一種用于治療痛風性關(guān)節(jié)炎的土瓜提取物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥提取物領(lǐng)域，具體涉及一種土瓜提取物及含有該提取物的藥物制 劑，該提取物可以應用于制備治療痛風性關(guān)節(jié)炎的藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] 藥材土瓜為旋花科魚黃草屬植物山土瓜的塊根。又名土蛋（《遵義府志》）、滇土瓜 (《植物名實圖考》）、山土瓜（《中藥形性經(jīng)驗鑒別法》）、紅土瓜（《滇南本草》整理本)、土附、 山紅沼等。
[0003] 原植物山土瓜(學名：Merremiahungaiensis)為旋花科魚黃草屬的植物，為中國 的特有植物，分布在中國大陸的貴州、四川、云南等地。該植物為多年生纏繞草本，地下具 塊根，球形或卵狀，有時2-3個串生，表皮紅褐色、暗褐色或肉白色，含淀粉并有乳狀粘液。 莖細長，圓柱形，有細棱，大多旋扭，無毛。葉橢圓形、卵形或長圓形，長2. 5-11. 5厘米，寬 1. 2-5厘米，頂端鈍，微凹，漸尖或銳尖，具小短尖頭，基部鈍圓或楔形或微呈心形，邊緣微嚙 蝕狀或近全緣，兩面無毛，僅葉片基部被少數(shù)緣毛，有側(cè)脈5-6 (-7)對，脈有時帶紫色；葉 柄長0. 8-3. 5厘米，被短柔毛。聚傘花序腋生，花序梗長2-6厘米，無毛，著生2-3或數(shù)朵 花，或單花生葉腋；苞片小，鱗片狀，長約1毫米；花梗長0. 5-2厘米，比花序梗粗壯，無毛； 萼片等長，或外方2片稍短，橢圓形，頂端鈍，邊緣干膜質(zhì)，外萼片長0. 7-1. 4厘米，內(nèi)萼片長 1. 2-1. 5厘米，均無毛；花冠黃色，漏斗狀，長3. 5-6厘米，瓣中帶頂端被淡黃色短柔毛，其余 無毛；雄蕊稍不等長，花絲基部擴大，被毛；花盤環(huán)狀；子房圓錐狀，2室，無毛，柱頭2球形。 蒴果長圓形，高1-1. 3厘米，4瓣裂。種子長5. 5-7毫米，極密被黑褐色茸毛。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種土瓜提取物，其制備方法和液相分析方法，含有該提 取物的藥物制劑及利用該提取物制備治療痛風性關(guān)節(jié)炎的藥物的用途。
[0005] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的： 一種土瓜提取物，該提取物由以下方法制備： (a)以重量計，每1〇〇份藥材包含干燥的土瓜80~90份和干燥的菊花10~20份，混合粉 碎，用55%乙醇溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液；（b)將步 驟（a)所得乙醇提取濃縮液用水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，減 壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水 溶解，過濾，用大孔樹脂富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積除去大極性成分，再用 70%乙醇洗脫12個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮即得。
[0006] 為了能夠通過建立HPLC指紋圖譜的方法控制不同批次制備的提取物的批間差 異，所述提取物的液相分析方法為： 色譜柱：AgilentZorbaxExtent_C18 柱（4.6mmX250mm，5iim); 流動相：A為乙腈，B為0. 5%磷酸溶液； 梯度洗脫程序：〇? 〇l~5min，A10% - 15% ;5~10min，A15% - 48% ;10~25min，A48% - 78% ;25~30min，A78% - 10% ; 流動相流速：1.OmL?min%檢測波長：270nm;柱溫：35°C;進樣量：10yL。
[0007] 藥物制劑，含有治療有效量的所述提取物和藥學上可接受的載體。
[0008] 所述的提取物在制備治療痛風性關(guān)節(jié)炎的藥物中的應用。
[0009] 所述的藥物制劑在制備治療痛風性關(guān)節(jié)炎的藥物中的應用。
[0010] 本發(fā)明提取物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物制劑的形式使用。
[0011] 所述藥物制劑含有治療有效量的本發(fā)明土瓜提取物，其余為藥物學上可接受的、 對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0012] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物制劑以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明提取物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
[0013] 本發(fā)明的優(yōu)點：本發(fā)明通過對干燥的土瓜和菊花進行提取、除雜、富集處理，能得 到具有治療痛風性關(guān)節(jié)炎的提取物；本發(fā)明提供的液相分析方法可以用于建立該提取物的 指紋圖譜，用于控制不同批次制備的提取物的批間差異。
【附圖說明】
[0014] 圖1為土瓜提取物HPLC液相圖譜。
【具體實施方式】
[0015] 下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應當理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。
[0016] 實施例1:土瓜提取物①制備（85份土瓜，15份菊花） 藥材來源：土瓜和菊花購自安徽亳州中藥材市場。
[0017] 主要試劑：食品級乙醇購自上海凌峰化學試劑有限公司；醫(yī)藥級AB-8大孔樹脂購 自天津波鴻樹脂有限公司；乙腈為HPLC級，購于TEDIA;85%磷酸為HPLC級，購于TEDIA;色 譜用純凈水為哇哈哈純凈水。
