復(fù)方龍葵消炎片的高效液相色譜檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物檢測(cè)領(lǐng)域。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種復(fù)方龍葵消炎片的高效 液相色譜檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 復(fù)方中藥是中醫(yī)臨床用藥的主要形式，是中醫(yī)藥學(xué)特色與精髓。中藥是一個(gè)由多 成分、多因素構(gòu)成的復(fù)雜體系，其化學(xué)成分多樣性與復(fù)雜性是其療效物質(zhì)基礎(chǔ)，建立符合中 醫(yī)藥特點(diǎn)的現(xiàn)代質(zhì)量控制體系，攻克中藥質(zhì)量分析與評(píng)價(jià)難題，改進(jìn)中藥現(xiàn)有質(zhì)量控制方 法已成為人們積極研究課題。
[0003] 建立對(duì)中藥的質(zhì)量控制體系必須立足于中藥特色。復(fù)方中藥整體作用特點(diǎn)決定了 中藥不同于西藥。中藥質(zhì)量控制方法應(yīng)對(duì)多個(gè)有效成分進(jìn)行控制。只有這樣，所建立的質(zhì) 量控制體系才能真正達(dá)到控制中藥質(zhì)量、保證中藥用藥安全有效目的。中藥質(zhì)量控制應(yīng)從 簡(jiǎn)單的單個(gè)成分含量測(cè)定轉(zhuǎn)向以先進(jìn)技術(shù)為手段，多成分、多指標(biāo)含量測(cè)定。
[0004] 復(fù)方龍葵消炎片主要由龍葵、天胡荽、猴耳環(huán)制成，其藥用活性成分有沒(méi)食子酸、 槲皮素、山柰素、澳洲茄堿、澳洲茄邊堿等，具有清熱解毒、止咳祛痰、消腫散結(jié)止痛功效，加 強(qiáng)抗菌、抗病毒、抗炎效果，提高免疫力，利尿止瀉，主治體表、呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、泌尿系 統(tǒng)等感染及炎癥。
[0005] 復(fù)方龍葵消炎片作為復(fù)方中藥，僅從外觀性狀、簡(jiǎn)單鑒別和單一成分含量測(cè)定等 角度對(duì)復(fù)方龍葵消炎片進(jìn)行質(zhì)量控制，顯然不能全面準(zhǔn)確說(shuō)明其內(nèi)在質(zhì)量，不能保證其療 效。要控制其功效，必須根據(jù)中藥多組分、多靶點(diǎn)、多途徑作用特點(diǎn)，對(duì)其物質(zhì)整體予以控 制，從整體上有效地表征中藥的質(zhì)量，建立安全、有效、穩(wěn)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系。
[0006] 復(fù)方龍葵消炎片是新研發(fā)處理的藥物，且復(fù)方龍葵消炎片的原料包含3味中藥且 中藥成分之間存在復(fù)雜的相互作用，導(dǎo)致建立全面、有效地反映復(fù)方龍葵消炎片內(nèi)在質(zhì)量 和療效的有效成分檢測(cè)方法存在較大難度，因此，目前本領(lǐng)域存在對(duì)能夠全面表征復(fù)方龍 葵消炎片這種藥物的檢測(cè)方法的需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種復(fù)方龍葵消炎片的檢測(cè)方法，該方 法能夠較全面檢測(cè)復(fù)方龍葵消炎片的藥物活性組分的含量，從而表征和控制其內(nèi)在質(zhì)量。
[0008] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種復(fù)方龍葵消炎片的高效液相色譜檢測(cè)方 法，所述的復(fù)方龍葵消炎片主要由龍葵、天胡荽、猴耳環(huán)制成，所述檢測(cè)方法包括采用高效 液相色譜法檢測(cè)所述復(fù)方龍葵消炎片中的沒(méi)食子酸、槲皮素、山柰素、澳洲茄堿、澳洲茄邊 堿。
