一種低分子肝素生產(chǎn)過(guò)程中游離硫酸根離子快速檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明屬于，尤其涉及一種生物醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及一種低分子肝素生產(chǎn)過(guò)程中游離硫酸根離子快速檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]肝素類(lèi)藥物是抗凝血類(lèi)藥物的首選，具有抗凝血、抗血栓、降血脂作用，70多年的使用過(guò)程中人們發(fā)現(xiàn)其生物利用度低、副作用大，為解決其缺陷，發(fā)明了新型抗凝血藥物--低分子肝素(Low Molecular Weight Heparin)。常見(jiàn)的低分子肝素有依諾肝素鈉、
達(dá)肝素鈉、那曲肝素鈣、汀肝素鈉等。
[0003]低分子量肝素是未分級(jí)肝素中具有較低分子量的組分或片段，具有與未分級(jí)肝素相同的母體結(jié)構(gòu)，這類(lèi)藥物具有鏈短、結(jié)合部位少、生物利用度高、半衰期長(zhǎng)、個(gè)體差異和不確定因素少、穩(wěn)定的劑量反應(yīng)、無(wú)需進(jìn)行血藥濃度檢測(cè)和對(duì)血小板的作用小等優(yōu)點(diǎn)。用于預(yù)防和治療深靜脈血栓形成，用于冠心病的治療等，顯著降低大出血危機(jī)。
[0004]LMWH是一種經(jīng)硫酸化修飾的多糖，硫酸化修飾有利于活性發(fā)揮。由于生產(chǎn)工藝硫酸化修飾過(guò)程和產(chǎn)品貯藏過(guò)程中可能會(huì)有硫酸根脫落而影響活性，因此，需要對(duì)產(chǎn)品中游離硫酸根含量進(jìn)行檢測(cè)。目前EP那曲肝素鈣、USP依諾肝素鈉注射液以及CP依諾肝素鈉(注射液)標(biāo)準(zhǔn)中收載了游離硫酸根含量檢測(cè)方法，各個(gè)藥典檢測(cè)方法各不相同。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種低分子肝素生產(chǎn)過(guò)程中游離硫酸根離子快速檢測(cè)方法，旨在解決生產(chǎn)工藝硫酸化修飾過(guò)程和產(chǎn)品貯藏過(guò)程中會(huì)有硫酸根脫落而影響活性的問(wèn)題。
[0006]本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種低分子肝素生產(chǎn)過(guò)程中游離硫酸根離子快速檢測(cè)方法，該方法包括:
步驟一，使用離子色譜儀對(duì)不同濃度的硫酸根離子對(duì)照品溶液與該對(duì)照品溶液的電導(dǎo)檢測(cè)響應(yīng)值建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；
步驟二，檢測(cè)供試品溶液電導(dǎo)檢測(cè)響應(yīng)值，根據(jù)公Sw%=T*V/m*100%，計(jì)算低分子肝素中硫酸根尚子含量；
其中，T:供試品溶液中硫酸根離子的濃度;V:供試品溶液定容后的體積;m:供試品溶液中的樣品的質(zhì)量。
[0007]進(jìn)一步，所述步驟一中不同濃度的硫酸根離子對(duì)照品溶液配制方法:該方法包括: 配制3.0mmol/L的碳酸鈉試液，該試液使用前過(guò)濾超聲脫氣；
配制含3yg/ml硫酸根離子和5yg/ml草酸根離子的系統(tǒng)適應(yīng)性混合溶液，所述硫酸根與草酸根分離度2 1.0;
使用濃度為1000ug/ml硫酸根離子溶液分別用3.0mmol/L的碳酸鈉試液稀釋制成濃度為0.lyg/ml、0.5yg/ml、1.0yg/ml、2.0yg/ml、4.0yg/ml、5.0yg/ml 的硫酸根離子對(duì)照品溶液。
[0008]進(jìn)一步，所述步驟一中離子色譜儀建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方法為:
使用濃度為0.lyg/ml、0.5yg/ml、I.0yg/ml、2.0yg/ml、4.0yg/ml、5.0yg/ml 的硫酸根離子對(duì)照品溶液，根據(jù)對(duì)照品溶液的電導(dǎo)檢測(cè)響應(yīng)值與硫酸根離子對(duì)照品溶液濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
