣測定的峰面積與對應(yīng)濃度得到黃芩苷工作曲線：A=26. 564C-37. 311 r=0. 9988 ; 黃芩苷在質(zhì)量濃度80?0. 3125 mg/L之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系，按照信噪比 3/1，黃芩苷最低檢測質(zhì)量濃度為5.056 yg/L。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時測定馬錢素芍藥苷黃芩苷與黃芩素單體質(zhì)量濃 度的方法，其特征在于：四種單體混合對照品稀釋溶液中，得到黃芩素稀釋溶液的12個質(zhì) 量濃度分別 145、72.5、36.25、18. 125、9.0625、4.531、2.266、1. 133、0.566、0.283、0. 142、 0. 0708 mg/L ;取后9個質(zhì)量濃度并進(jìn)樣測定的峰面積與對應(yīng)濃度得到黃芩素工作曲線： A=88. 612C+12. 808 r=0. 9998 ； 黃芩素在質(zhì)量濃度18. 125?0.0708 mg/L之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系；按照信噪 比3/1，黃芩素的最低檢測質(zhì)量濃度為1. 029 y g/L。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種同時測定馬錢素芍藥苷黃芩苷與黃芩素單體質(zhì)量濃度的方法，屬于用色譜法分析材料。本發(fā)明分別制備山茱萸、白芍、黃芩混合樣品以及供試樣品陰性對照溶液，在流動相為乙腈：0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫：0～15 min時，乙腈為14%～16.5%；15～30 min時，乙腈為16.5%～80%；30～31 min時，乙腈為80%～14%；波長在0～15 min時為236 nm，在15～30 min時為278 nm，在30～31 min時為平衡的條件下，進(jìn)行工作曲線的制備和四種單體的色譜分離及含量的測定。本發(fā)明方法簡單快速，分離度佳，實驗數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，是一種良好的質(zhì)控檢測手段。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號】CN104597162
【申請?zhí)枴緾N201510052609
【發(fā)明人】劉宏勝, 王樹森, 張雅敏, 馮學(xué)泉, 沈中陽
【申請人】天津市第一中心醫(yī)院
【公開日】2015年5月6日
【申請日】2015年2月2日