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用于檢測光度測定法的前帶效應的方法_4

文檔序號:9583541閱讀:來源:國知局
e)作為校準類型,其擬 合通過三階多項式近似的測量校準物的數(shù)據(jù)點之間的范圍,從而使得獲得平滑校準曲線。
[0090] 1. 2. 3用于檢測前帶效應的條件: 為了檢測前帶效應,使用反應速率方法(還參見圖2、3和4)。首先,將2種不同的限值 應用于測量:計算前帶測量點1 (pmPl)和前帶測量點2 (pmp2)之間的信號差異和前帶測量 點3 (pmp3)和前帶測量點4 (pmp4)之間的信號差異。將這些計算的信號(吸光度)差異 與預定限值(分別地對于(Apmp2-Apmpl)為950且對于(Apmp4-Apmp3)為100)進行比較 (參見圖4和下表中的前帶設置的第8和9列)。將計算的信號差異低于這些限值的樣品 直接分類為非Hook樣品。然而,如果樣品的計算的信號差異高于這些限值,則通過根據(jù)圖 3計算前帶檢查值PC進行前帶檢查:計算反應結束時的反應速率(v(pmp3,pmp4),參見圖4和下 表中的前帶設置的第5和6列)和反應開始時的反應速率(v(pmpl,pmp3,參見圖4和下表中的 前帶設置的第3和4列)的比率,表示為百分數(shù),以獲得前帶檢查值PC。對于各測定法,將 表明前帶效應的特定PC范圍(定義為下限(參見圖4和下表中的第1列)和上限(參見 圖4和下表中的第2列)之間的范圍)存儲于測定設置中,并且與測量各樣品之后獲得的 PC值進行自動比較:如果樣品顯示PC值在下限和上限內側(4-15),則將樣品標記為Hook 樣品。用于CRPL3的前帶檢查的設置描述于下表中(對于詳述,還參見圖4): 對于前帶檢查、額外限值和分析物定量的所用波長:570nm(800nm校正波長):
[0091] 1. 3用于根據(jù)本發(fā)明的CRP-測定法的程序: 用于這些實驗的試劑與用于標準方法的試劑相同:參見第1. 2點。使用來自CRPL3測 試的包裝插頁文件中描述的程序,除了用于檢測前帶效應的方法。
[0092] 1. 3. 1測量條件: 移取方案:與第1. 2. 1點中描述的標準方法的移取方案相同。
[0093]用于生成校準曲線的條件:與第1. 2. 2點中描述的標準方法中使用的校準條件相 同。
[0094] 1. 3. 2用于枏據(jù)本發(fā)明檢測前帶效應的條件: 為了檢測前帶效應,本發(fā)明的方法還使用反應速率的分析,然而,使用與用于定量分析 物的波長不同的波長。首先,將2種不同的限值應用于測量:計算在波長660nm(800nm校 正波長)時前帶測量點7 (pmp7)和前帶測量點8 (pmp8)之間的信號差異和前帶測量點9 (pmp9)和前帶測量點10 (pmplO)之間的信號差異。將這些計算的信號(吸光度)差異與 預定限值(分別地對于(Apmp8-Apmp7)為500且對于(Apmpl〇-Apmp9)為200)進行比較 (參見下表中的第8和9列)。將計算的信號差異低于這些限值的樣品直接分類為非Hook 樣品。
[0095] 然而,如果樣品的計算的信號差異高于這些限值,則通過從在用于檢測前帶效應 的波長時獲得的信號計算反應速率比率R進行前帶檢查: R=[時間段2時的反應速率/時間段1時的反應速率]X100,其中 時間段2時的反應速率=[信號(時間點4)-信號(時間點3)] / [時間點4 -時間點3]且時間段1時的反應速率=[信號(時間點2)-信號(時間點1) ]/ [時間 點2 -時間點1]。
[0096] 時間點4 :是前帶測量點4pmp4,且與測量點4相同;時間點3 :是前帶測量點3 pmp3,且與測量點3相同;時間點2 :是前帶測量點2pmp2,且與測量點2相同;時間點1 :是 前帶測量點1pmpl,且與測量點1相同;還參見下表第3列至第6列。
