一種從松子油中純化皮諾斂酸的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物提取技術領域，具體是涉及一種從松子油中純化皮諾斂酸的方 法。
【背景技術】
[0002] 紅松（Pinus koraiensis Sieb. et Zucc)又名果松，屬于松科植物，主要分布在我 國東北長白山到小興安嶺一帶。屬珍稀植物。其果球大呈卵圓形，暗褐色，球內(nèi)結子，大如 巴豆、故意稱紅松子。松子作為美味小食品，市場上售價很高，約為30元/公斤，其種仁油 中含有多種極具開發(fā)價值的生理活性物質，如維生素A、維生素E以及人體必需的多種不飽 和脂肪酸、磷脂、留醇、多糖、黃酮等，人們飲食結構和營養(yǎng)保健作用都具重要意義。我國傳 統(tǒng)醫(yī)學認為松子為味美食品，油可食，具有降高血脂作用。據(jù)李時珍《本草綱目》記載：松子 味甘，性小溫，無毒。主治骨關節(jié)風濕、頭眩、祛風濕、潤五臟、充饑，逐風痹寒氣、補體虛、滋 潤皮膚，久服輕身延年不老。另有潤肺功能，治燥結咳。
[0003] 現(xiàn)代藥理研究表明松子油的主要功效都是其中的皮諾斂酸引起的，研究表明其不 僅能夠降低膽固醇（TC)、甘油三酯（TG)，升高高密度脂蛋白（HDL)，而且還能抑制、消除其 他不飽和脂肪酸對機體的不利影響。同時，目前最新研究表明，它還具有抗炎、解熱、鎮(zhèn)痛， 對抗各種真菌、病毒感染，促進中老年人排泄功能等作用。它被專家譽為洗血因子，是剛剛 引起醫(yī)學界重視的新功能因子。能夠調節(jié)血脂異常，在美國已有以其為主要功能成分的減 肥食品出售。并且它只存在于松子油中。
[0004] 皮諾斂酸結構如下式所示：
[0005]
[0006] 其結構是含有三個不飽和鍵的不飽和脂肪酸，而松子油大部分都是飽和脂肪酸， 如何從脂肪酸中分離開飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸，一直是研究難點，一般非高壓的制備 型液相色譜都很難分離開亞油酸和亞麻酸，目前方法有：低溫結晶法、尿素包合法、銀離子 吸附分離法、柱色譜法、精餾分離法、硝酸銀絡合萃取法、色譜分離法、脂肪酶分離法和冷凍 結晶法等。尿素包合法常用于分離不飽和脂肪酸，為得到高純度產(chǎn)品需要配合低溫結晶多 次包合，存在造成收率低、尿素回收困難等缺點。分子蒸餾法，需要低溫高真空度下進行，雖 然能有效防止不飽和酸受熱氧化分解，但需高真空設備，通過多級蒸餾處理后可獲得不飽 和脂肪酸，但需要有專用的分子蒸餾設備，耗能較高，投入成本高，并且研究顯示依靠單一 的分子蒸餾手段不能獲得高純度的不飽和脂肪酸。銀離子吸附分離法具有選擇性，能獲得 高純度的不飽和脂肪酸，但洗脫劑易造成環(huán)境污染且分離的規(guī)模較小，柱填料不能重復使 用。柱色譜法是現(xiàn)代分離檢測方法，適用于少量定性分離不適用于大批量生產(chǎn)。硝酸銀絡 合萃取法具有高選擇性，但此方法適用范圍小，溶劑價格高且回收再利用比較難。脂肪酶分 離法利用脂肪酶對甘油三酯進行選擇性水解從而達到分離目的，具有選擇性，但脂肪酶價 格昂貴，固化效果不穩(wěn)定。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明提供一種從松子油中純化皮諾斂酸的方法，提供一種操作簡便、安全、經(jīng) 濟、不飽和脂肪酸純度和收率較高，并能適應工業(yè)生產(chǎn)需求的不飽和脂肪酸的分離方法。
[0008] 本發(fā)明采取的技術方案是，包括下列步驟：
[0009] A.松子油的皂化處理；B.萃取液的配制；C.絡合皮諾斂酸；D.解離皮諾斂酸； E.皮諾斂酸洗脫。
