的生長(zhǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中不需要基質(zhì)，占地面積??；
[0039]4)本發(fā)明所述基于噴霧式植物反應(yīng)器百合遺傳轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)化周期短，檢測(cè)的陽(yáng)性率達(dá)
[0040]0.3%，移栽成活率達(dá)到85%，大大提高了轉(zhuǎn)化的效率。
[0041]本發(fā)明采用藍(lán)紫光進(jìn)行補(bǔ)光，主要是促進(jìn)植物細(xì)胞的分化，并促進(jìn)植物伸長(zhǎng)與幼芽形成；采用的噴淋溶液不加銨鹽和糖，不加銨鹽是防止抑制了農(nóng)桿菌的生長(zhǎng)，促進(jìn)農(nóng)桿菌吸附受體細(xì)胞，獲得較高的轉(zhuǎn)化效率，提高抗性苗的誘導(dǎo)率；同時(shí)防止糖分過(guò)多導(dǎo)致鱗片腐爛；本發(fā)明中采用1/2MS+6-BA1.0+ΝΑΑ0.2+As0.2的溶液，1/2MS更有利于刺激根部，促進(jìn)其生根，AS可以提高農(nóng)桿菌介導(dǎo)單子葉植物遺傳轉(zhuǎn)化率。本發(fā)明中采用的三角形霧培箱操作方便，節(jié)省空間，可以充分利用光照條件，梯形霧培箱可以保證噴霧有效覆蓋需要噴淋的區(qū)域且無(wú)重復(fù)覆蓋，最大限度提高營(yíng)養(yǎng)液的利用率，利于操作，管理方便，本發(fā)明裝置上的創(chuàng)新在于將三角形和梯形一起使用形成一個(gè)系統(tǒng)，能夠提高營(yíng)養(yǎng)液的利用率，最大限度的利用光照條件和溫室空間。且利于操作，管理方便。
[0042]下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的基于噴霧式植物反應(yīng)器的百合鱗片遺傳轉(zhuǎn)化方法作進(jìn)一步說(shuō)明。
【附圖說(shuō)明】
[0043]圖1為本發(fā)明中噴霧式植物反應(yīng)器的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0044]圖2為本發(fā)明中第一霧培箱的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0045]圖3為本發(fā)明中第二霧培箱的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0046]實(shí)施例1
[0047]如圖1?圖3所示，一種基于噴霧式植物反應(yīng)器的百合鱗片遺傳轉(zhuǎn)化方法，包括如下步驟:
[0048](A)在第一液體培養(yǎng)基中進(jìn)行農(nóng)桿菌培養(yǎng)；第一液體培養(yǎng)基為L(zhǎng)B+Rifamycin50mg/L+Km 50mg/L，體積為 250mL，培養(yǎng)條件為:28°C，200rpm，0D600 = 0.6-1.0 之間。
[0049](B)進(jìn)行菌液的離心，收集菌體，采用第二液體培養(yǎng)基重新懸浮菌體；菌液在6000rpm 條件下進(jìn)行離心，收集菌體，用 1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+As0.2mg/L 重新懸浮菌體，至0D600 = 0.6-1.0之間。
[0050](C)取洗凈的百合鱗片浸沒(méi)于重懸后的菌體中，取出百合鱗片，將其基部浸入第二液體培養(yǎng)基中，進(jìn)行黑暗培養(yǎng)，即共培養(yǎng)；
