（Mucunapruriensvar.utilisBurck)的干燥種子，藜豆MP-1 (20090501，購(gòu)自印度）為藜豆屬植物藜豆（Mucunapruriens)的干燥種子。
[0021] 原藥材供試品溶液的制備：貓?(MD_1 ;MD_2)或薬?(MP-1)藥材粉碎為粗粉，各 取l.Og，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加0.lmol噸1鹽酸20mL，稱(chēng)定重量，超聲（功率250W， 頻率40kHz)60min，放冷，用0.lmol·L1鹽酸補(bǔ)足重量，搖勾，即得。
[0022] 藜豆提取物供試品溶液的制備：取干燥的藜豆1. 57kg，粉碎成粗粉，采用5倍量甲 醇回流提取2hX2次，濃縮，60度真空干燥，獲得藜豆提取物（MP-2，135g)。精密稱(chēng)取藜豆 提取物〇.lg，置25mL容量瓶中，用0.lmol·L1鹽酸配制，搖勻，即得。
[0023] 實(shí)施例2供試品的HPLC檢測(cè)
[0024] 成分1-3是藜豆中的特征性組分，可作為藜豆提取物的質(zhì)量控制指標(biāo)。該類(lèi)成分 與LD結(jié)構(gòu)相似、極性強(qiáng)，在常規(guī)C18柱上幾乎沒(méi)有保留，分離度欠佳。本發(fā)明經(jīng)進(jìn)一步研究， 通過(guò)多種色譜柱比較，最終選用親水性的碳十八色譜柱和甲醇溶液（0-5%;更優(yōu)選0-3% ) 作為流動(dòng)相等度洗脫，結(jié)合改性劑（0. 5-1. 5%乙酸、5-10mm〇l·L1乙酸銨，調(diào)節(jié)pH2-4)和 洗脫流速（〇. 5,0. 8,1.OmL·min3的優(yōu)化，最終選用下述色譜條件，組分1-3和LD均獲得 了理想的基線分離，從而建立了藜豆提取物中該類(lèi)組分的同時(shí)定量分析方法。
[0025] (1)對(duì)照品溶液的制備：對(duì)照品的制備方法參見(jiàn)發(fā)明人前期研究文獻(xiàn)（3-羧 酸四氫異喹啉衍生物在制備治療多巴胺能神經(jīng)疾病藥物中的應(yīng)用，專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?201410312868. 5)。分別取對(duì)照品1-3、左旋多巴適量，精密稱(chēng)定，用0.lmol·L1鹽酸配制 成質(zhì)量濃度為〇. 2984,6. 554,0. 2626,0. 2568mg·mL1的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液RS-6。精密吸 取上述混合對(duì)照品溶液儲(chǔ)備液0. 5,0. 75,1. 0,1. 5, 5.OmL置于10mL量瓶中，用0.lmol·L1 鹽酸液溶解并定容，制成5個(gè)不同質(zhì)量濃度的混合對(duì)照溶液RS-1~5。
[0026] (2)供試品溶液的制備：取實(shí)施例1供試品溶液，用微孔濾膜（0. 45um)濾過(guò)，取續(xù) 濾液，即得。
[0027] (3)HPLC分析方法
[0028] 色譜條件：采用Agilent1260高效液相色譜系統(tǒng)，DAD檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm; 親水碳十八色譜柱CosmosilPAQ色譜柱（4.6X250mm，5ym);流動(dòng)相1%乙酸，流速 0. 5mL·min\柱溫30°C;進(jìn)樣量5-20μL。在此分析條件下，化合物1-3和LD與雜質(zhì)峰分 離度良好，各成分色譜峰與相鄰峰的分離度均大于1. 5,方法學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明方法可行，參 見(jiàn)表1。色譜圖見(jiàn)附圖1-2。
[0029] 表1方法學(xué)考察結(jié)果
[0030]
[0031] (4)樣品測(cè)定結(jié)果：實(shí)施例1中各供試品測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。
[0032] 表2樣品測(cè)定結(jié)果（mg/g)
[0033]
