手柄；
[0035]步驟305、從手?jǐn)Q接頭處插入萃取劑毛細(xì)管，調(diào)節(jié)毛細(xì)管插入樣品內(nèi)部的深度；
[0036]步驟306、將手?jǐn)Q接頭與萃取劑通道連接，通過連接器將萃取劑通道的萃取劑毛細(xì)管與手?jǐn)Q接頭連接，固定內(nèi)部萃取電離源于精細(xì)調(diào)控裝置上，向內(nèi)部萃取電噴霧電離源裝置內(nèi)部通入萃取劑；
[0037]步驟307、進(jìn)樣泵控制微量進(jìn)樣器；
[0038]其中，可設(shè)定流速為0.1?3 μ L/min。
[0039]步驟308、向引入萃取劑的萃取劑通道口的金屬針頭上施加直流電壓，使萃取劑萃取出的樣品內(nèi)部物質(zhì)得以電離；
[0040]其中，直流電壓設(shè)為為4?7kV。
[0041]步驟309、調(diào)節(jié)內(nèi)部萃取電噴霧電離源裝置與質(zhì)譜儀進(jìn)樣口之間的角度和位置；
[0042]步驟310、打開質(zhì)譜儀掃描系統(tǒng)，獲取檢測(cè)結(jié)果。
[0043]如圖4所示，本發(fā)明將內(nèi)部萃取電噴霧電離源裝置與質(zhì)譜儀配合使用，通過電噴霧內(nèi)部萃取電離質(zhì)譜(Internal Extractive Electrospray 1nizat1n MassSpectrometry, iEES1-MS)技術(shù)，能夠直接獲取凝聚態(tài)樣品內(nèi)部及表面信息，同時(shí)具有電噴霧萃取電離質(zhì)譜(EES1-MS)技術(shù)分析速度快、基體耐受性好等優(yōu)點(diǎn)，因此，iEES1-MS特別適用于分析樣品深層次的信息。陳煥文等人采用iEES1-MS技術(shù)分析了草莓、大蒜、蘿卜、動(dòng)物和人體組織等樣品，充分證明了其設(shè)計(jì)合理性。然而應(yīng)用中，iEESI也存在著樣品引入量不確定、引入效率低、被分析時(shí)組織樣品的噴霧方向受樣品紋路或血管等影響分析效果的不足，因此為獲得可靠的分析結(jié)果，需要增加樣品的分析數(shù)量，增添了工作量。
[0044]下面介紹應(yīng)用本發(fā)明內(nèi)部萃取電噴霧電離源進(jìn)行質(zhì)譜法分析人體肺癌組織的案例如下:
[0045]在外科手術(shù)中，能夠準(zhǔn)確快速判定腫瘤邊緣，保證能夠完全切除惡性腫瘤，又不過多地切除正常組織，可以有效地提高癌癥病人的生存效率，具有良好的預(yù)期社會(huì)效益。傳統(tǒng)的切除手術(shù)如何確定切除范圍完全由醫(yī)生根據(jù)自身經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行判斷，因此，受人為經(jīng)驗(yàn)的影響很大，過多的組織切除會(huì)對(duì)患者健康和術(shù)后恢復(fù)造成影響，而如果病變組織未能夠被完全切除，有癌癥復(fù)發(fā)的可能?？紤]到肉體組織的特性，如肺部組織正常色紅，觸之質(zhì)軟，有捻發(fā)感；病變組織顏色各異，有白色、暗紅色等，觸之較硬，因此如何取得固定形狀和大小的組織是一個(gè)需要解決的問題。
[0046]采用常壓質(zhì)譜分析的方法，快速確定病變組織和癌旁正常組織的指紋譜圖，手術(shù)中通過對(duì)組織的持續(xù)檢測(cè)，以確定病變組織能夠被完全切除，而癌旁正常組織能夠最大程度的被保留，對(duì)于手術(shù)有十分重要的臨床意義。
[0047]如圖7所示為本案例中iEESI源主要結(jié)構(gòu)及工作原理圖，實(shí)驗(yàn)中，用取樣器手柄配合定量取樣器對(duì)人體肺組織樣品進(jìn)行按壓切割，切割后按入毛細(xì)管固定器中，按照權(quán)利要求書中的方法組裝內(nèi)部萃取電噴霧電離源。選用丙酮/水/乙酸(50:50: l，v/v/v)做為萃取劑，施加5kV的高電壓，以2 μ L/min的流速通入人體肺組織中，對(duì)癌癥組織和癌旁組織分別進(jìn)行快速質(zhì)譜分析，獲得了兩種組織的質(zhì)譜指紋譜圖(圖5為肺癌組織譜圖，圖6為癌旁組織譜圖)分析結(jié)果具有明顯的差異性，為了對(duì)分析結(jié)果進(jìn)行確定，對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了多次重復(fù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有一致性，驗(yàn)證了該分析方法的可重復(fù)性。