[0097] 對于各測定法,將表明前帶效應的特定和預定R范圍(定義為預定下限(參見下 表中的第1列)和預定上限(參見下表中的第2列)之間的范圍)存儲于測定設置中,并 且與測量各樣品之后獲得的R值進行自動比較:如果樣品顯示在下限和上限內側(8-17. 2) (根據(jù)下表中的第7列)的R值,則將樣品標記為Hook樣品。
[0098] 用于CRPL3的前帶檢查的設置描述于下表中: 用于前帶檢查的所用波長:660nm(800nm校正波長); 用于額外限值的所用波長:660nm(800nm校正波長); 用于分析物定量的所用波長:570nm(800nm校正波長)。
[0099] 任選地,待用于各額外限值的波長可以是不同的。在該情況下,通過對于兩種額外 限值使用相同的波長,獲得良好的結果。
[0100] 1. 4使用標準方法和根據(jù)本發(fā)明的方法的CRP-測定法的結果: 結果概述描述于圖5中。CRP測試的新方法的應用顯示Hook樣品和非Hook樣品之間 2. 7倍的改善差異。新方法提供最小的實施努力;該方法的應用不需要試劑和它們的制劑 的任何改變。對于其在cobasc分析儀上的應用,僅調整軟件中的輸入窗口 :測量波長的額 外設置的擴展,和使得輸入帶小數(shù)點單位的下/上限值(例如17. 2,而非僅17)的可能性。
[0101] 實施例2 :用于鐵蛋白測定法的前帶檢測 2.1儀器:參見第1.1點。
[0102] 2. 2用于使用標準方法的鐵蛋白-測定法的程序: 選擇Roch^sFerr4測試(Ferr4,目錄號04885317),顆粒增強免疫池度測定法,用 于該研究。具有用單克隆抗鐵蛋白抗體包被的膠乳顆粒的人鐵蛋白聚集物;濁度測定該聚 集物。cobasc包裝中提供用于所有Roche測試的試劑。這些盒(cassettes)包含一至三 個特別設計的試劑瓶,且具有包含詳細的相關試劑和其它測試相關信息的條形碼標記。對 于Ferr4測試,盒中使用兩種試劑:R1 (TRIS緩沖液,pH7. 5,免疫球蛋白(兔),防腐劑,穩(wěn) 定劑)和R3 (含有用抗人鐵蛋白抗體(兔)、防腐劑、穩(wěn)定劑包被的膠乳顆粒的水性基質)。 來自Ferr4測試的包裝插頁文件中描述的程序用作標準方法。
[0103] 2. 2. 1務取方案: 隨后將10μL樣品和80μL測定緩沖液(R1)添加至反應室,隨后添加80μL膠乳試劑 (R3),并混合反應混合物。
[0104] 2. 2. 2用于牛成柃準曲線的條件: 對于測量,使用570nm作為主要波長,且使用800nm作為校正波長。測定類型是兩點終 點測定法。兩點終點測定法是執(zhí)行樣品空白的終點測定法。在這里考慮在兩個不同測量點 的兩個吸光度讀數(shù):通常在添加最后試劑之前或之后不久采集第一讀數(shù);在添加最后試劑 之后任何時間點采集第二讀數(shù)。用于校準曲線和因此用于濃度計算的吸光度值通過從第一 讀數(shù)減去第二讀數(shù)而獲得。對于CRPL3,第一讀數(shù)是在測量點24,且意指添加最終試劑之后 不久,第二讀數(shù)在測量點57,其對應于5. 1分鐘的反應時間。為了生成校準曲線,一式兩份 測量來自Roche(目錄11355279)的6份標準品,使用樣條(spline)作為校準類型,其擬 合通過三階多項式近似的測量校準物的數(shù)據(jù)點之間的范圍,從而使得獲得平滑校準曲線。
[0105] 2. 2. 3用于檢測前帶效應的條件: 為了檢測前帶效應,使用反應速率方法(還參見圖2、3和4)。首先,將一種限值應用 于測量:計算前帶測量點1 (pmPl)和前帶測量點2 (pmp2)之間的信號差異。將該計算的信 號(吸光度)差異與預定限值(對于(Apmp2-Apmpl)為1000)進行比較(參見圖4和下表 中的前帶設置的第8列)。將計算的信號差異低于該限值的樣品直接分類為非Hook樣品。 