Thermo-Fisher公司）；TSNAs，TSNAs-d4(純度；98%;同位素純度；99%，Toronto Research Qiemicals Inc.)，水為超純水。
[0037] 本發(fā)明依次采用醋酸錠水溶液為萃取液，禍旋振蕩萃取，気代內(nèi)標(biāo)定量，水相濾膜 過(guò)濾，UPLC-MS/MS測(cè)定等步驟對(duì)濾嘴中亞硝胺進(jìn)行測(cè)定，可快速、準(zhǔn)確、同時(shí)檢測(cè)出濾嘴中 4種TSNAs的含量，即N-亞硝基降煙堿（順腳、4-(甲基亞硝胺基化晚基）-1-了酬 (NNK)、N-亞硝基假木賊堿（NAB)和N-亞硝基新煙堿（NAT)的含量。
[003引 1、提取濾嘴中的分析物
[0039] 取5支收集的濾嘴，量取近嘴端1cm，將截下的濾嘴均勻分成4瓣，放入50血具塞 離屯、管，加入lOmLlOOmmol/L醋酸錠萃取液，并加入30 y L10 y g/mL気代內(nèi)標(biāo)，在2400轉(zhuǎn)/ 分鐘的條件下禍旋振蕩3min，靜置2min。上清液過(guò)0. 22 y m水相濾膜，取5 y L濾液引入 LC-MS/MS分離分析。
[0040] 2、LC-MS/MS測(cè)定 [00川（1)LC-MS/MS條件；
[0042]色譜條件；Atiantis UPLC邸H化ield RPC18 (50mmX 2. 1mm，1. 7um，美國(guó)Waters 公司）；流動(dòng)相A ;98 %甲酸氨水（體積分?jǐn)?shù)0. 1 % )和流動(dòng)相B ;2 %甲酸己膳（體積 分?jǐn)?shù)0. 1 % )初始流動(dòng)相體系，分析時(shí)間為5min，進(jìn)樣量為5 y L。梯度洗脫條件；0~ 2min，98%A~50%A;2~2.1min，50%A~10%A;2.1~3.5min，10%A~10%A;3.5~ 3. 51min, 10% A~98% A，3. 51~5. Omin, 98% A~98% A。流動(dòng)相流速為0. 8血/min。
[0043] 質(zhì)譜條件：電噴霧離子源，噴霧電壓（域2. 5kV;離子化溫度350°C ;霧化氣流量 1000L/化；錐孔氣（cone)流量50L/化；碰撞氣流量為0. 15ml/min ;碰撞氣為氣氣，其余氣 體為氮?dú)?；駐留時(shí)間為30msec，正離子MRM模式采集，監(jiān)測(cè)離子對(duì)及其相應(yīng)的碰撞能量（CE) 見(jiàn)表1。
[0044] 表1多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下四種煙草特有亞硝胺及其気代內(nèi)標(biāo)的部分質(zhì)譜參數(shù)
[0045]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種測(cè)定卷煙濾嘴中亞硝胺含量的方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟a)提取目標(biāo)物 截取近嘴端濾嘴放入萃取管，加入萃取液和內(nèi)標(biāo)；所述萃取管為離心管； 步驟b)渦旋振蕩與過(guò)濾 將離心管置于渦旋振蕩儀，渦旋振蕩，靜置；吸取上清液經(jīng)水相濾膜過(guò)濾，濾液待測(cè)； 步驟c)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制 用甲醇配置TSNAs標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，避光低溫保存；量取儲(chǔ)備液用甲醇稀釋定容，制得 TSNAs工作液； 用甲醇準(zhǔn)確配置TSNAs-d4內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，用內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液配制內(nèi)標(biāo)工作液，避光低溫保 存，使用前將其恢復(fù)到室溫； 用萃取液配制不同濃度的TSNAs標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； 步驟d)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定 吸取配制好的不同濃度的TSNAs標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，注入U(xiǎn)PLC-MS/MS系統(tǒng)，按內(nèi)標(biāo)法以峰 面積計(jì)算出樣品待測(cè)液中TSNAs含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定卷煙濾嘴中亞硝胺含量的方法，其特征在于，步驟a)中， 濾嘴截取長(zhǎng)度為lcm。