[0048]以上實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明利用內(nèi)部萃取電噴霧電離質(zhì)譜法(iEES1-MS)，由于使用定量采樣技術(shù)，能夠?qū)?fù)雜基體生物樣品內(nèi)部物質(zhì)進(jìn)行穩(wěn)定可靠的檢測(cè)，大大擴(kuò)展了質(zhì)譜分析的應(yīng)用范圍。同時(shí)，將微量取得的塊狀組織，用結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、操作方便、高靈敏度、無損、無污染、實(shí)時(shí)在線檢測(cè)的直接電離技術(shù)iEESI耦合不同型號(hào)的質(zhì)譜儀器，為不規(guī)則塊狀組織采樣與檢測(cè)等領(lǐng)域的研宄提供了一種實(shí)時(shí)在線、獲取樣品信息全面的分析技術(shù)。該技術(shù)可廣泛適用于食品安全、成分分析、生物醫(yī)藥、臨床診斷等領(lǐng)域。
[0049]以上對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)介紹，本文中應(yīng)用了具體個(gè)例對(duì)本發(fā)明的原理及實(shí)施方式進(jìn)行了闡述，以上實(shí)施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想；同時(shí)，對(duì)于本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員，依據(jù)本發(fā)明的思想，在【具體實(shí)施方式】及應(yīng)用范圍上均會(huì)有改變之處，綜上所述，本說明書內(nèi)容不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種內(nèi)部萃取電噴霧電離源裝置，其特征在于，由取樣器手柄(11)、定量取樣器(12)、毛細(xì)管固定器(13)、固定器內(nèi)套管(14)、萃取劑毛細(xì)管(15)、手?jǐn)Q接頭(16)和萃取劑通道(17)構(gòu)成，所述取樣器手柄(11)與定量取樣器(12)構(gòu)成取樣裝置，定量取樣器(12)、毛細(xì)管固定器(13)、固定器內(nèi)套管(14)、萃取劑毛細(xì)管(15)和手?jǐn)Q接頭(16)順序連接，并與萃取劑通道(17)連接。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的內(nèi)部萃取電噴霧電離源裝置，其特征在于，所述取樣器手柄(11)設(shè)有防滑套，與定量取樣器(12)連接口既能保證結(jié)合緊密，又能保證定量取樣器(12)方便脫離，取樣器手柄(11)材質(zhì)可按需選擇。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的內(nèi)部萃取電噴霧電離源裝置，其特征在于，定量取樣器(12)由不銹鋼制成，所述定量取樣器(12)的樣品切割端為鋒利結(jié)構(gòu)，而所述定量取樣器(12)的電噴霧端成錐形，所述定量取樣器(12)的內(nèi)部靠近樣品切割端為空心結(jié)構(gòu)，可用于盛放樣品，所述電噴霧端中心設(shè)有小孔且內(nèi)部光滑。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的內(nèi)部萃取電噴霧電離源裝置，其特征在于，毛細(xì)管固定器(13)—端可與定量取樣器(12)無縫隙緊密連接，另一端與手?jǐn)Q接頭(16)緊密連接，毛細(xì)管固定器材質(zhì)具有防裂功能。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的內(nèi)部萃取電噴霧電離源裝置，其特征在于，固定器內(nèi)套管(14)與毛細(xì)管固定器(13)同軸緊密結(jié)合，中心小孔按需加工，便于不同尺寸毛細(xì)管從中心小孔通過并插入定量取樣器(12)內(nèi)樣品中，其材質(zhì)可為不帶來污染的任意硬度大的材料。