部分通過硅烷偶聯(lián)劑KH-550或其它偶聯(lián)劑鍵合在微球上，顯示穩(wěn)定的顏色。
[0022]實(shí)施例2:
將抗體修飾在彩球表面，制備單分散新型彩色免疫二氧化硅微球。
[0023]對(duì)合成好的單分散新型彩色二氧化硅微球進(jìn)行官能團(tuán)修飾及活化后，并對(duì)其表面相應(yīng)的抗體修飾，制備出色澤艷麗、靈敏度高、特異性較強(qiáng)的單分散新型彩色免疫微球。
[0024]對(duì)單分散新型彩色微球表面的硅羥基進(jìn)行氨基化修飾，將0.1g制備好的彩色微球加入到1mL的無水乙醇中，在燒杯中攪拌30min使其均勾分散在乙醇中，加入4%_5%的APTES或KH-550，反應(yīng)4h ;用無水乙醇清洗3次后再用超純水清洗3次，即可得到氨基化的單分散的新型彩色微球。
[0025]取上述氨基化的彩色微球在離心管中，用0.1M PBS緩沖液清洗3次后加入10%的戊二醛溶液，在燒杯中振蕩攪拌2h，再用0.1M PBS清洗3次，即可制備出戊二醛化的修飾有醛基的彩色微球；以0.1M的PBS (pH7.3)作為偶聯(lián)緩沖液，先用0.1M PBS溶液洗滌微球3次，震蕩均勻后分散到1mLPBS溶液中，并加入5-20μ? ^g/mL的阪崎腸桿菌抗體或腸炎沙門氏菌抗體，室溫下反應(yīng)4h。清洗后加入50ul甘氨酸，混合反應(yīng)15min，用PBS清洗3次后即可得到均勻修飾的單分散新型免疫彩色二氧化硅微球，用此免疫彩色二氧化硅微球可同時(shí)檢測(cè)出奶粉中多種致病菌，也可修飾其它抗體用于相應(yīng)樣本中致病菌的檢測(cè)。
[0026]實(shí)施例3:
用新型彩色免疫二氧化硅微球制備檢測(cè)單一樣本的新型彩色免疫層析試紙條。
[0027]將特異性抗原或抗體以條帶狀固定在試紙?jiān)O(shè)定位置(T線區(qū))上，標(biāo)記有抗體或者單克隆抗體的一種顏色的新型彩色免疫二氧化硅微球吸附在結(jié)合墊上。
[0028]在檢測(cè)樣本時(shí)，將待測(cè)樣品滴加在結(jié)合墊上，待測(cè)樣品中有抗原存在時(shí)就會(huì)與彩色免疫二氧化硅微球結(jié)合，在T線區(qū)會(huì)大量聚集，形成清晰的顯色條帶，而無抗原結(jié)合的彩球則分散在試紙條上繼續(xù)向前運(yùn)動(dòng)，到C線區(qū)聚集成顯色帶。也可用不同顏色的試紙條去檢測(cè)同一樣本，該樣本中若含有多種待測(cè)抗原時(shí)，可以實(shí)現(xiàn)用不同的試紙條對(duì)多樣本一次性檢測(cè)。
[0029]以早孕檢測(cè)試紙條為例，在試紙條的結(jié)合墊上涂覆新型彩色二氧化硅微球標(biāo)記的鼠抗β -HCG單克隆抗體濃度為1.0-2.0 mg/mL，涂覆量0.17-0.25ul/cm，
檢測(cè)區(qū)包被鼠抗a -HCG單克隆抗體的濃度為1.0-2.0mg/ml，包被參數(shù)為0.17-0.25 μ 1/cm ;所述控制區(qū)包被的抗鼠IgG多克隆抗體的濃度為1.0-2.0 mg/ml，包被參數(shù)為0.17-0.25ul/cm。當(dāng)所檢測(cè)樣本中含有促腺素人絨毛膜(hCG)時(shí)，樣本中的hCG抗原與彩色二氧化硅納米微球標(biāo)記的β-HCG單克隆抗體結(jié)合，在層析作用下，到達(dá)包被有a-hCG單克隆抗體的檢測(cè)區(qū)(T)，反應(yīng)形成三者的復(fù)合物，當(dāng)樣本中hCG濃度不小于20mlU/ml，彩色免疫二氧化硅納米微球在此處于大量聚積時(shí)，形成肉眼可見的可顯不同顏色條帶。在質(zhì)控線和檢測(cè)線均出現(xiàn)彩色條帶時(shí)，可以判斷樣本陽性，即受檢者懷孕。檢測(cè)線不出現(xiàn)顯色條帶，而質(zhì)控線出現(xiàn)顯色條帶則表示陰性，即受檢者未懷孕。若質(zhì)控線未出現(xiàn)顯色條帶，則試紙條無效。
[0030]實(shí)施例4
將大麻抗體、嗎啡抗體及其他毒品抗體分別以條帶狀固定在T線區(qū)不同位置上，標(biāo)記有相應(yīng)的抗體或單克隆抗體的新型彩色免疫微球分別染成不同顏色，然后吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待測(cè)樣本加到試紙條一端的結(jié)合墊上時(shí)，通過毛細(xì)作用向前移動(dòng)，溶解結(jié)合墊上的新型彩色免疫微球后相互反應(yīng)，再移動(dòng)至固定的抗原或抗體的區(qū)域時(shí)，待測(cè)物與相應(yīng)的新型彩色免疫微球的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測(cè)帶上，并形成一條條清晰的顯色帶，不同的檢測(cè)物可形成不同顏色的檢測(cè)帶，可通過肉眼清晰的觀察到顯色結(jié)果。即可在短時(shí)間內(nèi)對(duì)尿液中多種毒品進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，結(jié)合適當(dāng)?shù)年帯㈥栃詫?duì)照，可判斷受檢者是否吸食哪種毒品。通過彩色試紙上的顯色條數(shù)和顯示的特定顏色，不僅可以判斷所檢測(cè)的樣本中含有幾種檢測(cè)物而且可以準(zhǔn)確判定是何種檢測(cè)物，實(shí)現(xiàn)了一次性對(duì)多種被測(cè)物的同時(shí)檢測(cè)。
