Tcf4蛋白在作為胃癌檢測標記物中的應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及TCF4蛋白在作為胃癌檢測標記物中的應用，特別 涉及檢測TCF4蛋白含量的物質(zhì)在制備用于監(jiān)測胃癌發(fā)生和/或發(fā)展的產(chǎn)品中的應用。
【背景技術(shù)】
[0002] 胃癌是一種嚴重危害人類健康的惡性腫瘤，我國是胃癌的高發(fā)區(qū)，每年新增病例 接近全球總數(shù)的一半。由于胃癌早期臨床癥狀特異性低和缺乏簡便有效的監(jiān)測指標，近半 數(shù)胃癌患者在確診時多已處于進展期，往往發(fā)生局部或遠處轉(zhuǎn)移，從而失去了最佳治療時 期。腫瘤的轉(zhuǎn)移和復發(fā)往往是導致預后不良的重要因素，它的發(fā)生機制十分復雜，通常涉及 多基因、多階段、多因素參與。因此，進一步探索研究新的基因表達變化與胃癌發(fā)生發(fā)展及 其惡性特征的關(guān)系，對揭示其發(fā)生發(fā)展的分子機制及設(shè)計合理的治療方案及判斷預后，提 高胃癌的治療水平具有重要意義。
[0003] T細胞因子4(T cell factor 4，TCF4)又叫TCF7L2(transcription factor 71ike 2)，屬于Wnt信號通路中核轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF(T_Cell Factor/Lymphoid Enhancer Factor) 家族成員，其他成員有TCF-1(TCF7)，TCF-3(TCF7L1)和LEF1，其全長氨基酸序列含有四個功 能區(qū)域:第一個是與β-catenin結(jié)合的結(jié)構(gòu)域，位于N末端;第二個是高迀移率族蛋白結(jié)構(gòu)域 (high mobility group domain，HMG-box)，這是該家族成員均具有的結(jié)構(gòu)域，它是一組高 度保守的DNA結(jié)合域，可以結(jié)合到Wnt反應元件;第三個是核定位信號結(jié)構(gòu)域，第四個是羧基 端蛋白結(jié)合域，該區(qū)域是選擇性剪接的高頻位點。這四個結(jié)構(gòu)域不是獨立的，其作用是相互 影響的。
[0004] 本領(lǐng)域迫切需要進行對腫瘤信號通路中關(guān)鍵基因的研究，尤其是在中國發(fā)病率很 高的胃癌的相關(guān)基因，闡明這些基因與胃癌的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，可以為胃癌的診斷和治療 提供新的手段。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種TCF4蛋白的新用途。
[0006] 本發(fā)明所提供的新用途具體為用于檢測如下（1)-(3)中任一的檢測物在制備用于 監(jiān)測胃癌發(fā)生和/或發(fā)展的產(chǎn)品中的應用：
[0007] (1)TCF4蛋白；
[0008] (2)編碼所述TCF4蛋白的mRNA;
[0009] (3)編碼所述TCF4蛋白的基因。
[0010] 其中，所述檢測物可為任何能夠?qū)崿F(xiàn)對所述TCF4蛋白或所述mRNA或所述基因進行 定量檢測的試劑和/或儀器。具體可選自如下中任一種:抗所述TCF4蛋白的特異性抗體、用 于擴增所述基因的特異性擴增引物、用于檢測所述mRNA或所述基因的探針或芯片。對所述 TCF4蛋白或所述mRNA或所述基因進行定量檢測包括但不限于:使用DNA探針或熒光探針直 接檢測胃癌組織DNA基因組中的TCF4基因，設(shè)計TCF4的PCR引物使用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應 (RT-PCR)方法檢測TCF4的mRNA，使用免疫組化、免疫熒光、流式細胞等方法檢測轉(zhuǎn)錄TCF4基 因的蛋白并對蛋白進行染色標記。
[0011]胃癌惡性程度高，胃癌原發(fā)病灶處的TCF4蛋白表達量也高，反之亦然，因此胃癌原 發(fā)病灶處的TCF4蛋白表達量高低在一定程度上可以直接反應胃癌預后情況。
[0012]本發(fā)明還提供了一種用于監(jiān)測胃癌發(fā)生的系統(tǒng)。
[0013] 本發(fā)明所提供的用于監(jiān)測胃癌發(fā)生的系統(tǒng)，包含用于檢測如下（1)-(3)中任一的 檢測物：
[0014] (1)TCF4蛋白；
[0015] (2)編碼所述TCF4蛋白的mRNA;
[0016] (3)編碼所述TCF4蛋白的基因。
[0017]所述系統(tǒng)還包含數(shù)據(jù)處理裝置;所述數(shù)據(jù)處理裝置內(nèi)設(shè)模塊1和模塊2;所述模塊1 具有如下(al)所示的功能，所述模塊2具有如下(a2)所示的功能：（al)采集并比較待測者與 對照者的組織樣本中所述TCF4蛋白或所述mRNA或所述基因的表達量；（a2)根據(jù)比較結(jié)果按 照如下方法確定所述待測者是否為胃癌患者:若所述待測者的組織樣本中所述TCF4蛋白或 所述mRNA或所述基因的表達量顯著高于所述對照者的組織樣本中所述TCF4蛋白或所述 mRNA或所述基因的表達量，則所述待測者為或候選為胃癌患者;反之，則所述待測者不為或 候選不為胃癌患者;所述對照者為健康人或良性胃炎患者。
