用于治療纖維化疾病的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明一般性設(shè)及用于治療纖維化疾病的方法，更具體地設(shè)及用于治療纖維化疾 病的抗CSFl-R抗體。
【背景技術(shù)】
[0002] 集落刺激因子I(CSF-I)(也被稱為巨隧細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF))是由各種細(xì)胞 (包括內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞)產(chǎn)生的細(xì)胞因子。CSF-I包含兩個"單體"多膚，運兩個"單體" 多膚形成生物學(xué)活性的二聚體CSF-I蛋白。由于RNA選擇性剪接、蛋白質(zhì)前體的蛋白水解加 工和翻譯后修飾(包括糖基化和蛋白聚糖的添加），CSF-I至少WS種成熟形式存在（參見 Cerretti DP等人，1988,Mol Immunol,25(8),761 ;Pixley FJ和Stanley ER,2004,Trends in Cell Biology, 14( 11 )628-38; Douglass, TG 等人，2008, Int Immuno 曲 armacol, 8,1354-76)。各種形式的CSF-I蛋白包括兩種分泌型分子，一種是糖基化的，另一種包含更長的氨基 末端序列和蛋白聚糖修飾。另一種變體是跨膜(TM)分子，其是糖基化的但不具有蛋白聚糖 部分。運種膜形式可W通過蛋白水解切割而脫落W釋放活性、可溶分子。所有形式均被產(chǎn)生 為前體多膚，其具有氨基端的32個氨基酸的信號序列、近簇基端的大約23個氨基酸的推定 跨膜區(qū)和短的胞質(zhì)COOH端尾。隨后，前體膚通過氨基端和簇基端蛋白水解切割進(jìn)行加工W 產(chǎn)生成熟形式的CSF-I，其中殘基1-149是相同的并構(gòu)成受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域。在體內(nèi)，CSF-I單 體是糖基化的，并通過二硫鍵發(fā)生二聚化。CSF-I屬于一組生物學(xué)激動劑，其促進(jìn)血細(xì)胞的 產(chǎn)生。具體地，它用作單核吞隧細(xì)胞譜系的骨髓祖細(xì)胞的生長、分化和存活因子。此外，CSF-1通過應(yīng)答細(xì)胞上的特異性受體刺激巨隧細(xì)胞的存活、增殖和功能。
[0003] CSF-I受體(CSF-IR)也被稱為c-fms基因產(chǎn)物或CD115dCSF-1R是16化Da的1型TM糖 蛋白，其屬于III型受體酪氨酸激酶家族。還已經(jīng)顯示，除了CSF-I之外，結(jié)構(gòu)上相似但序列 不相關(guān)的分子IL-34也是針對CSF-IR的配體化in等人，2008，Science 320:807-811) XSF-IR的表達(dá)主要局限于單核細(xì)胞-巨隧細(xì)胞譜系（循環(huán)和駐留組織的群體）的細(xì)胞，包括破骨 細(xì)胞。此外，它表達(dá)于雌性生殖系統(tǒng)的許多細(xì)胞，包括卵母細(xì)胞、蟻膜細(xì)胞和滋養(yǎng)層細(xì)胞 (Pollard JW和Stanley ER,1996Advances in Developmental Biochemistry Vol 4, 1996,Pages l53-l93(Pleio1:;ropic Roles for CSF-Iin Development Defined by the Mouse Mutation 0steope1:;rotic);A;rceci RJ,PNAS 1989,86(22),8818-8822(Temporal Expression and Location of CSF-Iand its Receptor in Female Reproductive Tract are consistent with CSF-I-Regulated Placental Development) ;Arceci ,RJ等人， 1992,151(1),l-8;Dev Biol;Regens1:reif LJ和Rossant J,Dev Biol 1989May;133(l): 284-94(Expression of the c-fms-oncogene and of the cytokine,CSF-I,during mouse embryogenesis) ,Pampfer S等人，Biol Reprod 1992,46(1) ,48-57(Expression of the CSF-Ireceptor(c-fms proto-oncogene product)in the human uterus and placenta;Joldii PP等人，Lab Invest 1993,68(3),308-32(KExpression of the CSF-lReceptor(c-fms product)by cells at the human uteroplacental interface)；Kauma SW等人，J Clin Endocrinol Me1:ab 1991,73(4),746-751(CSF-land c-fms e邱ression in human endometrial tissues and placenta during the menstrual cycle and early pre即an巧），Byrne J Cell Biol 1981 91 (3Pt I)848-53,Hofstetter W等人，Bone 1995，17，（2)，145-151;Tanaka S等人，1993，J Clin Invest，91:257-63;Weir EC等人， 1993J Bone Miner Res,8(12)1507-18)。
[0004]配體CSF-I與CSF-I受體的結(jié)合通過它的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域的作用導(dǎo)致受體在一 個或多個酪氨酸殘基上發(fā)生憐酸化。因為可W獲得只結(jié)合憐酸化之后的受體的抗體，所W 可^檢測到運種憐酸化（例如來自〔日115;[即日1;[叫1日(311]1〇1〇肖7的化〇3911〇-]\1-〔5尸-Receptor(Ty巧46)抗體#3083)。
[000引抗CSF-IR的抗體是本領(lǐng)域已知的。Sherr，C.J.等人，Blood 73(1989) 1786-1793描 述了抑制CSF-I活性的抗CSF-IR的抗體（Sherr ,C.J.等人，Blood 73(1989)1786-1793)。 W009/026303公開了結(jié)合人CSF-IR的抗CSF-IR抗體和使用抗鼠 CSF-IR抗體的體內(nèi)小鼠腫瘤 模型。W011/123381公開了內(nèi)化CSF-IR并具有ADCC活性的抗CSF-IR抗體。W011/123381公開 了使用抗鼠 CSF-IR抗體的體內(nèi)小鼠腫瘤模型。W011/140249公開了阻斷CSF-I與CSF-IR的結(jié) 合的抗CSF-IR抗體，其被認(rèn)為在治療癌癥中是有用的。W009/112245公開了抑制CSF-I結(jié)合 CSF-IR的抗CSF-IR IgGl抗體，其被認(rèn)為在治療癌癥、炎性腸病和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中是有用 的。WOl 1/131407公開了抑制CSF-I結(jié)合CSF-IR的抗CSF-IR抗體，其被認(rèn)為在治療骨丟失和 癌癥中是有用的。W011/107553公開了抑制CSF-I結(jié)合CSF-IR的抗CSF-IR抗體，其被認(rèn)為在 治療骨丟失和癌癥中是有用的。W011/070024公開了結(jié)合人CSF-IR片段delD4的抗CSF-IR抗 體。
[0006] 抗CSF-IR抗體當(dāng)前正在開發(fā)用于治療癌癥和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