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的內(nèi)部萃取電噴霧電離源裝置，其特征在于，萃取劑毛細(xì)管(15)尺寸可按需選擇，萃取劑毛細(xì)管(15)涂層穩(wěn)定不解離，萃取劑毛細(xì)管(15)從手?jǐn)Q接頭(16)卡頭處插入至樣品不外露。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的內(nèi)部萃取電噴霧電離源裝置，其特征在于，萃取劑通道(17)由微量進(jìn)樣器、進(jìn)樣泵和石英毛細(xì)管構(gòu)成。8.根據(jù)權(quán)利要求1至7所述的內(nèi)部萃取電噴霧電離源裝置，其特征在于，手?jǐn)Q接頭(16)內(nèi)置毛細(xì)管卡頭，細(xì)管卡頭可根據(jù)萃取劑毛細(xì)管尺寸進(jìn)行更換，手?jǐn)Q接頭(16) —端與毛細(xì)管固定器(13)無縫隙緊密連接，另一端與萃取劑通道(17)連接。9.一種內(nèi)部萃取電噴霧電離質(zhì)譜分析方法，其特征在于，使用權(quán)利要求1至9任一所述內(nèi)部萃取電噴霧電離源裝置采集樣品并將樣品內(nèi)部物質(zhì)萃取離子化后將樣品離子引入質(zhì)譜分析。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的內(nèi)部萃取電噴霧電離質(zhì)譜分析方法，其特征在于，包括: 從毛細(xì)管固定器一端將固定器內(nèi)套管裝配于毛細(xì)管固定器中； 將毛細(xì)管固定器一端與手?jǐn)Q接頭緊密連接； 將取樣器手柄與定量取樣器組合，對(duì)樣品進(jìn)行按壓切割后完成取樣； 將結(jié)合在取樣器手柄上的攜有樣品的定量取樣器按入毛細(xì)管固定器另一端，取下取樣器手柄； 從手?jǐn)Q接頭處插入萃取劑毛細(xì)管，調(diào)節(jié)毛細(xì)管插入樣品內(nèi)部的深度； 將手?jǐn)Q接頭與萃取劑通道連接，通過連接器將萃取劑通道的萃取劑毛細(xì)管與手?jǐn)Q接頭連接，固定內(nèi)部萃取電離源于精細(xì)調(diào)控裝置上，向內(nèi)部萃取電噴霧電離源裝置內(nèi)部通入萃取劑； 進(jìn)樣泵控制微量進(jìn)樣器，設(shè)定流速為0.1?3 μ L/min ； 向引入萃取劑的萃取劑通道口的金屬針頭上施加直流電壓，使萃取劑萃取出的樣品內(nèi)部物質(zhì)得以電離，其中，直流電壓為4?7kV ; 調(diào)節(jié)內(nèi)部萃取電噴霧電離源裝置與質(zhì)譜儀進(jìn)樣口之間的角度和位置； 打開質(zhì)譜儀掃描系統(tǒng)，獲取檢測(cè)結(jié)果。
【專利摘要】本發(fā)明涉及分析化學(xué)領(lǐng)域，公開了一種內(nèi)部萃取電噴霧電離源及其質(zhì)譜分析方法，該內(nèi)部萃取電噴霧電離源由取樣器手柄11、定量取樣器12、毛細(xì)管固定器13、固定器內(nèi)套管14、萃取劑毛細(xì)管15、手?jǐn)Q接頭16和萃取劑通道17構(gòu)成，所述取樣器手柄11與定量取樣器12構(gòu)成取樣裝置，定量取樣器12、毛細(xì)管固定器13、固定器內(nèi)套管14、萃取劑毛細(xì)管15和手?jǐn)Q接頭16順序連接，并與萃取劑通道17連接。本發(fā)明保證分析結(jié)果的穩(wěn)定性和可信度。該電離源裝置內(nèi)置電噴霧嘴，取樣后可直接用于形成電噴霧，操作簡(jiǎn)便，并消除了由組織樣品紋路或血管的差異帶來的影響。本發(fā)明提高了iEESI-MS的穩(wěn)定性、定量能力和分析速度，并擴(kuò)展了iEESI-MS的應(yīng)用范圍。
【IPC分類】H01J49/10, G01N27/62
【公開號(hào)】CN104966658
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510394288
【發(fā)明人】陳煥文, 周煒, 劉坤, 魏益平, 朱亮, 徐建軍, 王志豪
【申請(qǐng)人】東華理工大學(xué), 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院
【公開日】2015年10月7日
【申請(qǐng)日】2015年7月7日