[0051]取洗凈的百合鱗片浸沒(méi)于重懸后的菌體中15分鐘，取出百合鱗片后將其置于培養(yǎng)容器中，培養(yǎng)容器包括培養(yǎng)盤(pán)和與其匹配的盤(pán)蓋，培養(yǎng)盤(pán)由深色塑料制成，包括盤(pán)底和4個(gè)培養(yǎng)盤(pán)側(cè)壁，均為長(zhǎng)方形，盤(pán)蓋由透明塑料制成，包括頂板和4個(gè)頂板側(cè)壁，均為長(zhǎng)方形，培養(yǎng)盤(pán)和盤(pán)蓋的規(guī)格均為長(zhǎng)18.5cm，寬14.5cm，高4.5cm ；4個(gè)培養(yǎng)盤(pán)側(cè)壁和4個(gè)頂板側(cè)壁均壓制成瓦楞型以增加強(qiáng)度；
[0052]在培養(yǎng)盤(pán)內(nèi)的底部鋪設(shè)有培養(yǎng)基質(zhì)，培養(yǎng)基質(zhì)的鋪設(shè)高度為1.5cm，培養(yǎng)基質(zhì)為陶?；蛘渲閹r；在培養(yǎng)盤(pán)內(nèi)底部還包括Icm高度的第二液體培養(yǎng)基，第二培養(yǎng)基為去除糖和銨鹽的 1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+As0.2mg/L 的溶液；
[0053]將百合鱗莖的基部向下插入固定在培養(yǎng)基質(zhì)中，并使其基部浸沒(méi)在第二培養(yǎng)基內(nèi)，蓋上盤(pán)蓋，于28 °C黑暗培養(yǎng)3-5天。
[0054](D)取出共培養(yǎng)后的百合鱗片，置于噴霧式植物反應(yīng)器中，進(jìn)行百合鱗莖芽誘導(dǎo)，采用噴淋溶液對(duì)百合鱗莖進(jìn)行噴淋處理，獲得誘導(dǎo)的小鱗莖；
[0055]具體包括如下步驟:取出共培養(yǎng)后的百合鱗片，置于噴霧式植物反應(yīng)器中，采用噴淋溶液噴淋處理，進(jìn)行百合鱗莖芽誘導(dǎo)；
[0056]所述噴淋溶液為含有6-BA 5.0和NAA 1.0的溶液，設(shè)置噴霧控制系統(tǒng)，前15天每天噴霧6次，15天之后每天噴霧4次，每次2min，在每次噴淋結(jié)束后等待lmin，對(duì)噴霧式植物反應(yīng)器底部的殘液進(jìn)行過(guò)濾處理后回收，回收時(shí)間2min ;13-15天鱗片基部會(huì)萌發(fā)出不定芽，40-50天即可獲得誘導(dǎo)的小鱗莖。
[0057](E)將誘導(dǎo)的小鱗莖進(jìn)行移栽，進(jìn)行轉(zhuǎn)基因植株的篩選。
[0058]噴霧式植物反應(yīng)器包括第一霧培箱1、第二霧培箱2、水箱3、回收水箱4和控制系統(tǒng):
[0059]第一霧培箱I包括長(zhǎng)方形的第一底板101和頂部水平支架102，頂部水平支架102的左端通過(guò)兩個(gè)第一側(cè)支架分別與第一底板101的左側(cè)兩端相連，頂部水平支架102的右端通過(guò)兩個(gè)第一側(cè)支架分別與第一底板101的右側(cè)兩端相連；第一霧培箱I的內(nèi)部包括第一培養(yǎng)架103 ;第一底板101為傾斜設(shè)置，與水平面的夾角為10?15°，在第一底板101的較低一側(cè)設(shè)置有第一集水槽104 ;在第一培養(yǎng)架103的上部水平設(shè)置有第一導(dǎo)水管105，在第一導(dǎo)水管105的上部從左至右依次等距設(shè)置有6個(gè)第一霧化噴頭106，在第一導(dǎo)水管105的下部從左至右依次等距設(shè)置有7個(gè)第二霧化噴頭107，6個(gè)第一霧化噴頭106和7個(gè)第二霧化噴頭107均與第一導(dǎo)水管105相連通；
[0060]第二霧培箱2包括均為長(zhǎng)方形的第二底板201和頂板202，頂板202的長(zhǎng)與第二底板201的長(zhǎng)一致，寬小于第二底板201的寬，頂板202的4個(gè)端點(diǎn)分別通過(guò)第二側(cè)支架與第二底板201的4個(gè)端點(diǎn)相連，第二霧培箱2的內(nèi)部包括第二培養(yǎng)架203 ;第二底板201為傾斜設(shè)置，與水平面的夾角為10?15°，在第二底板201的較低一側(cè)設(shè)置有第二集水槽204 ;在頂板202下部前后水平設(shè)置有第二導(dǎo)水管205和第三導(dǎo)水管206 ；
