通過高效液相色譜法分離測定雷美替胺及其雜質(zhì)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物分析領(lǐng)域，具體涉及通過高效液相色譜法分離測定雷美替胺及其 雜質(zhì)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 雷美替胺（Ramelteon)是日本武田公司燈AKEDA)開發(fā)的用于治療難W入睡型失 眠癥和慢性失眠和短期失眠的新分子藥物，是目前唯一上市的用于治療難入睡型失眠癥權(quán) 黑素受體激動劑，對慢性失眠和短期失眠也有確切療效。由于本品無依賴性和藥物濫用傾 向，F(xiàn)DA將其列為不受管制的催眠藥物。雷美替胺于2005年在美國上市，商品名；R0ZEREM， 2008年在日本上市，商品名：口書k厶滾。
[0003] 雷美替胺的化學(xué)名為（巧-N-巧-α，6,7,8-四氨-2H-巧并-[5,4-b]巧喃-8-基） 己基]丙醜胺，分子式；CieH2iN〇2,結(jié)構(gòu)式如下：
[0004]
[0005] 雷美替胺的常見不良反應(yīng)為頭痛、疲勞、嗜睡，可能由其中的雜質(zhì)引起。雷美替胺 合成過程中的起始原料、中間體、終產(chǎn)物類似物及降解產(chǎn)物等均可能成為雜質(zhì)，從而影響產(chǎn) 品的質(zhì)量。因此，對原料藥及制劑進行質(zhì)量控制是藥物研發(fā)工作中的重點和難點。
[0006] 雷美替胺相關(guān)的雜質(zhì)包括；LM-1、S-IBU(S-布洛芬）、雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì) 4、雜質(zhì)5、雜質(zhì)6、雷美替胺對映異構(gòu)體，其結(jié)構(gòu)式和化學(xué)式等信息如下表所示：
[0007]
[0008]
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[0009] 雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4、雜質(zhì)5、雜質(zhì)6、對映異構(gòu)體為雷美替胺合成過程中 較易引入的雜質(zhì)，LM-US-IBU為合成雷美替胺的起始原料。對映異構(gòu)體采用手性色譜條件 分離控制。因此，對雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4、雜質(zhì)5、雜質(zhì)6、LM-1、S-I腳送八個相關(guān) 物質(zhì)的定量控制具有重要意義。
[0010] 專利申請CN200580038847. 8公開了光學(xué)活性的胺衍生物的制備方法，并記載了 WpH7. 0磯酸鹽緩沖液-己臘體系為流動相用高效液相色譜法分離測定原料藥雷美替胺中 的雜質(zhì)1和雜質(zhì)2的含量。
[0011] 文獻"St曰bility-indic曰tinguplcmethodfordetermin曰tionoframelteon曰nd theirdegr曰d曰tionproductsin曰ctiveph曰rm曰ceutic曰 1ingredients,Journ曰 1ofLiquid Qiromatography&RelatedTechnologies, 2012, 35 巧）：688-699"公開了利用超高效液相色 譜法對雷美替胺中的雜質(zhì)進行定性推斷和定量分析的方法，涉及的雜質(zhì)包括未成鹽的LM-1 及合成LM-1的工藝路線中的各步中間體等4個雜質(zhì)。
[0012] 目前尚未見關(guān)于雷美替胺與上述八個雜質(zhì)的分離測定方法的文獻報道，尋找一種 能夠分離測定雷美替胺與該八個雜質(zhì)的方法對于控制雷美替胺的質(zhì)量、提高藥品療效、降 低毒副作用迫在眉睫。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種通過高效液相色譜法分離測定雷美替胺及 其雜質(zhì)的方法W克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，可W對雷美替胺原料藥或其制劑進行相關(guān)雜質(zhì)的分 離測定。
[0014] 本發(fā)明是通過W下技術(shù)手段實現(xiàn)的：
[0015] 一種通過高效液相色譜法分離測定雷美替胺及其雜質(zhì)的方法，采用W下方式進 行：
[0016] 色譜條件；W十八烷基娃焼鍵合硅膠為填充劑，己胺溶液-己臘為流動相進 行梯度洗脫，檢測波長210~310皿，柱溫20~45°C，流動相速度0. 5~2.Oml/min，其中Η 己胺溶液為含體積分數(shù)0. 1 %的Η己胺并用磯酸調(diào)節(jié)抑值至3. 0~7. 5;
[0017] 樣品溶液配制：采用極性溶劑分別配制含雷美替胺及其雜質(zhì)各0. 01~2.Omg/ml 的溶液；
[0018] 測定；將溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進行分析。
[0019] 所述的通過高效液相色譜法分離測定雷美替胺及其雜質(zhì)的方法，其中所述梯度 洗脫為初始流動相中0. 1%H己胺溶液和己臘的體積比為63:37~73:27,最終流動相中 0. 1%H己胺溶液和己臘體積比為63:37~73:27。
[0020] 進一步，流動相中0. 1 %H己胺溶液和己臘的體積比隨時間變化如下：
[0021]
[0022]。
[0023]W上所述的通過高效液相色譜法分離測定雷美替胺及其雜質(zhì)的方法，檢測波長優(yōu) 選 230nm。
