±1)°C，濕度63%，噪音〈55分貝，自由攝食、飲水，光照與黑暗時間為每12h交替。
[0057] 3、造模方法腹腔注射氯氨酮（5yg/100g)麻醉條件下，打開B、C、D組大鼠腹腔去除 雙側卵巢，逐層縫合;A組大鼠僅予以單純剖腹后立即關閉。造模期間的首3天，肌注青霉素4 萬U/只，預防感染。
[0058] 4、飼養(yǎng)與給藥造模后大鼠分籠予以常規(guī)飼料喂養(yǎng)，第4天起開始給藥。A組為正常 對照組，每天以蒸餾水lOml/kg灌胃；B、C、D組為模型組，B組每天以實施例4制備的益骨口服 液I Oml /kg灌胃，C組每天以實施例7制備的益骨口服液I Oml /kg灌胃，D組每天以實施例8制 備的化合物(I)水溶液lOml/kg灌胃。整個灌胃過程持續(xù)12周。
[0059] 5、觀察指標采用美國LUNAR公司DPX-L型雙能X線骨密度儀測定大鼠脊柱與左股骨 上干骺端骨密度以萬能電子材料試驗機作整骨三點彎曲試驗。最大載荷20kg，兩端跨距 20mm，加載速度5mm/min，檢測過程由計算機自動描記股骨的載荷一變形曲線。
[0060] 6、數(shù)據處理采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計。各組數(shù)據采用x±s表示，各組數(shù) 據間比較用t檢驗，計數(shù)資料采用X 2檢驗。以P〈0.05為顯著性差異，P〈0.01為非常顯著性差 異。
[0061] 二、結果
[0062] 1、對去勢大鼠脊柱與股骨上端骨密度變化的影響
[0063] 正常對照組A組的骨密度明顯高于模型組C、D組，有非常顯著性差異(P〈0.01)。模 型組B組比正常對照組A組的骨密度略低，但是差異不明顯，無統(tǒng)計學意義。結果見表1。該實 驗結果表明，本發(fā)明提供的益骨口服液比現(xiàn)有技術中的益骨口服液更能增加去勢大鼠脊柱 與股骨上端骨密度。
[0064]表1對去勢大鼠脊柱與股骨上端骨密度變化的影響(X 土 s，n = 10)
[0066] 備注:**表示與正常對照組A組相比具有非常顯著性差異(Ρ〈0.01); Λ表示與B組 相比具有非常顯著性差異(ρ〈0.01)。
[0067] 2、對去勢大鼠左股骨生物力學變化的影響
[0068] 正常對照組A組的彈性載荷和最大載荷均明顯高于模型組C、D組，有非常顯著性差 異(P〈0.01)。模型組B組比正常對照組A組的彈性載荷、最大載荷略低，但是差異不明顯，無 統(tǒng)計學意義。結果見表2。該實驗結果表明，本發(fā)明提供的益骨口服液比現(xiàn)有技術中的益骨 口服液更能增加去勢大鼠左股骨的彈性載荷和最大載荷，提高生物力學性能。
[0069]表2對去勢大鼠左股骨生物力學變化的影響(X土s，n = 10)
[0071 ] 備注:**表示與正常對照組A組相比具有非常顯著性差異(P〈0.01); Λ表示與B組 相比具有非常顯著性差異(Ρ〈〇. 01)。
[0072]綜合上述實驗結果，本發(fā)明提供的益骨口服液比現(xiàn)有技術中的益骨口服液具有更 加優(yōu)異的治療效果，更能增加去勢大鼠的骨密度和骨生物力學性能。從實驗結果可看出，本 發(fā)明提供的益骨口服液的治療作用是現(xiàn)有技術中的益骨口服液和黃酮化合物（I)協(xié)同作用 的結果。
[0073]上述實施例的作用在于說明本發(fā)明的實質性內容，但并不以此限定本發(fā)明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種益骨口服液，其特征在于:藥用成分包括處方比例的生藥和益骨化合物單體，口 服液總重量為所述生藥重量的4~6倍，化合物單體的濃度為80~12化g/mL所述處方比例 的生藥包括淫羊蕾、骨碎補、生地、巧等、仙靈脾和紅花，它們的重量比為10~14:10~14:10 ~14:20~30:10~14:20~30;所述益骨化合物單體為一種黃酬化合物（I )，化學結構式如 下，2. 根據權利要求1所述的益骨口服液，其特征在于：口服液總重量為生藥重量的5倍，化 合物單體的濃度為10化g/mL所述處方比例的生藥包括淫羊蕾、骨碎補、生地、巧等、仙靈脾 和紅花，它們的重量比為12:12:12:25:12:25。3. 