[0010] 本發(fā)明一種實施方式是所述步驟A.松子油的皂化處理是指，取紅松松子油，置于 4-8倍體積的60-100%乙醇溶液中，加入乙醇溶液質量分數(shù)10% -30%的氫氧化鈉或氫氧 化鉀，室溫攪拌24-48h或加熱回流0. 5-2h后，減壓回收乙醇溶液至原體積的1/2-1/5,加入 蒸餾水至原體積的0. 5-2倍，調pH2-3,加入相同體積正己烷或石油醚萃取2-3次，減壓回 收有機溶劑得皂化后的松子油脂肪酸。
[0011] 本發(fā)明一種實施方式是所述步驟B.萃取液的配制是指：
[0012] 配制硫酸銅2m〇l/l-4m〇l/l的無機離子水液，并添加體積比1/8-1/3的甲醇；有機 相為含質量分數(shù)為10-30%的季戊四醇四油酸酯的石油醚。
[0013] 本發(fā)明一種實施方式是所述步驟C.絡合皮諾斂酸是指，將皂化后的松子油脂肪 酸用正己烷或石油醚溶解配成0. 2-1. Og/ml有機溶液，按1:1-1:3配比加入步驟B配好 的無機離子水液，和含質量分數(shù)為10-30%的季戊四醇四油酸酯的石油醚，攪拌均勻放置0 度-零下15度的反應釜中，并攪拌低溫萃取30-60min。
[0014] 本發(fā)明一種實施方式是所述步驟D.解離皮諾斂酸是指，將萃取液倒入分液漏斗 里靜置30min-60min，待液體完全靜置分層后，傾放出下層水液，轉移至反應釜加入等量的 正己燒，加熱至50度-70度，攪拌萃取30min_60min。
[0015] 本發(fā)明一種實施方式是所述步驟E.皮諾斂酸洗脫是指，將上步萃取液靜置，分層 后，放出正己烷部位，加入飽和NaCl溶液體積是正己烷的2-5倍，然后分層保留正己烷部 位，后用蒸餾水洗脫，體積是正己烷的10-20倍，分層后正己烷部位加無水硫酸鈉放置過夜 除水后，減壓蒸餾除去正己烷得產(chǎn)品。
[0016] 本發(fā)明選擇與銀離子同族的銅離子為無機水相離子，并選含季戊四醇四油酸酯為 有機相，選擇性的萃取了含三個不飽和鍵的皮諾斂酸。這里的季戊四醇四油酸酯起到兩個 作用，一是能結合飽和脂肪酸進入有機相，二是能起到一種極化作用促進銅離子與含三個 不飽和鍵的皮諾斂酸絡合。一般銀離子能夠與三個雙鍵以上的不飽和脂肪酸絡合進入水 相，其原理是不飽和鍵的電子進入銀離子的空d軌道發(fā)生絡合，但由于銀離子比較昂貴 限制了其應用，本發(fā)明選擇了價格便宜的銅離子也能提供一個空軌道，在促極化劑的作用 下不飽和脂肪酸的雙鍵變形從而易于提供電子，銅離子與不飽和的脂肪酸絡合進入水 相，達到分離的目的。
[0017] 采用本發(fā)明方法最終得到的松子油不飽和酸達到99. 5%以上，其中皮諾斂酸達到 75 %以上，并且所使用的萃取劑容易配制，成本低廉，本方法適合產(chǎn)業(yè)規(guī)?；a(chǎn)松子油中 的皮諾斂酸。
【附圖說明】
[0018] 圖1是松子油不飽和脂肪酸的HPLC測定圖。
【具體實施方式】
[0019] 實施例1
[0020] 包括下列步驟：
[0021] A.松子油的皂化處理；
[0022] 取紅松松子油，置于4倍體積的60%乙醇溶液中，加入乙醇溶液質量分數(shù)10%的 氫氧化鈉或氫氧化鉀，室溫攪拌24h或加熱回流0. 5h后，減壓回收乙醇溶液至原體積的 1/5,加入蒸餾水至原體積的0. 5倍，調pH2,加入相同體積正己烷或石油醚萃取2次，減壓 回收有機溶劑得皂化后的松子油脂肪酸；
[0023] B?萃取液的配制；
[0024] 萃取液的配制是指，配制一種含無機離子的水液及能夠與飽和脂肪酸結合的含季 戊四醇四油酸酯的有機相，其中無機離子能夠與松子油中的皮諾斂酸絡合成水相進而與 松子油中其它脂肪酸分尚的液體；
[0025] 配制硫酸銅2mol/l的無機離子水液，并添加體積比1/8的甲醇；
[0026] 有機相為含質量分數(shù)為10-30%的季戊四醇四油酸酯的石油醚；
[0027] C?絡合皮諾斂酸；
[0028] 將皂化后的松子油脂肪酸用正己烷或石油醚溶解配成0. 2g/ml有機溶液，按1 : 1配比加入步驟B配好的無