機濾膜，即得。
[005引測定；取定位溶液各10μΙ注入高效液相色譜化記錄色譜圖，結(jié)果S-IBU、LM-1、 雜質(zhì)1、雜質(zhì)6、雷美替胺、雜質(zhì)2、雜質(zhì)4、雜質(zhì)5和雜質(zhì)3依次出峰，保留時間分別為 4. 530min、7. 103min、9. 813min、ll. 533min、12. 157min、16. 053min、33. 603min、37. 217min、 37. 677min。取雷美替胺與雜質(zhì)的混合溶液10μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果 見圖1，雷美替胺峰與雜質(zhì)6峰和雜質(zhì)2峰的分離度分別為2. 06和9. 39,其他相鄰雜質(zhì)峰間 分離度依次為14. 15、7. 72、5. 71、58. 52、18. 44、1. 81，均符合要求。取雷美替胺供試品溶液 10μ1注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見圖2,按自身對照法計算，雷美替胺的總雜 質(zhì)含量為0. 10 %，雜質(zhì)6含量為0. 03 %，其它各已知雜質(zhì)均未檢出。取雷美替胺片制劑供試 品溶液和空白輔料溶液各10μ1分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果分別見圖3和 4,結(jié)果顯示空白輔料無干擾，按自身對照法計算，雷美替胺片的總雜質(zhì)含量為0. 14%，雜質(zhì) 6含量為0.03%，其它各已知雜質(zhì)均未檢出。所W本法可W用于雷美替胺原料及制劑的質(zhì) 量控制。
[00則 實施例2
[0060] 儀器；戴安U3000高效液相色譜儀；
[0061] 色譜柱；DikmaClS色譜柱（4. 6mmX250mm, 5μm);
[006引流動相；流動相A為0. 1 %立己胺溶液（用磯酸調(diào)節(jié)抑3. 0)，流動相B為己臘，照 下表進行梯度洗脫：
[0063]
[0064] 柱溫；30C;
[0065] 流速；1.Oml/min;
[0066] 檢測波長；230nm。
[0067] 溶液配制方法及測定方法照實施例1進行，雷美替胺系統(tǒng)適用性溶液、雷美替胺 供試品溶液、雷美替胺片溶液、雷美替胺片空白輔料溶液的圖譜分別見圖5、6、7、8。
[006引 實施例3
[0069] 儀器；Agilentl200HPLC;
[0070] 色譜柱：Phenomenexluna-C18 色譜柱（4. 6mmX250mm, 5μm);
[0071] 流動相；流動相A為0. 1%Η己胺溶液（用磯酸調(diào)節(jié)抑7. 5)，流動相Β為己臘，照 下表進行梯度洗脫：
[0072]
[0074]柱溫；3(TC;
[00巧]流速；1. 5ml/min;
[007引檢測波長；230皿。
[0077] 溶液配制方法及測定方法照實施例1進行，雷美替胺系統(tǒng)適用性溶液、雷美替胺 供試品溶液、雷美替胺片粉溶液、雷美替胺片空白輔料溶液的圖譜分別見圖9、10、11、12。[007引實施例4專屬性試驗
[0079] 本發(fā)明人對雷美替胺進行了破壞降解試驗，用強光照射、高溫、酸（堿）水解或氧 化的方法進行加速破壞，W研究可能的降解途徑及降解產(chǎn)物，考察所產(chǎn)生的降解產(chǎn)物與主 峰的分離情況，并采用光二極管陣列檢測器進行主峰純度檢查。
[0080] a.樣品溶液；取本品適量，精密稱定，加50 %己臘溶解并稀釋制成每1ml中含 l.Omg的溶液，搖勻。
[0081]b.光破壞溶液；取本品適量，置紫外光燈下（254nm)放置24小時后，精密稱取適 量，用50 %己臘溶解并稀釋制成1.Omg/ml的溶液，搖勻。
[0082] C.熱破壞溶液；取本品適量，于105°C烘箱內(nèi)放置16小時后，精密稱取適量，用 50 %己臘溶解并稀釋制成1.Omg/ml的溶液，搖勻。
[0083]d.酸破壞溶液；取本品約lOmg，精密稱定，置10ml量瓶中，加入Imol/L的鹽酸 2ml，8(TC放置4小時后，取出，用0.Imol/L氨氧化鋼調(diào)節(jié)抑值至中性，用50%己臘溶解并 稀釋制成1.Omg/ml的溶液，搖勻。
[0084] e.堿破壞溶液；取本品約lOmg，精密稱定，置10ml量瓶中，加入Imol/L的氨氧化 鋼溶液2ml，8(TC放置4小時后，取出，用0.Imol/L鹽酸調(diào)節(jié)抑值至中性，用50%己臘溶解 并稀釋制成1.Omg/ml的溶液，搖勻。
[0085]f.氧化破壞溶液：取本品約lOmg，精密稱定，置10ml量瓶中，加入30 %雙氧水 801：放置4小時后，取出，用50%己臘溶解并稀釋制成0.5111旨/1111的溶液，搖勻。
[0086] 精密量取上述溶液各10μ1注入液相色譜儀，同時使用DAD檢測器對各溶液進行 200~400皿的UV波長掃描，結(jié)果見表：
[0087]
[0088] 結(jié)果顯示，本品固體狀態(tài)下對高溫較穩(wěn)定，在酸+熱、堿+熱、氧化+熱、光條件下 降解較明顯。在此色譜條件下，本品經(jīng)過各種強力破壞后，主峰前后的雜質(zhì)峰與本品主峰均 能達基線分離，空白溶劑均無干擾。經(jīng)過全波長掃描的主峰純度分析可知主峰純度均達990 W上，因此本色譜條件專屬性良好。
[0089] 實施例5檢測限試驗