根據權利要求1所述的益骨口服液，其特征在于:所述黃酬化合物（I)的制備方法包 括如下步驟： a、 將干燥的生藥補骨脂粉碎，用80~90%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇 味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃 取物和正下醇萃取物； b、 步驟a中正下醇提取物用大孔樹脂除雜，先用5~15%乙醇洗脫6~10個柱體積，再用 70~80 %乙醇洗脫8~12個柱體積，收集70~80 %洗脫液，減壓濃縮得70~80 %乙醇洗脫濃 縮物； C、步驟b中乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1、30:1、15:1和8:1的 二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到4個組分； d、 步驟C中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為15:1、8:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分； e、 步驟d中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70~80%的 甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的黃酬化合物 (Do4. 根據權利要求3所述的益骨日服液，其特征在于：步驟a中，用85%乙醇熱回流提取， 合并提取液。5. 根據權利要求3所述的益骨口服液，其特征在于:步驟b中，正下醇提取物用AB-8型大 孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個柱體積，再用75%乙醇洗脫10個柱體積，收集75%洗脫 液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫濃縮物。6. 根據權利要求3所述的益骨口服液，其特征在于：步驟e中，組分2用十八烷基硅烷鍵 合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個柱體積洗 脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的黃酬化合物(I)。7. -種益骨的化合物單體，其特征在于:所述益骨的化合物單體為黃酬化合物，化學結 構式如（I)所示：8. -種權利要求7所述益骨的化合物單體的制備方法，其特征在于:包括如下步驟： a將干燥的生藥補骨脂粉碎，用80~90%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味， 依次用石油酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物 和正下醇萃取物； b步驟a中正下醇提取物用大孔樹脂除雜，先用5~15%乙醇洗脫6~10個柱體積，再用 70~80 %乙醇洗脫8~12個柱體積，收集70~80 %洗脫液，減壓濃縮得70~80 %乙醇洗脫濃 縮物;C步驟b中乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1、30:1、15:1和8:1的 二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到4個組分； d步驟C中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為15:1、8:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分； e步驟d中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70~80 %的 甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的黃酬化合物 (Do9. 權利要求1或2所述的益骨口服液在制備防治骨質疏松癥的藥物中的應用。10. 權利要求7所述益骨的化合物單體在制備防治骨質疏松癥的藥物中的應用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了益骨口服液、益骨的化合物單體以及口服液的醫(yī)藥應用，屬于藥物技術領域。改進后的益骨口服液中的藥用成分包括處方比例的生藥和化合物單體，口服液總體積為所述生藥重量的4～6倍，化合物單體的濃度為80～120μg/mL；所述處方比例的生藥包括淫羊藿、骨碎補、生地、茯苓、仙靈脾和紅花，重量比為10～14：10～14：10～14：20～30：10～14：20～30；所述化合物單體為一種結構新穎的黃酮化合物。改進后的益骨口服液顯著提高了現(xiàn)有的益骨口服液的療效，是對現(xiàn)有益骨口服液配方的一次重大升級。
【IPC分類】A61K36/804, C07D311/74, A61K9/08, A61K31/352, A61P19/10
【公開號】CN105641188
【申請?zhí)枴?br>【發(fā)明人】姚新苗, 樓煒, 何幫劍, 李桂錦, 謝躍鵬
【申請人】浙江中醫(yī)藥大學附屬第三醫(yī)院
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年1月8日