用于預(yù)防或治療急性腎損傷的4-[5-(3-氯-苯氧基)-噁唑并[5,4-d]嘧啶-2-基]-2,6-二 ...的制作方法
【專利說明】用于預(yù)防或治療急性腎損傷的4-[5-(3-氯-苯氧基)-噁唑并 [5,4-D]嘧陡-2-基]-2,6-二甲基-苯氧基}-乙酸
[0001]本發(fā)明涉及用于預(yù)防或治療急性腎損傷(AKI)的{4-[5-(3_氯-苯氧基）-噁唑并 [5，4-d]嘧啶-2-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-乙酸或其可藥用鹽，以及其藥物組合物。
[0002] 專利申請W02011/086079描述了化合物4-[ 5-( 3-氯-苯氧基）-噁唑并[5，4-d ]嘧 啶_2_基]-2，6-二甲基-苯氧基}-乙酸或其可藥用鹽以及其制備方法。這種化合物對于 SlPi/EDGl受體具有親合性。
[0003] 急性腎損傷(AKI)，以前稱為"急性腎衰竭"，是出現(xiàn)在各種環(huán)境下的常見的和可能 很嚴(yán)重的病癥，臨床表現(xiàn)為:血清肌酸酐(SCr)短暫升高至無尿性腎衰竭。傳統(tǒng)上，通過血清 肌酸酐的升高來測定，AKI被描述為腎功能突然降低(在48小時之內(nèi)）。最近的KDIG0(改善全 球腎臟疾病預(yù)后組織）指南建立了關(guān)于診斷標(biāo)準(zhǔn)的共識，這種診斷標(biāo)準(zhǔn)基于下列實驗室和 臨床數(shù)值（Working group of ERBP(European Renal Best Practice)，2〇12 ,NDT 27 : 4263-4272) ^KI被定義和分為下列階段之一：
[0004] ?在48小時之內(nèi)，SCr升高2 0 · 3mg/dL;或
[0005] · SCr升高至2 1.5倍基線，在前7天內(nèi)就已知或推測出現(xiàn)這種狀況;或
[0006] ?尿量<0.5mL/kg/小時，持續(xù)6小時。
[0007] 在所有就醫(yī)的患者當(dāng)中，AKI出現(xiàn)大約7%(Nash等人，2002，Am J Kidney Dis 39: 930-936)，并且根據(jù)所使用的定義，垂?；颊吒哌_(dá)36-67%。在所有重病監(jiān)護室（I⑶）當(dāng)中， 嚴(yán)重的AKI出現(xiàn)4-25%，I⑶中大約5%的AKI患者需要腎臟替代治療(Hoste等人2006 ,Crit Care 逆：R73,Mehta等人2004，Kidney Int 逆：1613-1621 ;Uchino等人2005，Jama 294: 813-818;Uchino等人2006,Crit Care Med 34:1913-1917;0stermann等人2007,Crit Care Med逆:1837-1843) ^KI的最常見的病因是敗血癥、大外科、血容量過低和藥物。形成AKI的 危險因素包括：老年（>75歲）、慢性腎?。–KD，eGFR(估計的腎小球過濾率）<60mL/min/ 1.73m 2)、動脈粥樣硬化周圍血管疾病、心力衰竭、肝臟疾病、糖尿病和腎中毒的藥物。
[0008] 盡管預(yù)防策略和支援措施得到發(fā)展，但AKI仍然保持高發(fā)病率和死亡率，尤其是進 入ICU的那些患者，住院死亡率超過50%。除了死亡率之外，還存在慢性后遺癥，包括：出現(xiàn) 慢性腎病（CKD)的高風(fēng)險和促進形成晚期腎?。‥SRD)(Hsu等人2009，Clin J Am Soc Nephrol |:891-898;Ishani等人2009，JASN逆：223-228;Coca等人2009，Am J Kidney Dis 逆:961-973)。發(fā)病還伴隨著費用升高和長時間住院。
