一種黃芪發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)防治糖尿量低下的研究方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種黃芪發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)防治糖尿量低下的研 究方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 現(xiàn)有的黃芪發(fā)酵產(chǎn)物的檢測(cè)以及對(duì)糖尿量底下的研究技術(shù)存在很多缺點(diǎn)，如研究 不夠深入，受體內(nèi)多種因素的影響，導(dǎo)致研究不確定因素多，因而誤差較大，不能真正的探 究出更深的原因。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種黃芪發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)防治糖尿量低下的研究方法，以解決 上述【背景技術(shù)】中提出的問(wèn)題。
[0004] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案： 一種黃芪發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)防治糖尿量低下的研究方法，具體步驟如下： (1) 藥物的配制 稱(chēng)取黃芪發(fā)酵產(chǎn)物溶于0. 9%的生理鹽水后配成混懸液，稱(chēng)取文迪雅粉碎后溶于0. 9% 的生理鹽水后配成混懸液，放-4°C冰箱中保存?zhèn)溆?；D-半乳糖用生理鹽水按500mg/Kg · d 配成30mg/ml，即用即配；胰島素注射液，臨用前用生理鹽水配制成0. 025U/mL ; (2) 使用劑量 根據(jù)臨床用藥情況，折算成小鼠使用劑量；黃芪發(fā)酵產(chǎn)物大、中、小劑量分別是60kg成 人日用藥量的20倍、10倍、5倍，并稀釋成相同的給藥容量；對(duì)照組文迪雅取60kg成人日用 藥量的10倍，并稀釋成相同的給藥容量； (3) 分組及給藥方法：動(dòng)物購(gòu)置后適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，按體重隨機(jī)分組；除正常對(duì)照組 灌服等容量生理鹽水并同時(shí)腹腔注射等量生理鹽水外，其余模型對(duì)照組、文迪雅組、黃芪發(fā) 酵產(chǎn)物小劑量組、黃芪發(fā)酵產(chǎn)物中劑量組、黃芪發(fā)酵產(chǎn)物大劑量組，每組12只小鼠，分別灌 服等容量配制溶液的同時(shí)腹腔注射D-gal 500mg/kg，每天1次共42天，檢測(cè)完血液各項(xiàng)指 標(biāo)后，處死并取右大腿股四頭肌肌肉-70°C下冷凍保存?zhèn)溆茫?(4) 觀察指標(biāo) 給藥期間每周稱(chēng)體重，共6周，每隔一周的體重進(jìn)行比較； ① 葡萄糖耐量試驗(yàn) 于末次給藥后禁食12h，剪尾取血，用血糖測(cè)試儀及試紙測(cè)定空腹血糖作為0時(shí)血糖， 然后灌胃4g/kg葡萄糖溶液，按同樣方法取血檢測(cè)30min、60min和120min時(shí)的血糖值； ② 胰島素耐量試驗(yàn) 喂養(yǎng)2天后禁食12h，剪尾取血作為0時(shí)血糖，然后皮下注射0. δμυ/kg胰島素，取血檢 測(cè) 15min、30min、60min、90min 和 120min 時(shí)血糖； ③ 胰島素抵抗指數(shù)測(cè)定及計(jì)算 繼續(xù)喂養(yǎng)2天后禁食12h，眼眶取血，于4000r/min離心15min分離血清，并儲(chǔ)存 于-70°C溫度下待測(cè)，采用放免法測(cè)定血清胰島素，并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)，計(jì)算公式，胰島 素抵抗指數(shù)=空腹胰島素 X空腹血糖/22. 5 ; (5)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理：對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用方 差分析對(duì)各組均數(shù)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。
[0005] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明方法能有效降低口服葡萄糖耐量 試驗(yàn)后的血糖，增加胰島素耐量試驗(yàn)后胰島素的敏感性，降低空腹胰島素和胰島素抵抗指 數(shù)水平，因此探究層次深，精確度高。
【附圖說(shuō)明】
[0006] 圖1為黃芪發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)D-gal誘導(dǎo)IGT小鼠胰島素抵抗的影響示意圖。
[0007] 圖2為黃芪發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)IGT小鼠骨骼肌GLUT-4基因表達(dá)水平的影響示意圖。
[0008] 圖中：1-正常對(duì)照組；2-模型對(duì)照組；3-文迪雅對(duì)照組；4-黃芪發(fā)酵產(chǎn)物小劑量 組；5-黃芪發(fā)酵產(chǎn)物中劑量組；6-黃芪發(fā)酵產(chǎn)物大劑量組。
【具體實(shí)施方式】