[0031]由于彩色二氧化硅微球具有較好的生物活性，可以很好地吸附核酸，還可制備新型彩色核酸檢測(cè)試紙產(chǎn)品。
[0032]本發(fā)明雖然已以較佳實(shí)施例公開如上，但其并不是用來限定本發(fā)明，任何本領(lǐng)域技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，都可以利用上述揭示的方法和技術(shù)內(nèi)容對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案做出可能的變動(dòng)和修改，因此，凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案的內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所做的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化及修飾，均屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.新型免疫彩色二氧化硅微球的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟a，將0.1g單分散彩色二氧化硅微球均勻分散在1mL無水乙醇中，然后加入硅烷偶聯(lián)劑APTES，進(jìn)行反應(yīng)； 步驟b，反應(yīng)后用無水乙醇清洗后再用超純水清洗，得到氨基化的彩色二氧化硅微球； 步驟c，將氨基化的彩色二氧化硅微球放入離心管，用0.1M PBS緩沖液清洗后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的戊二醛溶液，振蕩攪拌，再用0.1M PBS緩沖液清洗，得到戊二醛化的修飾有醛基的彩色二氧化硅微球； 步驟d，以0.1M的PBS溶液為偶聯(lián)緩沖液，先用0.1M PBS緩沖液洗滌步驟c得到的微球，震蕩均勻后分散到0.1M的PBS溶液中，并加入抗體進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)后清洗，再加入甘氨酸，混合反應(yīng)；用緩沖液清洗后得到新型免疫彩色二氧化硅微球。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟a中，彩色二氧化硅微球的制備方法包括以下步驟:以triton-100為表面活性劑，正己醇為助表面活性劑，己烷為有機(jī)溶劑，混合振蕩至澄清，加入一定量水為分散相，形成微乳液，然后向微乳液中加入正硅酸乙酯，水解縮合形成微球，在反應(yīng)過程中加入氨水為催化劑，同時(shí)加入染料對(duì)微球進(jìn)行染色形成彩色二氧化娃微球，加入娃燒偶聯(lián)劑在微球表面引入氨基，形成單分散彩色二氧化娃微球。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟a中反應(yīng)時(shí)間為4h。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟a中每克單分散彩色二氧化硅微球分散于10mL的無水乙醇中。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟b中，用無水乙醇清洗三次后再用超純水清洗三次。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟c中，振蕩攪拌2h。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟d中，加入抗體反應(yīng)時(shí)間為4h，再加入甘氨酸，混合反應(yīng)15分鐘。8.一種新型彩色快速檢測(cè)試紙，其特征在于，所述試紙上吸附有至少一種如權(quán)利要求新型免疫彩色二氧化硅微球。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試紙，其特征在于，所述不同顏色的二氧化硅微球上標(biāo)記有不同抗體。10.一種新型彩色快速檢測(cè)試紙的制備方法，其特征在于，將特異性抗原或抗體以條帶狀固定在試紙?jiān)O(shè)定位置上，標(biāo)記有抗體或者單克隆抗體的新型彩色免疫二氧化硅微球吸附在結(jié)合墊上。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種新型免疫彩色二氧化硅微球的制備方法及應(yīng)用該新型免疫彩色二氧化硅微球制備的彩色快速檢測(cè)試紙和該試紙的制備方法。本發(fā)明的新型彩色免疫微球具有制作簡(jiǎn)單，生物活性好，粒徑規(guī)則可控，顏色鮮艷，色澤穩(wěn)定，分散性好，靈敏度高，分散性好且能顯色多種顏色等優(yōu)點(diǎn)，用其開發(fā)的產(chǎn)品新型彩色快速檢測(cè)試紙產(chǎn)品具有檢測(cè)速度快、操作方便、價(jià)格低廉、不僅可以對(duì)單一待測(cè)物的進(jìn)行快速檢測(cè)，也可實(shí)現(xiàn)一次性對(duì)多種待測(cè)物的同時(shí)檢測(cè)。
【IPC分類】G01N33/531
【公開號(hào)】CN105137060
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510493408
【發(fā)明人】楊磊
【申請(qǐng)人】楊磊
【公開日】2015年12月9日
【申請(qǐng)日】2015年8月12日