[0018] 制備方法：將8. 5kg干燥土瓜根莖和1. 5kg干燥菊花混合粉碎，用55%乙醇溶液熱 回流提?。?5LX3次)，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所得乙醇提 取濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次)、乙酸乙酯（3LX3次)和水飽和的正丁醇 (3LX3次)萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物232g; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體積1. 5L) 富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積（12L)除去大極性成分，再用70%乙醇洗脫12 個柱體積（18L)，收集70%洗脫液，減壓濃縮，即得土瓜提取物約150g。
[0019] 實施例2:土瓜提取物②制備（80份土瓜，20份菊花） 制備方法：將8.Okg干燥土瓜根莖和2.Okg干燥菊花混合粉碎，用55%乙醇溶液熱回 流提?。?5LX3次)，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所得乙醇提取 濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次)、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽和的正丁醇 (3LX3次)萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物232g; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體積1. 5L) 富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積（12L)除去大極性成分，再用70%乙醇洗脫12 個柱體積（18L)，收集70%洗脫液，減壓濃縮，即得土瓜提取物約150g。
[0020] 實施例3:土瓜提取物③制備（90份土瓜，10份菊花） 制備方法：將9. 0kg干燥土瓜根莖和1. 0kg干燥菊花混合粉碎，用55%乙醇溶液熱回 流提?。?5LX3次)，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所得乙醇提取 濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次)、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽和的正丁醇 (3LX3次)萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物232g; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體積1. 5L) 富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積（12L)除去大極性成分，再用70%乙醇洗脫12 個柱體積（18L)，收集70%洗脫液，減壓濃縮，即得土瓜提取物約150g。
[0021] 實施例4:土瓜提取物④制備（75份土瓜，25份菊花） 制備方法：將7. 5kg干燥土瓜根莖和2. 5kg干燥菊花混合粉碎，用55%乙醇溶液熱回 流提?。?5LX3次)，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所得乙醇提取 濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次)、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽和的正丁醇 (3LX3次)萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物232g; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體積1. 5L) 富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積（12L)除去大極性成分，再用70%乙醇洗脫12 個柱體積（18L)，收集70%洗脫液，減壓濃縮，即得土瓜提取物約150g。
[0022] 實施例5 :土瓜提取物⑤制備（95份土瓜，5份菊花） 制備方法：將9. 5kg干燥土瓜根莖和0. 5kg干燥菊花混合粉碎，用55%乙醇溶液熱回 流提取（25LX3次)，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液（2L);將所得乙醇提取 濃縮液用水稀釋至3L，依次用石油醚（3LX3次)、乙酸乙酯（3LX3次）和水飽和的正丁醇 (3LX3次)萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物232g; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，醫(yī)用脫脂棉過濾，用AB-8大孔樹脂（2kg，柱體積1. 5L) 富集活性成分，先用10%乙醇沖洗8個柱體積（12L)除去大極性成分，再用70%乙醇洗脫12 個柱體積（18L)，收集70%洗脫液，減壓濃縮，即得土瓜提取物約150g。
[0023] 實施例6 :液相色譜分析 供試品溶液配制：取實施例1方法制得的提取物5mg至50mL棕色容量瓶中，加30mL10%乙腈水溶液超聲溶解，冷卻至室溫后，繼續(xù)加10%乙腈水溶液定容。分析方法如下： 高效液相色譜儀：Agilent1260,二元栗； 色譜柱：AgilentZorbaxExtent_C18 柱（4.6mmX250mm，5iim); 流動相：A為乙腈，B為0. 5%磷酸溶液； 梯度洗脫程序：〇? 〇l~5min，A10% - 15% ;5~10min，A15% - 48% ;10~25min，A48% - 78% ;25~30min，A78% - 10% ; 流動相流速：1.OmL?min%檢測波長：270nm;柱溫：35°C;進樣量：10yL。
[0024] 用制備的10批次的土瓜提取物進行分析，進行色譜峰匹配，結(jié)果1~12號峰在10 批樣品色譜圖中均出現(xiàn)。因此標定12個峰為共有色譜峰，據(jù)此建立該提取物的HPLC質(zhì)量 控制圖譜，結(jié)果見圖1。該10批次的土瓜提取