[0090] 取雷美替胺、LM-1、S-IBU、雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4、雜質(zhì)5、雜質(zhì)6各適量， 精密稱定，用50%己臘溶解并逐漸稀釋制成一系列低濃度的溶液，分別進樣，直至S/N> 3 時，即為檢測限，結(jié)果：雷美替胺、LM-US-IBU、雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4、雜質(zhì)5、雜質(zhì)6 的檢測限分別為 0. 4ng(0. 004 % )、0. 4ng(0. 004 % )、0. 2ng(0. 002 % )、0. 4ng(0. 004 % )、 0. 4ng(0. 004% )、0. 4ng(0. 004% )、0. 4ng(0. 004% )、0. 4ng(0. 004% )、0. 19ng(0. 002% )。 參考例1參考專利CN200580038847. 8的實施例3中的分析方法
[0091] 儀器；戴安U3000PDA型高效液相色譜儀；
[0092]色譜柱：AgilentZ0RBAXSB-AQC18 色譜柱（4. 6mmX250mm，5μm);
[0093] 流動相；流動相A為0.Olmol/L磯酸鹽緩沖溶液（pH7. 0) /己臘（4:1)的混合溶 液，流動相B為0.Olmol/L磯酸鹽緩沖溶液（pH7. 0) /己臘（3:7)的混合溶液，按下表進行 梯度洗脫；
[0094]
[0095]柱溫；30C;
[0096]流速；1.Oml/min;
[0097]檢測波長；230nm。
[0098] 溶液配制方法及測定方法照實施例1進行，結(jié)果顯示，W上色譜條件中雜質(zhì)3和 雜質(zhì)5均不出峰，其他各雜質(zhì)與雷美替胺主峰間及各雜質(zhì)間均可分離，出峰順序依次為： LM-1、S-IBU、雜質(zhì)1、雜質(zhì)6、雷美替胺、雜質(zhì)2、雜質(zhì)4,雷美替胺與雜質(zhì)混合溶液的圖譜見圖 13。
【主權(quán)項】
1. 一種通過高效液相色譜法分離測定雷美替胺及其雜質(zhì)的方法，其特征在于，采用以 下方式進行： 色譜條件：以三乙胺溶液-乙腈為流動相進行梯度洗脫，檢測波長210~310nm，柱溫 20~45°C，流動相速度0. 5~2. Oml/min，其中三乙胺溶液為含體積分數(shù)0. 1 %的三乙胺并 用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3. 0~7. 5 ; 樣品溶液配制：采用極性溶劑分別配制含雷美替胺及其雜質(zhì)各〇. 01~2. Omg/ml的溶 液； 測定：將溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進行分析。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的梯度洗脫為初始流動相中0. 1 %三 乙胺溶液和乙腈的體積比為63:37~73:27，最終流動相中0. 1 %三乙胺溶液和乙腈體積比 為 63:37 ~73:27。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，流動相中0. 1 %三乙胺溶液和乙腈的體積 比隨時間變化如下：4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，檢測波長為230nm。胃5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，柱溫為30°C。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，流動相速度為1.0ml/min。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，樣品溶液配制采用的極性溶劑為甲醇、乙 腈或50 %乙腈水溶液。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，樣品溶液配制為含雷美替胺lmg/ml，雜質(zhì) 各0· Olmg/ml的溶液。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種通過高效液相色譜法分離測定雷美替胺及其雜質(zhì)的方法，采用以下方式：色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.1％三乙胺溶液-乙腈為流動相，檢測波長210～310nm，柱溫20～45℃，流動相速度0.5～2.0ml/min，其中三乙胺溶液為含體積分數(shù)0.1％的三乙胺，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0～7.5；樣品溶液配制：采用極性溶劑分別配制含雷美替胺及其雜質(zhì)各0.01～2.0mg/ml的溶液；測定：將溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖并進行分析。利用本發(fā)明的方法可以準確的進行原料藥雷美替胺及其制劑的有關物質(zhì)的定量分析，從而保證了雷美替胺及其制劑的質(zhì)量可控性。
【IPC分類】G01N30/06, G01N30/02
【公開號】CN105277628
【申請?zhí)枴緾N201410243678
【發(fā)明人】朱麗君, 崔金鳳, 李緯, 范婧, 黃海燕, 李戰(zhàn)
【申請人】南京長澳醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2016年1月27日
【申請日】2014年7月7日