[0024]W上所述的通過高效液相色譜法分離測定雷美替胺及其雜質(zhì)的方法，柱溫優(yōu)選 30 〇C。
[0025]W上所述的通過高效液相色譜法分離測定雷美替胺及其雜質(zhì)的方法，流動相速度 優(yōu)選 1.Oml/min。
[0026]W上所述的通過高效液相色譜法分離測定雷美替胺及其雜質(zhì)的方法，樣品溶液配 巧陳用的極性溶劑優(yōu)選甲醇、50 %己臘水溶液或己臘。
[0027]W上所述的通過高效液相色譜法分離測定雷美替胺及其雜質(zhì)的方法，樣品溶液配 制成含雷美替胺1.Omg/ml,雜質(zhì)各0.Olmg/ml的溶液。
[0028] 本發(fā)明的有益效果；采用本發(fā)明的方法控制雷美替胺中的雜質(zhì)含量，可W實現(xiàn)雷 美替胺與各雜質(zhì)的完全分離，其與各雜質(zhì)的分離度均大于2. 0,理論板數(shù)按雷美替胺峰計 算達到7139。且檢測靈敏度非常高，雷美替胺、LM-1、S-IBU、雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì) 4、雜質(zhì) 5、雜質(zhì) 6 的檢測限分別為 0. 4ng(0. 004% )、0. 4ng(0. 004% )、0. 2ng(0. 002% )、 0. 4ng(0. 004% )、0. 4ng(0. 004% )、0. 4ng(0. 004% )、0. 4ng(0. 004% )、0. 4ng(0. 004% )、 0. 19ng(0. 002% )。利用本發(fā)明的方法可W準確的進行原料藥雷美替胺及其制劑的有關(guān)物 質(zhì)的定量分析，從而保證了雷美替胺及其制劑的質(zhì)量可控性。
【附圖說明】
[0029]圖1 ;實施例1雷美替胺及其雜質(zhì)分離的圖譜；
[0030] 圖2 ;實施例1雷美替胺雜質(zhì)測定的圖譜；
[0031] 圖3 ;實施例1雷美替胺片雜質(zhì)測定的圖譜；
[0032] 圖4;實施例1雷美替胺片雜質(zhì)測定的空白輔料圖譜；
[003引圖5;實施例2雷美替胺系統(tǒng)適用性溶液分離的圖譜；
[0034] 圖6 ;實施例2雷美替胺雜質(zhì)測定的圖譜；
[0035] 圖7 ;實施例2雷美替胺片雜質(zhì)測定的圖譜；
[0036] 圖8;實施例2雷美替胺片雜質(zhì)測定的空白輔料圖譜；
[0037]圖9 ;實施例3雷美替胺系統(tǒng)適用性溶液分離的圖譜；
[0038] 圖10;實施例3雷美替胺雜質(zhì)測定的圖譜；
[0039]圖11 ;實施例3雷美替胺片雜質(zhì)測定的圖譜；
[0040] 圖12;實施例3雷美替胺片雜質(zhì)測定的空白輔料圖譜；
[0041]圖13 ;參考例1雷美替胺及其雜質(zhì)分離的圖譜。
【具體實施方式】
[0042]W下實施例僅對本
【發(fā)明內(nèi)容】
做進一步說明，并不限定本發(fā)明。
[004引 W下實施例所用的LM-1購自上海瞧源化學(xué)科技有限公司；S-I腳購自薩恩化學(xué)技 術(shù)（上海）有限公司；雷美替胺對照品、雷美替胺供試品、雷美替胺片、雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì) 3、雜質(zhì)4、雜質(zhì)5、雜質(zhì)6均為南京長澳醫(yī)藥科技有限公司自制。
[0044] 實施例1
[0045] 儀器；戴安U3000PDA型高效液相色譜儀；
[0046]色譜柱；AgilentZ0RBAXSB-AQC18 色譜柱（4. 6mmX250mm，5μm);
[0047]流動相；流動相A為0. 1%H己胺溶液（用磯酸調(diào)節(jié)p冊.0)，流動相B為己臘，照 下表進行梯度洗脫：
[0048]
[0049]柱溫；30C;
[0050]流速；1.Oml/min;
[0051]檢測波長；230nm。
[0052] 定位溶液的配制：取LM-US-IBU、雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4、雜質(zhì)5、雜質(zhì)6、雷 美替胺對照品各適量，分別加50%己臘溶液溶解并稀釋制成每1ml中含Img的溶液，作為定 位溶液。
[0053] 雷美替胺與雜質(zhì)混合溶液的配制；取雷美替胺供試品約lOmg，精密稱定，置10ml 量瓶中，精密加入上述各雜質(zhì)定位溶液0.1ml，再用50 %己臘溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。
[0054] 雷美替胺系統(tǒng)適用性溶液的配制；取雜質(zhì)6對照品約lOmg，置10ml量瓶中，加 50%己臘水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為母液。取雷美替胺對照品約lOmg，置10ml量 瓶中，精密加入上述母液0.1ml，加50 %己臘水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
[0055] 雷美替胺供試品溶液的配制：精密稱取雷美替胺供試品適量，用50 %己臘溶液溶 解并稀釋制成1.Omg/ml的溶液。
[0056] 雷美替胺片供試品溶液的配制；精密稱取雷美替胺片粉適量，用50%己臘溶液溶 解并稀釋制成1.Omg/ml的溶液，過0. 45μm的有機濾膜，即得。
[0057] 雷美替胺片空白輔料溶液的配制；精密稱取雷美替胺制劑的空白輔料適量，用 50%己臘溶液溶解并稀釋制成相應(yīng)濃度的溶液，過0. 45μm的有