[0009] 優(yōu)選的是，采用所述的檢測(cè)方法檢測(cè)復(fù)方龍葵消炎片中的沒(méi)食子酸、槲皮素、山柰 素的含量包括以下步驟：
[0010] 1)色譜條件：
[0011] 色譜柱：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；
[0012] 流動(dòng)相：甲醇和磷酸溶液的混合液，磷酸溶液的體積分?jǐn)?shù)為0.4%，甲醇和磷酸水 的體積比為55:45 ;
[0013] 流速：lmL/min;
[0014] 柱溫：25°C;
[0015] 梯度波長(zhǎng)檢測(cè)：0~15min，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm;15~30min，檢測(cè)波長(zhǎng)為362nm;
[0016] 2)制備混合對(duì)照溶液：精密稱取沒(méi)食子酸對(duì)照品、槲皮素對(duì)照品、山奈素對(duì)照品 適量，加甲醇制成含沒(méi)食子酸〇. 5mg/mL，槲皮素lmg/mL、山奈素0. 5mg/mL的對(duì)照品混合溶 液；
[0017] 3)制備供試品溶液：取本品粉末約2g，精密稱定，精密加入甲醇100ml，稱定重量， 回流提取lh，放冷，補(bǔ)足減失重量，過(guò)濾，精密量取濾液50mL，加鹽酸15mL，水浴回流加熱和 水解處理2h，過(guò)濾，濾液置1OOmL量瓶中，用少許甲醇洗滌，洗液并入同一量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至 刻度，搖勻，用0. 45nm微孔濾膜濾過(guò)，取其濾液；
[0018] 4)測(cè)定：分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20yL，注入高效液相色譜儀 后進(jìn)彳丁測(cè)定；
[0019] 5)計(jì)算：理論塔板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算，應(yīng)不低于5000。記錄峰面積，采用外標(biāo)法計(jì) 算沒(méi)食子酸、槲皮素、山柰素的含量。
[0020] 優(yōu)選的是，采用所述的檢測(cè)方法檢測(cè)復(fù)方龍葵消炎片中的澳洲茄堿、澳洲茄邊堿 含量包括以下步驟：
[0021] 1)色譜條件：
[0022] 色譜柱：色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；
[0023] 流動(dòng)相：乙腈和.即04溶液的混合液，Na2即04為2mol/L，乙腈和Na2HP04溶液的 體積比為39:61 ;
[0024] 流速：lmL/min;
[0025]檢測(cè)波長(zhǎng)：205nm;
[0026] 柱溫：25°C;
[0027] 2)制備混合對(duì)照溶液：精密稱取澳洲茄堿對(duì)照品、澳洲茄邊堿對(duì)照品適量，加甲 醇制成含澳洲前堿lmg/mL、澳洲前邊堿lmg/mL的對(duì)照品混合溶液；
[0028] 3)制備供試品溶液：精密稱定復(fù)方龍葵消炎片粗粉2g，精密加入100mL甲醇，精密 稱定，回流提取lh，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液50mL，蒸干， 加1 %鹽酸溶液50mL溶解，蒸干，用少許甲醇洗滌，洗液并入10mL量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖 勻，用0. 45nm微孔濾膜濾過(guò)，取其濾液；
[0029] 4)測(cè)定：分別精密吸取對(duì)照品混合溶液和供試品溶液各20yL，注入高效液相色 譜儀后進(jìn)行測(cè)定；
[0030] 5)計(jì)算：理論塔板數(shù)按澳洲茄堿峰計(jì)算，應(yīng)不低于5000。記錄峰面積，采用外標(biāo)法 計(jì)算澳洲茄堿、澳洲茄邊堿的含量。