[0009]進(jìn)一步，所述步驟一和步驟二中的電導(dǎo)檢測(cè)響應(yīng)值通過(guò)電導(dǎo)檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。
[0010]進(jìn)一步，所述步驟二中供試品溶液配制方法為:
用3.0mmo 1/L的碳酸鈉試液稀釋濃度100ug/ml的硫酸根離子溶液制成供試品溶液進(jìn)一步，所述離子色譜儀檢測(cè)條件:流速:1.0ml/min，進(jìn)樣量:20μ1，運(yùn)行時(shí)間:15min，柱溫:30°C。
[0011 ]本發(fā)明提供的低分子肝素生產(chǎn)過(guò)程中游離硫酸根離子快速檢測(cè)方法積極效果:相比操作步驟冗長(zhǎng)費(fèi)時(shí)，需用多種化學(xué)試劑，靈敏度低而且有干擾的經(jīng)典容量法、重量法和光度法等。本發(fā)明提供的離子色譜法檢測(cè)游離硫酸根離子，樣品只需用淋洗液溶解即可進(jìn)樣，無(wú)需前處理;根據(jù)不同濃度硫酸根離子的電導(dǎo)響應(yīng)值建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，進(jìn)樣檢測(cè)。該發(fā)明只需根據(jù)電導(dǎo)檢測(cè)器的響應(yīng)值即可得知樣品中的游離硫酸根離子含量，無(wú)需繁瑣的后續(xù)處理，且樣品檢測(cè)時(shí)間短，可以連續(xù)檢測(cè)不同品種中的游離硫酸根離子含量，操作方便簡(jiǎn)單、檢測(cè)靈敏度高。
【附圖說(shuō)明】
[0012]圖1為本發(fā)明實(shí)施例提供的低分子肝素中游離硫酸根離子的快速檢測(cè)方法流程圖。
[0013]圖2為本發(fā)明實(shí)施例提供的系統(tǒng)適應(yīng)性譜圖。
[0014]圖3為本發(fā)明實(shí)施例提供的標(biāo)準(zhǔn)品溶液響應(yīng)值與硫酸根離子標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
[0015]圖4為本發(fā)明實(shí)施例提供的供試品溶液(依諾肝素鈉)的硫酸根離子含量譜圖。
[0016]
【具體實(shí)施方式】
[0017]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0018]下面結(jié)合附圖及具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理作進(jìn)一步描述。
[0019]如圖1:一種低分子肝素生產(chǎn)過(guò)程中游離硫酸根離子快速檢測(cè)方法，該方法包括: S101:使用離子色譜儀對(duì)不同濃度的硫酸根離子對(duì)照品溶液與該對(duì)照品溶液的電導(dǎo)檢測(cè)響應(yīng)值建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；
S102:檢測(cè)供試品溶液電導(dǎo)檢測(cè)響應(yīng)值，根據(jù)公Sw%=T*V/m*100%，計(jì)算低分子肝素中硫酸根尚子含量；
其中，T:供試品溶液中硫酸根離子的濃度;V:供試品溶液定容后的體積;m:供試品溶液中的樣品的質(zhì)量。
[0020]所述SlOl中不同濃度的硫酸根離子對(duì)照品溶液配制方法:該方法包括:
配制3.0mmol/L的碳酸鈉試液，該試液使用前過(guò)濾超聲脫氣；
配制含3yg/ml硫酸根離子和5yg/ml草酸根離子的系統(tǒng)適應(yīng)性混合溶液，所述硫酸根與草酸根分離度2 1.0;
使用濃度為1000ug/ml硫酸根離子溶液分別用3.0mmol/L的碳酸鈉試液稀釋制成濃度為0.lyg/ml、0.5yg/ml、1.0yg/ml、2.0yg/ml、4.0yg/ml、5.0yg/ml 的硫酸根離子對(duì)照品溶液。
[0021 ]所述SlOl中離子色譜儀建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方法為:
使用濃度為0.lyg/ml、0.5yg/ml、I.0yg/ml、2.0yg/ml、4.0yg