然而,如果樣品的計算的信號差異高于該限值,則通過根據(jù)圖3計算前帶檢查值PC進行前 帶檢查:計算反應結束時的反應速率(~_3, _4),參見圖4和下表中的前帶設置的第5和6 列)和反應開始時的反應速率(vtenipl,pnip2),參見圖4和下表中的前帶設置的第3和4列)的 比率,表示為百分數(shù),以獲得前帶檢查值PC。對于各測定法,將表明前帶效應的特定PC范圍 (定義為下限(參見圖4和下表中的第1列)和上限(參見圖4和下表中的第2列)之間 的范圍)存儲于測定設置中,并且與測量各樣品之后獲得的PC值進行自動比較:如果樣品 顯示PC值在下限和上限內側(0-10),則將樣品標記為Hook樣品。用于Ferr4的前帶檢查 的設置描述于下表中(對于詳述,還參見圖4): 對于前帶檢查、額外限值和分析物定量的所用波長:570nm(800nm校正波長):
[0106] 2. 3用于根據(jù)本發(fā)明的鐵蛋白-測定法的程序: 用于這些實驗的試劑與用于標準方法的試劑相同:參見第2. 2點。使用來自Ferr4測 試的包裝插頁文件中描述的程序,除了用于檢測前帶效應的方法。
[0107] 2. 3. 1測量條件: 移取方案:與第2. 2. 1點中描述的標準方法的移取方案相同。
[0108]用于生成校準曲線的條件:與第2.2. 2點中描述的標準方法中使用的校準條件相 同。
[0109] 2. 3.2用于枏據(jù)本發(fā)明檢測前帶效應的條件: 為了檢測前帶效應,本發(fā)明的方法還使用反應速率的分析,然而,使用與用于定量分析 物的波長不同的波長。首先,將一種限值應用于測量:計算在波長505nm(800nm校正波長) 時的前帶測量點7 (pmp7)和前帶測量點8 (pmp8)之間的信號差異。將該計算的信號(吸 光度)差異與預定限值(分別地對于(Apmp8-Apmp7)為1000)進行比較(參見下表中的第 8列)。將計算的信號差異低于該限值的樣品直接分類為非Hook樣品。然而,如果樣品的 計算的信號差異高于該限值,則通過從在用于檢測前帶效應的波長時獲得的信號計算反應 速率比率R進行前帶檢查: R=[時間段2時的反應速率/時間段1時的反應速率]X100,其中 時間段2時的反應速率=[信號(時間點4)-信號(時間點3)] / [時間點4 -時間點3]且時間段1時的反應速率=[信號(時間點2)-信號(時間點1) ]/ [時間 點2 -時間點1]。
[0110] 時間點4 :是前帶測量點4pmp4,且與測量點4相同;時間點3 :是前帶測量點3 pmp3,且與測量點3相同;時間點2 :是前帶測量點2pmp2,且與測量點2相同;時間點1 : 是前帶測量點1pmpl,且與測量點1相同;還參見下表第3列至第6列。
[0111] 對于各測定法,將表明前帶效應的特定和預定R范圍(定義為預定下限(參見下 表中的第1列)和預定上限(參見下表中的第2列)之間的范圍)存儲于測定設置中,并 且與測量各樣品之后獲得的R值進行自動比較:如果樣品顯示在下限和上限內側(-5至5) (根據(jù)下表中的第7列)的R值,則將樣品標記為Hook樣品。
[0112] 用于FERR4的前帶檢查的設置描述于下表中: 用于前帶檢查的所用波長:505nm(800nm校正波長); 用于額外限值的所用波長:505nm(800nm校正波長); 用于分析物定量的所用波長:570nm(800nm校正波長)。
[0113] 2. 4使用標準方法和根據(jù)本發(fā)明的方法的鐵蛋白-測定法的結果: 結果概述描述于圖6中。鐵蛋白測試的新方法的應用顯示Hook樣品和非Hook樣品之 間1.8倍的改善差異。新方法提供最小的實施努力;該方法的應用不需要試劑和它們的制 劑的任何改變。對于其在cobasc分析儀上的應用,僅調整軟件中的輸入窗口 :測量波長的 額外設置的擴展。
[0114] 實施例3:用于白蛋白測定法的前帶檢測 3. 1儀器:參見第1. 1點。
[0115] 3. 2用于使用標準方法的白蛋
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