[0009] 下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完 整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于 本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他 實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0010] -種黃芪發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)防治糖尿量低下的研究方法，具體步驟如下： (1) 藥物的配制 稱(chēng)取黃芪發(fā)酵產(chǎn)物溶于〇. 9%的生理鹽水后配成混懸液，稱(chēng)取文迪雅粉碎后溶于0. 9% 的生理鹽水后配成混懸液，放-4°C冰箱中保存?zhèn)溆茫籇-半乳糖用生理鹽水按500mg/Kg · d 配成30mg/ml，即用即配；胰島素注射液，臨用前用生理鹽水配制成0. 025U/mL ; (2) 使用劑量 根據(jù)臨床用藥情況，折算成小鼠使用劑量；黃芪發(fā)酵產(chǎn)物大、中、小劑量分別是60kg成 人日用藥量的20倍、10倍、5倍，并稀釋成相同的給藥容量；對(duì)照組文迪雅取60kg成人日用 藥量的10倍，并稀釋成相同的給藥容量； (3) 分組及給藥方法：動(dòng)物購(gòu)置后適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，按體重隨機(jī)分組；除正常對(duì)照組 灌服等容量生理鹽水并同時(shí)腹腔注射等量生理鹽水外，其余模型對(duì)照組、文迪雅組、黃芪發(fā) 酵產(chǎn)物小劑量組、黃芪發(fā)酵產(chǎn)物中劑量組、黃芪發(fā)酵產(chǎn)物大劑量組，每組12只小鼠，分別灌 服等容量配制溶液的同時(shí)腹腔注射D-gal 500mg/kg，每天1次共42天，檢測(cè)完血液各項(xiàng)指 標(biāo)后，處死并取右大腿股四頭肌肌肉-70°C下冷凍保存?zhèn)溆茫?(4) 觀察指標(biāo) 給藥期間每周稱(chēng)體重，共6周，每隔一周的體重進(jìn)行比較； ①葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT) 于末次給藥后禁食12h，剪尾取血，用血糖測(cè)試儀及試紙測(cè)定空腹血糖（FBG)作為0時(shí) 血糖，然后灌胃4g/kg葡萄糖溶液，按同樣方法取血檢測(cè)30min、60min和120min時(shí)的血糖 值； ② 胰島素耐量試驗(yàn)（ITT) 喂養(yǎng)2天后禁食12h，剪尾取血作為O時(shí)血糖，然后皮下注射0. δμυ/kg胰島素，取血檢 測(cè) 15min、30min、60min、90min 和 120min 時(shí)血糖； ③ 胰島素抵抗指數(shù)（HOM-IR) 繼續(xù)喂養(yǎng)2天后禁食12h，眼眶取血，于4000r/min離心15min分離血清（儲(chǔ)存于-70°C 待測(cè)），采用放免法測(cè)定血清胰島素（FINS)，并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR)，計(jì)算公式： 胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR)=空腹胰島素（μLυ/mL) X空腹血糖（mmol/L)/22. 5 ; (5)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理：對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示（±S)， 采用方差分析對(duì)各組均數(shù)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，P〈〇. 05時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0011] 研究結(jié)果 ①一般觀察 模型對(duì)照組小鼠第4周開(kāi)始出現(xiàn)多飲、多食、多尿、體重增長(zhǎng)緩慢，毛發(fā)稀松欠光澤，精 神萎靡不振；其它各組與正常對(duì)照組相比，無(wú)明顯多飲、多食、多尿，體重增長(zhǎng)稍緩，毛發(fā)及 精神狀態(tài)無(wú)明顯改變；實(shí)驗(yàn)期間，除模型對(duì)照組和黃芪發(fā)酵產(chǎn)物中劑量組各有1只小鼠死 亡外，其余各組均無(wú)死亡。
[0012] ②實(shí)驗(yàn)各組小鼠體重的變化 與正常對(duì)照組比較，給藥前各組體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（/M). 05)，給藥后模型對(duì)照組 體重增加值明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（K0. 01);隨著時(shí)間的推移，各組小鼠的體重增 加，但模型對(duì)照組小鼠體重的增長(zhǎng)趨勢(shì)較其它各組緩慢；與模型對(duì)照組比較，給藥后文迪 雅對(duì)照組、黃芪發(fā)酵產(chǎn)物小、中、大劑量組體重增加值增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（代〇. 01); 與文迪雅對(duì)照組相比，給藥后黃芪發(fā)酵產(chǎn)物小、中、大劑量組體重增加值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 {m. 〇5) 〇
[0013] ③黃芪發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)D-gal誘導(dǎo)IGT小鼠 OGTT的影響 與正常對(duì)照組比較，給小鼠葡萄糖灌胃前各組空腹血糖（FBS)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0. 05)，給予葡萄糖灌胃120min后模型對(duì)照組2h血糖值9. 46±0. 91，為葡萄糖耐量低減 (IGT)狀態(tài)，說(shuō)明D-gal誘導(dǎo)小鼠 IGT模型成功； 由表1可以看出，葡萄糖負(fù)荷60min內(nèi)各組血糖值逐漸升高，60min達(dá)血糖峰值，模型對(duì) 照組血糖峰值明顯偏高，表明對(duì)葡萄糖的耐受量明顯降低；與模型對(duì)照組比較，文迪雅對(duì)照 組、黃芪發(fā)酵產(chǎn)物小、中、大劑量組2h血糖值降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（K0. 01)，