抗異育銀鯽細(xì)菌性敗血癥的卵黃抗體微膠囊飼料添加劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種水產(chǎn)養(yǎng)殖用飼料添加劑，特別設(shè)及一種用于抗異育銀娜細(xì)菌性敗 血癥的微膠囊飼料添加劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 異育銀娜是W黑龍江方正縣的銀娜作母本，江西省興國(guó)縣的紅經(jīng)作父本進(jìn)行遠(yuǎn)緣 雜交所獲得的優(yōu)良品種。該品種不僅肉質(zhì)鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，而且食性廣，生長(zhǎng)快，目前是我國(guó) 淡水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)的主要魚(yú)種之一，隨著其養(yǎng)殖規(guī)模及養(yǎng)殖密度的不斷擴(kuò)大，病害多有發(fā)生。其 中病原溫和氣單胞菌、嗜水氣單胞菌及維氏氣單胞菌等=種嗜溫氣單胞菌可引起異育銀娜 發(fā)生敗血癥，嚴(yán)重影響了異育銀娜的養(yǎng)殖生產(chǎn)，給養(yǎng)殖戶(hù)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，異 育銀娜細(xì)菌性敗血癥防控技術(shù)研究，是產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重大技術(shù)亟需。
[0003] 目前異育銀娜養(yǎng)殖生產(chǎn)中很難控制由溫和氣單胞菌、嗜水氣單胞菌及維氏氣單胞 菌等=種嗜溫氣單胞菌引起的疾病的發(fā)生與流行，市場(chǎng)上缺乏一種使用方便適合異育銀娜 使用的抗病飼料添加劑。因此，開(kāi)發(fā)研制異育銀娜抗細(xì)菌性敗血癥微膠囊飼料添加劑，對(duì)于 有效控制異育銀娜養(yǎng)殖生產(chǎn)中敗血癥的發(fā)生與流行具有重要的應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種提高異育銀娜抗病 力、降低異育銀娜養(yǎng)殖生產(chǎn)中由病原氣單胞菌所造成的危害、W滿(mǎn)足異育銀娜養(yǎng)殖生產(chǎn)上 的抗病需求的飼料添加劑。
[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)W下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是一種抗異 育銀娜細(xì)菌性敗血癥的卵黃抗體微膠囊飼料添加劑，其特點(diǎn)是，該添加劑由W下重量配比 的S種原料制成： (1) 抗異育銀娜細(xì)菌性敗血癥卵黃抗體凍干粉80~85% ; (2) 黃巧粉 10%~12〇/〇; (3) 0 -環(huán)糊精5~8〇/〇; 所述的抗異育銀娜細(xì)菌性敗血癥卵黃抗體凍干粉的制備方法步驟如下： ① 將引起異育銀娜細(xì)菌性敗血癥的病原溫和氣單胞菌（wAria) JY081016-1、嗜水氣單胞菌UerawonasA知rOjoAiia)WJ11-3及維氏氣單胞菌 DF-I菌株分別接種在普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基上，28-30°C搖床培養(yǎng)2地，加入體積終 濃度0. 3%的甲醒28°C滅活4她，離屯、得滅活菌體； ② 取黃巧用蒸饋水浸泡30-60min后煎煮，過(guò)濾，濃縮至終濃度為原藥1肖/111以得黃巧浸 出液； ③ 將S種滅活菌體與黃巧浸出液混合，制得水劑型疫苗；疫苗液中病原溫和氣單胞菌 JY081016-1、嗜水氣單胞菌WJ11-3及維氏氣單胞菌DF-I免疫原均達(dá)到l〇i°-l〇i2cells/mL， 黃巧浸出液為Ig/mL; ④用制得的=種病原氣單胞菌油乳劑滅活疫苗，采用口服及滴鼻免疫的方法免疫成年 產(chǎn)蛋雞，第1次免疫劑量為：口服免疫是將疫苗液加入到飲水中，加入量為5mL;滴鼻免疫 是將疫苗液滴入蛋雞鼻腔，滴入量為1mL;-周后按前述方法加強(qiáng)免疫，連續(xù)加強(qiáng)免疫5 次，共免疫6次，免疫結(jié)束后第6周，卵黃抗體效價(jià)達(dá)212-2"W上；收集被免疫雞所產(chǎn)雞蛋， 分離出卵黃，經(jīng)冷凍干燥，制得卵黃抗體凍干粉。
[0006] 本發(fā)明中所設(shè)及的制取抗異育銀娜細(xì)菌性敗血癥卵黃抗體凍干粉方法中，用制得 的=種病原氣單胞菌油乳劑滅活疫苗，采用口服及滴鼻聯(lián)合免疫的方法免疫成年產(chǎn)蛋雞， 并不是實(shí)現(xiàn)雞自身的免疫，因此它不屬于治療方法，而是通過(guò)非外科手術(shù)的方法處置動(dòng)物 W獲得其所產(chǎn)雞蛋，進(jìn)而分離出實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的卵黃，因此，該方法屬于專(zhuān)利法保護(hù)的范 圍。