[0009] 無論病原如何，由于沒有得到認(rèn)可的預(yù)防或治療AKI的方法，所以，還存在明顯未 得到滿足的醫(yī)學(xué)需要。病癥的處理基本上是支持性的，對于嚴(yán)重的AKI患者來說，腎臟替代 治療(RRT)作為護理的中心部分。水化仍然是對比劑腎病(CIN)的最合適的預(yù)防法。
[0010] 鞘氨醇-1磷酸鹽（SlP)是與五個GPCR(G蛋白偶合受體）結(jié)合的脂質(zhì)介質(zhì)，稱為 SlPi-5(Brinkman等人2007 ,Pharmacol Ther 115:84-105)。循環(huán)SiP主要由內(nèi)皮細(xì)胞、血小 板和紅細(xì)胞產(chǎn)生，并且發(fā)現(xiàn)其與血漿蛋白高度結(jié)合，包括HDL(高密度脂蛋白）中的ApoM(脫 脂載脂蛋白M) (Hammad等人2012，J Lipids;Karuna等人，2011 ,Atherosclerosis 219:855-863)和白蛋白。SlP1被普遍表達(dá)，包括在內(nèi)皮、免疫和腎臟上皮細(xì)胞中表達(dá)。SlP1調(diào)節(jié)許多生 理功能，包括:保持內(nèi)皮屏障的完整性(細(xì)胞骨架重排）、細(xì)胞生長、存活、分化、血管生成和 免疫細(xì)胞輸送。SlP1 在腎臟髓質(zhì)（Zhu等人2011 ,Am J Physiol Renal Physiol 301 :F35-F41)中高度表達(dá)，其是血流和供氧受到特別為尿濃度而設(shè)計的血管解剖學(xué)限制的腎臟區(qū) 域。由于該區(qū)域中的細(xì)胞具有高耗氧性，所以，髓質(zhì)尤其易受缺氧傷害的影響。腎皮質(zhì)管損 傷是髓質(zhì)損傷和近端管狀細(xì)胞的直接損傷的結(jié)果。腎臟缺血再灌注損傷之后，SlP 1上調(diào) (Awad等人2006，Am J Physiol Renal Physiol 290:F1516_F1524)，并且預(yù)計它的活化能 夠保持腎臟功能，這是由于三個主要機理：
[0011] ?保持內(nèi)皮屏障功能。在AKI中，這種屏障受到損傷，導(dǎo)致血管通透性和粘附性能 削弱，
[0012] ?限制近端管狀上皮細(xì)胞的細(xì)胞程序死亡，
[0013] ?降低炎性細(xì)胞浸潤。在AKI中，炎癥經(jīng)常是對管狀上皮細(xì)胞和內(nèi)皮屏障的復(fù)合傷 害的結(jié)果。
[0014] 文獻已經(jīng)廣泛地記錄了SlP-SlPi途徑在調(diào)節(jié)內(nèi)皮屏障完整性中的作用(Wang and Dudek,2009,Microvasc Res 77:39-45；Mc Verry and Garcia,2005,CelI signalling 17:131-139 ； Lucke and Levkau ,2010 ,Cel I Phys Biochem 26:87-96)。SlPi的活化，通過 PLC/Ca2 + /FAK/pRac途徑活化來提高內(nèi)皮的屏障功能（Belvitch and Dudek，2012, Microvasc Res83 : 22-30) aHDL-ApoM結(jié)合的SlP通過eNOS活化來延長內(nèi)皮的屏障功能 (Wilkerson等人2012 JBC 287:44645-44653;Christoffersen等人2011 ,PNAS 108:9613-9618; Argraves等人2008 JBC 283:25074-25081)。關(guān)于這一點，在進行血管手術(shù)的患者中， 低血漿HDL水平與出現(xiàn)AKI的危險有關(guān)(]\^11616了311(1]\^1161陬.，1975，1^1^6七1:16-19;Castelli WP，Garrison RJ，Wilson PW等人 1986，JAMA;256:2835-2838)〇