[0007] 術(shù)語"纖維化疾病"是指異常傷口愈合反應(yīng)，其中在器官或組織中形成過量的纖維 結(jié)締組織。過量的細(xì)胞外基質(zhì)化CM)成分(諸如膠原和纖連蛋白）的沉積和累積導(dǎo)致組織的 硬化和結(jié)瘤，運最終可導(dǎo)致器官衰竭。
[0008] 創(chuàng)傷導(dǎo)致隨著臨時細(xì)胞外基質(zhì)化CM)的發(fā)展立即的凝固和凝血反應(yīng)。初始的血小 板聚集和活化幫助促進(jìn)特征在于血管舒張和血管通透性增加的炎性反應(yīng)，從而使得各種免 疫細(xì)胞(包括中性粒細(xì)胞、巨隧細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和淋己細(xì)胞)募集至傷口部位。中性粒細(xì) 胞和巨隧細(xì)胞對傷口進(jìn)行清創(chuàng)，從而降低感染風(fēng)險，并與活化的淋己細(xì)胞一起分泌用于進(jìn) 一步放大炎性反應(yīng)的各種生長因子和細(xì)胞因子。諸如TG邱、PDGF和化-13的分子活化巨隧細(xì) 胞并導(dǎo)致成纖維細(xì)胞在傷口部位的募集、增殖和活化?；罨某衫w維細(xì)胞或肌成纖維細(xì)胞 的特征在于表達(dá)O-平滑肌肌動蛋白和分泌膠原W及其它ECM成分?；罨某衫w維細(xì)胞收縮 膠原晶格(colIagen lattice),從而將傷口的邊緣拉向中屯、。表皮和內(nèi)皮細(xì)胞增殖并在臨 時基質(zhì)上遷移W再生損傷的組織，運與基質(zhì)成分的分解偶聯(lián)，從而完成傷口修復(fù)。
[0009] 但是，持續(xù)的組織傷害或損傷，或者修復(fù)途徑的失調(diào)導(dǎo)致不適當(dāng)?shù)膫诜磻?yīng)。隨后 發(fā)生膠原和ECM的過量沉積和高度交聯(lián)，從而導(dǎo)致代替正常組織結(jié)構(gòu)的癒痕組織的過度形 成和硬化。
[0010] 許多方法已經(jīng)顯示當(dāng)在肺纖維化的小鼠模型中使巨隧細(xì)胞耗盡時疾病的嚴(yán)重度 被降低（Zhang-Hoover J等人，Immunology,2000,101(4) :501-511 ;G;Lbbons MA等人,Am J Respir Crit Care Med,2011,184(5);Mu;rray,LA等人，2011,Int J Biochem Cell Biol, 43,154-62)。通過施用脂質(zhì)體氯屈麟酸鹽或者使用CDllc-白喉毒素受體轉(zhuǎn)基因小鼠實現(xiàn)耗 盡，其中通過注射白喉毒素分子去除單核細(xì)胞/巨隧細(xì)胞。類似地，在肝纖維化(Duffield JS等人 J Clin Invest,2005,115(1) :56-65)和腎纖維化化in 化等人，2009，J Immunol, 183,6733-43)的模型中，巨隧細(xì)胞耗盡降低病理損傷和膠原沉積。op/op小鼠在CSF-I配體 DNA序列中具有突變，其導(dǎo)致表達(dá)截短的、無功能的蛋白質(zhì)。運些小鼠表現(xiàn)為骨石化 (OSteopetrotic)表型并且是巨隧細(xì)胞缺陷性的。當(dāng)被用于肺纖維化的博來霉素模型時，與 野生型小鼠相比，疾病的嚴(yán)重度被大大降低（Baran等人，2007,Am J Respir化it Care Med,176,78-89)。
[0011] 由于巨隧細(xì)胞可W被分類成至少兩種功能表型Ml和M2,運給巨隧細(xì)胞的作用增加 了復(fù)雜性（Mantovani ,A等人，2004,Trends in Immunol ,25(12) ,677-86;Mantovani ,A等 人，2007,Eur J Immunol,37,14-16;Mosser DM和Edwards 肝，2008,化t Rev Immunol,8, 958-)，其中M2巨隧細(xì)胞具有促纖維化特征化upher,ML和Gallatin,WM，2006,Adv Immunol, 89,245-88;PrasseA等人，2006,AmJRespC;rit(?lreMed,173,781-92;F^echkovsky,DV 等人，2010,Clin Immunol,137(1),89-1-l;Git)bons MA等人，2011,Am J Resp Grit Care Med,184,569-81)O