[0031 ] 優(yōu)選的是，采用所述的檢測(cè)方法檢測(cè)復(fù)方龍葵消炎片中的沒(méi)食子酸、槲皮素、山柰 素的含量的步驟1)所述的等梯度波長(zhǎng)檢測(cè)還可以采用等波長(zhǎng)檢測(cè)，波長(zhǎng)為254nm。
[0032] 優(yōu)選的是，采用所述的檢測(cè)方法檢測(cè)復(fù)方龍葵消炎片中的沒(méi)食子酸、槲皮素、山柰 素的含量的步驟1)所述的流動(dòng)相還可以是：流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為0. 4%磷酸溶液， 進(jìn)行梯度洗脫，所述梯度洗脫程序如下，其中流動(dòng)相比例均為體積百分比：
[0033] 0~13min，流動(dòng)相A為：2%，流動(dòng)相B為：88% ;
[0034] 13~14min，流動(dòng)相A為：2%~52%，流動(dòng)相B為：48%~88% ;
[0035] 14~30min，流動(dòng)相A為：52%，流動(dòng)相B為：48% ;
[0036] 30min以上，流動(dòng)相A為：55%，流動(dòng)相B為：45%。
[0037] 優(yōu)選的是，采用所述的檢測(cè)方法同時(shí)檢測(cè)復(fù)方龍葵消炎片中的澳洲茄堿、澳洲茄 邊堿含量的步驟1)所述磷酸溶液可以選用冰醋酸、甲酸、三氯乙酸中的任意一種酸性物質(zhì) 來(lái)代替。
[0038] 優(yōu)選的是，采用所述的檢測(cè)方法同時(shí)檢測(cè)復(fù)方龍葵消炎片中的澳洲茄堿、澳洲茄 邊堿含量的步驟1)所述的流動(dòng)相還可以是：流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為1 %體積分?jǐn)?shù)磷 酸溶液，進(jìn)行梯度洗脫，所述梯度洗脫程序如下，其中流動(dòng)相比例均為體積百分比：
[0039] 0~5min，流動(dòng)相A為：22%，流動(dòng)相B為：78% ;
[0040] 5~20min，流動(dòng)相A為：22%~25%，流動(dòng)相B為：78%~75% ;
[0041] 20~25min，流動(dòng)相A為：25%，流動(dòng)相B為：75% ;
[0042] 25min以上，流動(dòng)相A為：20%，流動(dòng)相B為：80%。
[0043] 優(yōu)選的是，采用所述的檢測(cè)方法同時(shí)檢測(cè)復(fù)方龍葵消炎片中的澳洲茄堿、澳洲茄 邊堿含量的步驟1)所述的Na2HP04可以選用氨水、二乙胺、三乙胺、NaH丨04和Na 3P04中的任 意一種物質(zhì)來(lái)代替。
[0044] 本發(fā)明根據(jù)所述消炎片中沒(méi)食子酸、槲皮素、山柰素等酚酸類物質(zhì)和澳洲茄邊堿、 澳洲茄堿等生物堿這兩類進(jìn)行分步檢測(cè)，這種檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果精確度高，而且還可以提 高檢測(cè)速率。并將其用于所述消炎片的含量測(cè)定，該方法保證所述消炎片質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的 準(zhǔn)確性和先進(jìn)性，可作為所述消炎片質(zhì)量控制的重要指標(biāo)。在檢測(cè)復(fù)方龍葵消炎片中的沒(méi) 食子酸、槲皮素、山柰素等酚酸類物質(zhì)的時(shí)候，采用甲醇和磷酸溶液的混合液進(jìn)行洗脫。由 于甲醇的洗脫能力較強(qiáng)，加入〇. 4%體積分?jǐn)?shù)的磷酸溶液以后，在檢測(cè)復(fù)方龍葵消炎片中的 沒(méi)食子酸、槲皮素、山柰素的時(shí)候，可以較好的調(diào)整流動(dòng)相極性，提高色譜峰出峰的質(zhì)量，例 如：減少拖尾、峰型變窄、吸收峰值增高等。同時(shí)，還可以使甲醇洗脫能力得到提高，從而可 以準(zhǔn)確地檢測(cè)復(fù)方