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的測(cè)定卷煙濾嘴中亞硝胺含量的方法，其特征在于，步驟a)中， 選取5只濾嘴段，加入的lOOmmol/L的萃取液IOmL和10 y g/mL的內(nèi)標(biāo)30 y L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的測(cè)定卷煙濾嘴中亞硝胺含量的方法，其特征在于，所述萃 取液為醋酸銨水溶液。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定卷煙濾嘴中亞硝胺含量的方法，其特征在于，步驟b)中， 渦旋振蕩時(shí)間為3min，渦旋振蕩轉(zhuǎn)速為2400轉(zhuǎn)/min。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定卷煙濾嘴中亞硝胺含量的方法，其特征在于，步驟c)中， 避光低溫保存是以棕色玻璃瓶為容器，-20 °C下保存。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定卷煙濾嘴中亞硝胺含量的方法，其特征在于，所述步驟 d)具體操作為：吸取配制好的不同濃度的TSNAs標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，注入U(xiǎn)PLC-MS/MS系統(tǒng)，繪 制TSNAs的線性回歸方程，對(duì)純化稀釋后的樣品待測(cè)液進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得分析物與內(nèi)標(biāo)峰面 積的比值，代入一元線性回歸方程，求得樣品待測(cè)液中分析物的含量。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的測(cè)定卷煙濾嘴中亞硝胺含量的方法，其特征在于，步驟 d)中，UPLC-MS/MS系統(tǒng)的色譜條件：選用色譜柱為Atiantis UPLC BEH Shield RPC18,規(guī) 格為50mmX2. 1mm，I. 7um;流動(dòng)相A :98%甲酸氨水和流動(dòng)相B :2%甲酸乙腈；梯度洗脫條 件為：0 ~2min, 98% A ~50% A ;2 ~2. Imin, 50% A ~10% A ;2. 1 ~3. 5min, 10% A ~ 10% A ;3. 5 ~3. 51min, 10% A ~98% A，3. 51 ~5. Omin, 98% A ~98% A ;流動(dòng)相流速為 0. 8mL/min〇
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的測(cè)定卷煙濾嘴中亞硝胺含量的方法，其特征在于，所述甲酸 氨水體積分?jǐn)?shù)〇. 1 %，所述甲酸乙腈體積分?jǐn)?shù)〇. 1 %。
10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的測(cè)定卷煙濾嘴中亞硝胺含量的方法，其特征在于，步驟d) 中，串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)的條件為：電噴霧離子源，噴霧電壓（IS)2. 6kV;離子化溫度450°C ;霧化 氣流量lOOOL/Hr ;錐孔氣流量50L/Hr ;碰撞氣為氬氣，流量0. 15ml/min ;其余氣體為氮?dú)猓?駐留時(shí)間為30msec，正離子MRM模式采集。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)一種測(cè)定卷煙濾嘴中亞硝胺含量的方法，包括提取目標(biāo)物、渦旋振蕩與過(guò)濾、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定四個(gè)主要步驟。本發(fā)明與傳統(tǒng)的GC-TEA檢測(cè)方法比較，采用醋酸銨萃取，渦旋振蕩，過(guò)濾進(jìn)樣的方式，簡(jiǎn)化了前處理過(guò)程，提高了分析靈敏度；與現(xiàn)有的LC-MS/MS方法相比，用渦旋振蕩法振蕩時(shí)間明顯短于超聲萃取或振蕩萃取，提取效率增加，振蕩時(shí)間縮短了10倍。
【IPC分類(lèi)】G01N30-88, G01N30-06
【公開(kāi)號(hào)】CN104749310
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510172466
【發(fā)明人】陶曉秋, 熊巍, 楊雪, 張海燕, 黃玫
【申請(qǐng)人】中國(guó)煙草總公司四川省公司
【公開(kāi)日】2015年7月1日
【申請(qǐng)日】2015年4月13日