[0007] 本發(fā)明所述的抗異育銀娜細(xì)菌性敗血癥的卵黃抗體微膠囊飼料添加劑，進(jìn)一步優(yōu) 選的技術(shù)方案如下： 1、抗異育銀娜細(xì)菌性敗血癥卵黃抗體凍干粉制備方法步驟④中，冷凍干燥時(shí)，蛋黃液 厚度6mm，凍干時(shí)間為IOho 陽(yáng)00引 2、所述的黃巧粉的粒徑在800~1000目，所述的0 -環(huán)糊精的純度不低于80%。
[0009] 3、采用噴霧干燥的方式，制得微膠囊飼料添加劑。
[0010] 4、各原料的最優(yōu)選的重量配比如下： (1) 抗異育銀娜細(xì)菌性敗血癥卵黃抗體凍干粉82. 5% ; (2) 黃巧粉11%; (3) 0-環(huán)糊精 6. 5〇/〇。
[0011] 本發(fā)明所述的異育銀娜溫和氣單胞菌JY081016-1菌株已經(jīng)在公開(kāi)文獻(xiàn)《異育銀 娜病原溫和氣單胞菌表型及分子鑒定與溶血素基因檢測(cè)》中所公開(kāi)(菌株JY081016-1)，上 述公開(kāi)文獻(xiàn)發(fā)表于《水生態(tài)學(xué)雜志》，2010,3 (4) :102-107。本發(fā)明所述的異育銀娜病原嗜 水氣單胞菌WJ11-3菌株已經(jīng)在公開(kāi)文獻(xiàn)《異育銀娜致病性嗜水氣單胞菌的分離鑒定與藥 敏特性研究》中所公開(kāi)(菌株WJ11-3)，上述公開(kāi)文獻(xiàn)發(fā)表于《水生態(tài)學(xué)雜志》，2012,33 (5): 108-113。本發(fā)明所述的異育銀娜病原維氏氣單胞菌DF-I菌株已經(jīng)在公開(kāi)文獻(xiàn)《異育銀娜 病原維氏氣單胞菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)》中所公開(kāi)(菌株DF-1)，上述公開(kāi)文獻(xiàn)發(fā)表于《淡 水漁業(yè)》，2012,42(5):22-26。菌株JY081016-UWJ11-3 及DF-I的DNA序列長(zhǎng)度及Genebank 登錄號(hào)見(jiàn)下表：
菌株JY081016-UWJ11-3及DF-I為公知公用材料，現(xiàn)保存在淮海工學(xué)院海洋學(xué)院實(shí)驗(yàn) 室，在本專(zhuān)利申請(qǐng)日起二十年內(nèi)，公眾如果需要，淮海工學(xué)院海洋學(xué)院實(shí)驗(yàn)室可對(duì)外發(fā)放。
[0012] 本發(fā)明的一種抗異育銀娜細(xì)菌性敗血癥的卵黃抗體微膠囊飼料添加劑的使用方 法如下：異育銀娜養(yǎng)殖期間，可按5%-10%的比例階段性添加在基礎(chǔ)飼料中投喂使用?？巩?育銀娜細(xì)菌性敗血癥的卵黃抗體微膠囊飼料添加劑，不僅具有良好的抗病作用，而且使用 方便，同時(shí)又具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
[0013] 本發(fā)明抗異育銀娜細(xì)菌性敗血癥的卵黃抗體微膠囊飼料添加劑，能增強(qiáng)異育銀娜 對(duì)=種嗜溫氣單胞菌的抵抗力，提高異育銀娜的成活率，增加異育銀娜養(yǎng)殖生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效 益，W解決目前異育銀娜養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中易發(fā)生由氣單胞菌引起的細(xì)菌性敗血癥的問(wèn)題。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)W下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的，W便于本領(lǐng)域的技 術(shù)人員進(jìn)一步地理解本發(fā)明，而不構(gòu)成對(duì)其權(quán)利的限制。
[0015] 實(shí)施例1，一種抗異育銀娜細(xì)菌性敗血癥的卵黃抗體微膠囊飼料添加劑，該添加劑 由W下重量配比的S種原料制成： (1) 抗異育銀娜細(xì)菌性敗血癥卵黃抗體凍干粉80% ; (2) 黃巧粉12%; (3) 0-環(huán)糊精8%; 所述的抗異育銀娜細(xì)菌性敗血癥卵黃抗體凍干粉的制備方法步驟如下： ① 將引起異育銀娜細(xì)菌性敗血癥的病原溫和氣單胞菌wAria) JY081016-1、嗜水氣單胞菌 AjWrOjoAiia)WJ11-3及維氏氣單胞菌 DF-I菌株分別接種在普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基上，28-30°C搖床培養(yǎng)2地，加入體積終 濃度0. 3%的甲醒28°C滅活4她，離屯、得滅活菌體； ② 取黃巧用蒸饋水浸泡30-60min后煎煮，過(guò)濾，濃縮至終濃度為原藥1肖/111以得黃巧浸 出液； ③ 將S種滅活菌體與黃巧浸出液混合，制得水劑型疫苗；疫苗液中病原溫和氣單胞菌 JY081016-1、嗜水氣單胞菌WJ11-3及維氏氣單胞菌DF-I免疫原均達(dá)到l〇i°-l〇i2cells/mL， 黃巧浸出液為Ig/mL; ④ 用制得的=種病原氣單胞菌油乳劑滅活疫苗，采用口服及滴鼻免疫的方法免疫成年 產(chǎn)蛋雞，第1次免疫劑量為：口服免疫是將疫苗液加入到飲水中，加入量為5mL;滴鼻免疫 是將疫苗液滴入蛋雞鼻腔，滴入量為1mL;-周后按前述方法加強(qiáng)免疫，連續(xù)加強(qiáng)免疫5 次，共免疫6次，免疫結(jié)束后第6周，卵黃