[0015] SlP1的完全或內(nèi)皮特異性缺失，由于影響多個器官的大出血而引起胚胎死亡 (Kono等人2004 JBC 279:29367-29373)。在負(fù)責(zé)SlP生物合成(鞘氨醇激酶1和2)的酶缺失 的剔除小鼠中，可以發(fā)現(xiàn)相同的缺陷（Mizugishi等人2005，M〇1 Cell Biol亞：11113-11121)。類似地，SlP1拮抗劑還增加血管通透性。盡管SlPdA能性拮抗劑在AKI模型中具有急 性保護作用（Bajwa等人，2010,JASN 21:955-965;Awad等人2006，Am J Physiol Renal Physi〇1290:F1516-F1524)，但在肺損傷模型中，用這些SlPdj]能性拮抗劑進行長期治療， 顯著地惡化血管滲漏，并且體外破壞（Shea等人2010 ,Am J Respir Cell Mol Biol 43: 662-673)內(nèi)皮屏障的完整性。在SIP不足的小鼠中，也模擬了類似的內(nèi)皮缺陷（Camerer等 人，2009JCI 119:1871-1879)。
[0016] 在患者和AKI模型中，從內(nèi)皮細(xì)胞中釋放細(xì)胞素（例如，TNF-α )，并且上調(diào)粘附分 子，例如ICAM-I、VCAM-1和Ρ/Ε-選擇蛋白，這有助于炎性細(xì)胞滲透到管狀間質(zhì)軟組織中 (Bonventre等人2003 JASN 2199-2210;Singbartl等人2000,Crit Care Med 翌：2507- 2514;Sadik等人2012，M〇1 Cell Biochem 359:73-81)。此外，在培養(yǎng)的人類內(nèi)皮細(xì)胞中，在 低氧/再氧化之后，這些內(nèi)皮粘附分子中的一些粘附分子被上調(diào)(Lutz等人2008 J Mol Med 逆：1329-1339) AlP1活化向下調(diào)節(jié)這些粘附分子，并因此降低炎性細(xì)胞浸潤（Lien等人 2006 ,Kidney Int逆:1601-1608)。使用內(nèi)皮31?!受體條件性缺失的小鼠，證明了SlP在急 性腎損傷中保持內(nèi)皮功能方面的主要作用(Ham A.，2013，Kidney Int,Sept)。
[0017] 刺激SlP1，通過Akt磷酸化，能夠激活內(nèi)皮氧化氮合酶(eNOS)，其是通過產(chǎn)生NO來 調(diào)節(jié)局部血管舒張的關(guān)鍵酶(]?〇抑168-1?1^2等人2001，貝0 276:19672-19677; Igarashi等 人2000，JBC ^:32363-32370; Igarashi等人2008 ,BBA 1781:489-495)。因此，SlP在內(nèi)皮 中以NO依賴性方式引起血管舒張(Roviezzo等人2006，F(xiàn)ASEB J逆:340)。在I/R引起的AKI 的動物模型中，NO對腎臟功能具有保護作用(Garcia-Cr iado等人1998 ,Transplantation 迚:982-990)。在大鼠中，抑制eNOS能夠使腎血流量降低35%，同時降低GFR，并且增加腎血 管阻力（Cao等人 2〇10 ,Am J Physiol Renal Physiol 299 :F1056_F1064) AlP被認(rèn)為是內(nèi) 皮一氧化氮的最有效活化劑之一，已經(jīng)知道的是，它可以使局部血流增加，而且限制血小板 活化和血管充血，尤其在易受損的皮質(zhì)延髓區(qū)域。