[0012] 纖維化疾病的實例包括肺纖維化諸如特發(fā)性肺纖維化（IPF)、娃肺病、囊性纖維 化、腎纖維化、肝纖維化、肝硬化、原發(fā)性硬化性膽管炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、屯、內(nèi)膜屯、肌 纖維化、縱隔纖維化、骨髓纖維化、腹膜后纖維化、進(jìn)行性大塊纖維化、腎源性系統(tǒng)性纖維 化、克羅恩病、癒痕瘡落、屯、肌梗死、系統(tǒng)性硬化病和關(guān)節(jié)纖維化。
[0013] 纖維化疾病的病因可W取決于所設(shè)及的器官或組織并且在一些疾病(諸如特發(fā)性 肺纖維化）中是未知的。肝纖維化和最終的肝硬化源自通過暴露于各種因素包括環(huán)境因素 和飲食因素或感染原的持續(xù)慢性肝損傷。長期乙型肝炎或丙型肝炎感染可W導(dǎo)致肝纖維 化。持續(xù)過度食用酒精或高脂/糖飲食也可W導(dǎo)致肝臟的硬化。類似地，糖尿病可能損傷腎 臟并留下瘤痕，導(dǎo)致功能喪失。在家族性肺纖維化中，盡管負(fù)責(zé)的遺傳因素是未知的，但是 家庭成員具有增加的對纖維化的易感性。
[0014] IPF是慢性、進(jìn)行性疾病，具有未知病因并且是屯種特發(fā)性間質(zhì)性肺炎之一 (American Thoracic Society/European Respiratory Society Multidisciplinary Consensus Classification of the Idiopathic Interstitial Pneumonias,2002,Am J Respir Crit Care Med,165:277-304)。肺泡上皮細(xì)胞的重復(fù)性損傷被認(rèn)為在促進(jìn)導(dǎo)致IPF 的典型病理組織學(xué)特征的纖維化過程中具有關(guān)鍵作用（Selman 1,2001,Ann Intern Med, 134(2): 136-51 ;Gross TJ and Hunnin曲ake GW,2001)。許多風(fēng)險因素可W導(dǎo)致上皮細(xì)胞 損傷，特別是吸入的毒素和藥劑。已經(jīng)將吸煙鑒定為一種運樣的可能因素，而已經(jīng)報道暴露 于木質(zhì)粉塵、金屬粉塵、氧化娃或其它礦物質(zhì)粉塵增加發(fā)生IPF的風(fēng)險(綜述于Borchers AT 等人，2011Clinic Rev Allerg Immunol,40:117-134;M址er TM,2012,Clin Qiest Med, 33:69-83中）?；加蠭PF的患者的預(yù)后不良，其中中位數(shù)存活范圍為診斷后2-5年(Gr化bin J 等人，2006，化〇招義，61:980-85;King TE 化，2001 ,Am J Respir Care Med, 1664:1171-81; 化腳自ndez P紅ez 邸等人，2010,化est,137:129-37;Lee HL等人，2005,化est,127:20：M-41)。
[0015] 纖維化疾病的治療通常包括抗炎和免疫抑制劑，但是運些對患者益處較少。運些 治療的效力的缺乏使得通常將IPF和纖維化疾病重新考慮為對傷口愈合的異常應(yīng)答而不是 炎性病況?；悄岢晔?008年在日本和2011年在歐洲被批準(zhǔn)用于治療IPF的小分子藥物，其 可能通過還未完全理解的多重作用機(jī)制起作用，但可能部分地通過下調(diào)TGF-0起作用。迄今 為止，還沒有祀向療法被批準(zhǔn)用于纖維化適應(yīng)證。
[0016] 因此，目前存在未滿足的對于纖維化疾病的改善治療的醫(yī)學(xué)需要。例如，對于IPF， 3年存活率為50%而5年存活率僅為20%，并且在大約20%的病例中需要移植。