[0034] 結(jié)果表明藜豆提取物中同時(shí)含有對(duì)照品1-3和LD，本方法可同時(shí)測(cè)定該4種成分 含量。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種藜豆提取物的檢測(cè)方法，特征在于所述檢測(cè)方法由以下步驟組成： (1)供試品溶液的制備：取藜豆提取物適量，精密稱(chēng)定，用酸溶液配制為供試品溶液， 即得； ⑵對(duì)照品溶液的制備：取3-羧基-四氫異喹啉衍生物對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，用酸溶 液配制為對(duì)照品溶液，即得； (3)樣品分析：采用高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，親水性碳十八改性硅膠色 譜柱，甲醇溶液（0-5% )為流動(dòng)相等度洗脫，流速0. 5-1.OmL/min;分別精密吸取對(duì)照品溶 液和供試品溶液各5-20μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得。2. 根據(jù)權(quán)利要求1的藜豆提取物的檢測(cè)方法，特征在于所述檢測(cè)方法步驟（1)中藜豆 提取物從藜豆屬植物種子中提取。3. 根據(jù)權(quán)利要求2的藜豆提取物的檢測(cè)方法，特征在于所述檢測(cè)方法步驟（1)中藜豆 提取物的制備方法為：取藜豆屬植物種子，粉碎為粗粉，取1. 〇g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶 中，加0·lmol·L1鹽酸20mL，稱(chēng)定重量，超聲60min，放冷，用0·lmol·L1鹽酸補(bǔ)足重量，搖 勾，即得。4. 根據(jù)權(quán)利要求1的藜豆提取物的檢測(cè)方法，特征在于所述檢測(cè)方法步驟（2)中所述 3_羧基-四氫異喹啉衍生物對(duì)照品為3-羧基-6, 7-二羥基-1，2, 3,4-四氫異喹啉、1α-甲 基_3-駿基-6, 7- 二羥基_1，2, 3,4-四氛異卩奎琳、1，1 '- 二甲基_3-駿基-6, 7- 二羥基_1， 2, 3,4-四氫異喹啉中的任意1-3種。5. 根據(jù)權(quán)利要求4的藜豆提取物的檢測(cè)方法，特征在于所述檢測(cè)方法步驟（2)中所述 3_羧基-四氫異喹啉衍生物對(duì)照品還可同時(shí)加入左旋多巴對(duì)照品。6. 根據(jù)權(quán)利要求1的藜豆提取物的檢測(cè)方法，特征在于所述檢測(cè)方法步驟（3)中甲醇 溶液流動(dòng)相中可加入酸或緩沖鹽（調(diào)節(jié)pH2-4)作為改性劑。7. 根據(jù)權(quán)利要求6的藜豆提取物的檢測(cè)方法，特征在于所述檢測(cè)方法步驟（3)中選用 1 %乙酸為流動(dòng)相等度洗脫，流速0. 5-0. 8mL·min、8. 根據(jù)權(quán)利要求1的藜豆提取物的檢測(cè)方法，在藜豆提取物質(zhì)量控制方面的應(yīng)用。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種藜豆提取物的檢測(cè)方法，包括對(duì)藜豆提取物中三種3-羧基-四氫異喹啉衍生物進(jìn)行定量分析，以及對(duì)左旋多巴同時(shí)進(jìn)行定量分析。具體包括采用親水性碳十八色譜柱，選用低濃度有機(jī)相和適宜改性劑(調(diào)節(jié)pH2-4)作為流動(dòng)相等度洗脫，采用高效液相檢測(cè)目標(biāo)成分含量。本發(fā)明以藜豆提取物中存在的特征性3-羧基-四氫異喹啉衍生物為對(duì)照品，首次建立了該類(lèi)成分定量分析方法。所述檢測(cè)方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高、方法科學(xué)、簡(jiǎn)便易行，適用于對(duì)藜豆屬植物提取物中該類(lèi)成分以及左旋多巴的同時(shí)檢測(cè)和質(zhì)量控制。
【IPC分類(lèi)】G01N30/88
【公開(kāi)號(hào)】CN105372367
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510772130
【發(fā)明人】劉江云, 鄧霖芳, 郝麗莉, 楊世林
【申請(qǐng)人】蘇州大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年3月2日
【申請(qǐng)日】2015年11月10日