[0018] 其中，所述組織樣本可為胃組織樣本。所述健康人以及所述良性胃炎患者為經(jīng)過 臨床確認的健康人及良性胃炎患者。
[0019] 在實際使用中，最好采用病理組織學進行進一步鑒定。
[0020] 所述檢測物可為任何能夠?qū)崿F(xiàn)對所述TCF4蛋白或所述mRNA或所述基因進行定量 檢測的試劑和/或儀器。具體可選自如下中任一種:抗所述TCF4蛋白的特異性抗體、用于擴 增所述基因的特異性擴增引物、用于檢測所述mRNA或所述基因的探針或芯片。對所述TCF4 蛋白或所述mRNA或所述基因進行定量檢測的方法包括但不限于:使用DNA探針或熒光探針 直接檢測胃癌組織DNA基因組中的TCF4基因，設(shè)計TCF4的PCR引物使用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應 (RT-PCR)方法檢測TCF4的mRNA，使用免疫組化、免疫熒光、流式細胞等方法檢測轉(zhuǎn)錄TCF4基 因的蛋白并對蛋白進行染色標記。
[0021 ]在本發(fā)明的一個實施例中，對所述TCF4蛋白進行定量檢測的方法具體為免疫組化 染色法，根據(jù)染色結(jié)果采用以下標準給予TCF4蛋白表達評分：（1)陽性細胞比例評分標準： 染色比例〈5%為0分；2 5%且〈25%為1分；2 25%且〈50%為2分；2 50%且〈75%為3分，2 75%為4分。（2)染色強度評分標準:無染色為0分;淡黃色為1分；明顯的黃棕色為2分;強棕 褐為3分。在40倍物鏡下隨機選取5個視野，以5個視野陽性細胞比例與染色強度評分的乘積 最后的平均值為最后得分。以得分的高低反應所述TCF4蛋白的表達量的高低。在本發(fā)明的 另一個實施例中，對編碼所述TCF4蛋白的mRNA的檢測方法具體為實時熒光定量RT-PCR法。 在本發(fā)明的再一個實施例中，對所述TCF4蛋白進行定量檢測的方法具體為western blot檢 測法。
[0022]如下(a)-(d)所示物質(zhì)中的任一種在促進胃癌細胞迀移和/或制備用于促進胃癌 細胞迀移的產(chǎn)品中的應用也屬于本發(fā)明的保護范圍：
[0023] (a)TCF4 蛋白；
[0024] (b)編碼所述TCF4蛋白的基因；
[0025] (c)含有所述基因的表達盒、重組載體或轉(zhuǎn)基因細胞；
[0026] (d)能夠促進所述TCF4蛋白表達的物質(zhì)。
[0027] 能夠抑制所述TCF4蛋白表達的物質(zhì)在抑制胃癌細胞迀移和/或制備用于抑制胃癌 細胞迀移的產(chǎn)品中的應用也屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0028] 本發(fā)明還提供了一種用于促進胃癌細胞迀移的產(chǎn)品以及用于抑制胃癌細胞迀移 的產(chǎn)品。
[0029]本發(fā)明所提供的用于促進胃癌細胞迀移的產(chǎn)品，其活性成分為如下(a)-(d)所示 物質(zhì)中的任一種：
[0030] (a)TCF4 蛋白；
[0031] (b)所述TCF4蛋白的編碼基因；
[0032] (c)含有所述編碼基因的表達盒、重組載體或轉(zhuǎn)基因細胞；
[0033] (d)能夠促進所述TCF4蛋白表達的物質(zhì)。
[0034]本發(fā)明所提供的用于抑制胃癌細胞迀移的產(chǎn)品，其活性成分為能夠抑制所述TCF4 蛋白表達的物質(zhì)。
[0035]在本發(fā)明中，所述"能夠抑制所述TCF4蛋白表達的物質(zhì)"具體為EdTP載體。所述 EdTP載體為addgene公司產(chǎn)品，Plasmid#24311 (Gene/Insert name:EF lalpha_dnhTcf4// SV40-PuroR)〇
[0036] 本發(fā)明還保護如下(A)或(B)所示的方法：
[0037] (A)促進胃癌細胞迀移的方法，包括如下步驟:向目的胃癌細胞中導入編碼TCF4蛋 白的基因，得到表達所述基因的重組胃癌細胞;所述重組胃癌細胞的迀移速度與所述目的 胃癌細胞的迀移速度相比提高；
[0038] (B)抑制胃癌細胞迀移的方法，包括如下步驟:抑制目的胃癌細胞中編碼TCF4蛋白 的基因的表達，得到所述基因被抑制的重組胃癌細胞;所述重組胃癌細胞的迀移速度與所 述目的胃癌細胞的迀移速度相比降低。
[0039]在所述(A)的方法中，所述編碼TCF4蛋白的基因是通過重組表達載體的形式導入 所述目的胃癌細胞的；所述重組表達載體是在pCMV6-Entry載體的Sgf I酶切位點和Mlul酶 切位點之間插入序列2所示DNA片段后得到的重組質(zhì)粒。
[0040] 在所述⑶的方法中，所述"抑制目的胃癌細胞中編碼TCF4蛋白的基因的表達"的 方法可為任何能夠抑制所述目的胃癌細胞中所述編碼TCF4蛋白的基因表達的方法。在本發(fā) 明中，所述方法具體為向所述目的胃癌細胞中導入TCF4沉默載體;所述TCF4沉默載體可為 EdTP載體；所述EdTP載體具體為addgene公司產(chǎn)品，Plasmid#24311 (Gene/Insert name : EFlalpha-dnhTcf4//SV4〇-PuroR)〇
[0041] 所述方法為非疾病診斷性方法。
[0042]在本發(fā)明中，所述TCF4蛋白為序列表中序列1所示蛋白質(zhì)。編碼所述TCF4蛋白的編 碼基因可為如下中任一種：
[0043] (1)序列表中序列2所示的