[0017] 因此，本發(fā)明的一個目的是提供治療纖維化疾病的新方法。
[0018] 發(fā)明概述
[0019] 令人驚訝地，我們已經(jīng)能夠證實CSF-IR活性的抑制劑在纖維化疾病的治療中是有 活性的。具體地，我們已經(jīng)能夠證實抑制CSF-IR活性的抗CSF-IR抗體在肺纖維化的體內(nèi)動 物模型中是有活性的。
[0020] 因此，本發(fā)明提供用于治療和/或預(yù)防纖維化疾病的CSF-IR活性抑制劑。本發(fā)明還 提供CSF-IR活性抑制劑用于制備用于治療和/或預(yù)防纖維化疾病的藥物的用途。本發(fā)明進(jìn) 一步提供用于治療和/或預(yù)防纖維化疾病的方法，其包括施用治療有效量的CSF-IR活性抑 制劑。
[0021] 在本申請中，術(shù)語"纖維化疾病"包括特征為對傷口愈合的異常應(yīng)答的疾病，其中 在器官或組織中形成過量纖維結(jié)締組織。示例性的纖維化疾病包括但不限于肺纖維化諸如 特發(fā)性肺纖維化、娃肺病和囊性纖維化;腎纖維化包括腎小管萎縮和間質(zhì)性纖維化、肝纖維 化和肝硬化、原發(fā)性硬化性膽管炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、屯、內(nèi)膜屯、肌纖維化、縱隔纖維化、 骨髓纖維化、腹膜后纖維化、進(jìn)行性大塊纖維化、腎源性系統(tǒng)性纖維化、克羅恩病、癒痕瘡 落、屯、肌梗死、硬皮病、系統(tǒng)性硬化病和關(guān)節(jié)纖維化。
[0022] 本文中使用的術(shù)語乂 SF-IR活性"是指本領(lǐng)域針對CSF-IR所理解的活性譜，尤其是 人CSF-IR及其異形體(例如1、2、3或所有異形體)的活性。例如，配體與受體的結(jié)合誘導(dǎo)CSF-IR在特定酪氨酸殘基處的憐酸化（Bourette RP和Rohrschneider LR,2000,Growth 化Ctors 17:155-166)并且接著產(chǎn)生的信號傳導(dǎo)事件級聯(lián)可W介導(dǎo)細(xì)胞遷移、存活、分化和 增殖（Suzu S等人，1997, J Immunol ,159,1860-7;Yeung Y-G和Stanley 邸，2003 ,Mol Cell Proteomics，2,1143-55;化 W等人，2008，J Leukoc Biol84(3),852-63)。在轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中 包含苯丙氨酸殘基取代選定的酪氨酸殘基的突變CSF-IR受體分子的表達(dá)掲示了特定的酪 氨酸殘基與細(xì)胞結(jié)果(諸如存活、增殖和形態(tài)）的相關(guān)性(化等人，J Leukoc Biol 2008S邱 84(3): 852-863)。將抗憐酸酪氨酸抗體與分子特異性抗體一起使用的蛋白質(zhì)組學(xué)方法和免 疫印跡技術(shù)已經(jīng)鑒定了參與在受體的配體刺激后介導(dǎo)運些細(xì)胞功能的許多細(xì)胞內(nèi)分子 (Yeung Y-G等人，1998，J Biol 畑em.l3,273(46):17128-37;Husson H等人，1997， OncogenelS,14(19):2331-8)。
[0023] 在一個實施方案中，受試者是哺乳動物，例如人。
[0024] 根據(jù)本發(fā)明的CSF-IR活性抑制劑是干擾(例如降低/抑制或阻斷）CSF-IR的活性、 特別是纖維化疾病中CSF-IR的活性的藥劑。特別優(yōu)選的是干擾IPF中CSF-IR的活性的藥劑。 根據(jù)本發(fā)明的抑制劑可W部分或完全抑制CSF-IR活性。用于本發(fā)明的抑制劑包括但不限于 能夠與化-34、CSF-1或CSF-I受體(CSF-IR)或編碼化-34、CSF-1或CSF-IR的核酸分子相互作 用（例如結(jié)合或識別）或者能夠抑制化-34、CSF-I或CSF