在AKI期間，這種機理可能對保持腎臟功 能很重要。重要的是，在心肺旁路(CPB)和敗血癥患者中，一氧化氮生物利用率降低與AKI有 關(guān)（Lema等人2009，J Cardio Thorac Vase Anesth 翌：188-194;Sadik等人2012，Mol Cell Biochem 359:73-81)。有趣的是，人類eNOS中的786C多態(tài)性降低轉(zhuǎn)錄活性，并且與心肺旁路 的心臟手術(shù)患者的腎功能障礙有關(guān)(Popov等人2009，Eur J Cardio-Thorac Surgery 36: 651-656;Nakayama等人 1999,Circulation 逆:2864-2870)。多態(tài)性頻率大約為50%，并且 可以代表重要的子群，這種子群不但更加處于出現(xiàn)AKI的危險之中，而且對修復(fù)局部NO水平 的治療產(chǎn)生更大反應(yīng)，例如，通過SlPj^活化。
[0018] 此外，SlP1的活化，通過激活PERK和PAkt存活途徑，直接限制近端管狀上皮細(xì)胞的 細(xì)胞程序死亡。在缺血再灌注損傷之后，近端管狀上皮細(xì)胞中SlP 1的特異性缺失，惡化腎臟 功能障礙(Bajwa等人2010 JASN 21:955-965)，以及使腎小管壞死，這說明，內(nèi)原性的SlP增 強（tone)可減緩再灌注損傷的嚴(yán)重程度。這些數(shù)據(jù)著重說明了 SlP-SlP1系統(tǒng)在AKI中對內(nèi) 皮和上皮軸的保護作用的重要性。
[0019] 通過SlP1活化SlP決定著淋巴細(xì)胞從淋巴結(jié)流出到血液中。這種SlP 1活化引起受體 內(nèi)化作用，而后受體再循環(huán)回到細(xì)胞表面，進行重新活化。然而，人們認(rèn)為，SlP1功能性拮抗 劑或詰抗劑通過抑制內(nèi)化的SlPi受體回到細(xì)胞表面或抑制SlPi活化而導(dǎo)致淋巴細(xì)胞減少， 由此導(dǎo)致細(xì)胞表面SlP 1的顯著和持續(xù)減少。因此，最近的藥劑顯示出在臨床前和臨床上觀 察到血液淋巴細(xì)胞的大量和持續(xù)減少。
[0020] 一些報道表明，T淋巴細(xì)胞促進急性腎損傷。通過消耗T細(xì)胞并且與⑶4+T細(xì)胞的繼 承轉(zhuǎn)移進行重組而使損傷得到改善，這種觀察結(jié)果證明它依賴于⑶4+T細(xì)胞（Burne等人 2001 ,J.Clin Invest 翌：1283_1290;Ysebaert等人2004，Kidney Int 逆：491_496)。因 此，毫不奇怪的是，SlPJj]能性拮抗劑，包括芬戈莫德(fingolimod)和SEW2871，在急性腎損 傷模型中，在淋巴細(xì)胞減少性劑量下，能夠起到保護作用(Lien等人2006,Kidney Int逆： 1601-1608)。
[0021] 然而，淋巴細(xì)胞減少是機會感染的誘因，尤其對于很敏感、虛弱的患者，例如，處于 AKI的高風(fēng)險的患者(老年、心臟疾病、糖尿病和慢性腎病）。因此，還需要選擇性的SlP 1激動 劑，這種激動劑應(yīng)該能夠引起有限的淋巴細(xì)胞減少，或在最佳情況下，淋巴細(xì)胞不減少，并 且在治療AKI方面具有治療應(yīng)用性。意外的是，化合物4-[5-(3_氯-苯氧基)-噁唑并[5,4-d] 嘧啶-2-基]-2,6-二甲基-苯氧基}-乙酸不同于其它SlP 1調(diào)節(jié)劑，這是由于它在非淋巴細(xì)胞 減少性劑量下，在哺乳動物中引起AKI保護作用。人們相信，4-[5-(3_氯-苯氧基)-噁唑并 [5，4-d]嘧啶-2-基]-2，6_二甲基-苯氧基}-乙酸的這種性能可能與它