[0061]第一培養(yǎng)架103和第二培養(yǎng)架203均由上下平行設(shè)置的多個(gè)置物網(wǎng)5構(gòu)成，多個(gè)置物網(wǎng)5之間為可拆卸地連接，在每個(gè)置物網(wǎng)5上間隔設(shè)置有多個(gè)置物海綿6 ;
[0062]在第二培養(yǎng)架中203，在最頂端的置物網(wǎng)5的下部前后水平設(shè)置有第四導(dǎo)水管207和第五導(dǎo)水管208，在第二導(dǎo)水管205、第三導(dǎo)水管206、第四導(dǎo)水管207、第五導(dǎo)水管208上從左至右依次等距設(shè)置有7個(gè)第三霧化噴頭209 ;
[0063]水箱3通過(guò)第一管路7與第一導(dǎo)水管105相連，通過(guò)第二管路8分別與第二導(dǎo)水管205、第三導(dǎo)水管206、第四導(dǎo)水管207和第五導(dǎo)水管208相連；
[0064]回收水箱4的入口通過(guò)第三管路9與第一集水槽104的底部相連，通過(guò)第四管路10與第二集水槽204的底部相連，回收水箱4的出口通過(guò)第五管路11與水箱3相連；
[0065]控制系統(tǒng)，在第一管路7、第二管路8、第三管路9、第四管路10、第五管路11上均設(shè)置有閥門(mén)，在回收水箱4的入口處、出口處以及水箱3的出口處均設(shè)置有水栗和驅(qū)動(dòng)裝置，控制系統(tǒng)與驅(qū)動(dòng)裝置相連。
[0066]6個(gè)第一霧化噴頭106和7個(gè)第二霧化噴頭107為從左至右交錯(cuò)設(shè)置；在第一培養(yǎng)架103和第二培養(yǎng)架203中，相鄰的上下兩個(gè)置物網(wǎng)5上的置物海綿6為交錯(cuò)設(shè)置；
[0067]在第一霧培箱I和第二霧培箱2的底部設(shè)置有多個(gè)支撐腳，在支撐腳的底部固定有萬(wàn)向輪。
[0068]第一霧培箱I和第二霧培箱2的四周均設(shè)置有透明塑料制成的板材，其中，前部的板材與第一霧培箱I或第二霧培箱2之間為活動(dòng)連接；第二霧培箱2的頂板202為透明塑料制成的板材；
[0069]在第一霧培箱I和第二霧培箱2后側(cè)的板材外側(cè)固定有藍(lán)紫色光源，藍(lán)紫色光源為發(fā)出藍(lán)色光的LED燈帶，呈網(wǎng)狀布置。
[0070]第一霧化噴頭106為6個(gè)，第二霧化噴頭107為7個(gè)，在第二導(dǎo)水管205、第三導(dǎo)水管206、第四導(dǎo)水管207、第五導(dǎo)水管208上各設(shè)置有7個(gè)第三霧化噴頭209 ;在第三管路9和第四管路10上還設(shè)置有過(guò)濾裝置。
[0071]在第一霧培箱I中，第一培養(yǎng)架103長(zhǎng)度為280cm，寬度為40cm，第一培養(yǎng)架103包括3個(gè)置物網(wǎng)5，相鄰兩個(gè)置物網(wǎng)5之間的距離為30cm，置物海綿6的長(zhǎng)度為40cm，寬度與置物網(wǎng)5的寬度一致，處于同一高度的相鄰兩個(gè)置物海綿6之間的距離為40cm ;第一底板101長(zhǎng)為300cm，寬為110cm，第一霧培箱I高度為140cm，最下部的置物網(wǎng)5與第一底板101之間的距離為5cm ；
[0072]在第二霧培箱2中，第二培養(yǎng)架203長(zhǎng)度為180cm，包括4個(gè)置物網(wǎng)5，從上到下寬度分別為72cm、72cm、100cm、110cm，相鄰兩個(gè)置物網(wǎng)5之間的距離為30cm，置物海綿6的長(zhǎng)度為40cm，寬度與置物網(wǎng)5的寬度一致，處于同一高度的相鄰兩個(gè)置物海綿6之間的距離為40cm ;第二底板201長(zhǎng)為200cm，寬為150cm，頂板202長(zhǎng)為200cm，寬為50cm，第二霧培箱2高度為140cm，最下部的置物網(wǎng)5與第一底板201之間的距離為5cm。
[0073]以上