可得自Getinge Group)從安全工作臺傳送到所述隔離器，如下文進 一步描述。這是本發(fā)明的重要方面，因為發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生較少的污染(微生物和特殊的雜質）和更 高純度的肉毒桿菌毒素神經(jīng)毒性組分。
[0045] 在本發(fā)明內(nèi)，所述安全工作臺是II級BSC，其配備了允許將材料無菌傳送進出所述 BSC的傳送系統(tǒng)。在本發(fā)明的含義內(nèi)的"生物安全柜"或"BSC"是封閉式的通風實驗工作區(qū)， 用于保護實驗室工作者和周圍環(huán)境抵御危險因子例如細菌、病毒或者任何其他毒性或致病 因子的風險，和用于保持工作區(qū)內(nèi)部材料的無菌性。換句話說，BSC提供了保護試驗抵御周 圍環(huán)境，和保護周圍環(huán)境抵御試驗。在本發(fā)明的情形內(nèi)，這也包括在沒有滅菌步驟下將熱敏 感材料傳送到隔離器1或隔離器2中，例如細胞庫。
[0046] 優(yōu)選地，用于所述安全工作臺的BSC是II級BSC，更優(yōu)選II級A1型或A2型BSC，最優(yōu) 選II級A2型BSC，根據(jù)美國疾病控制和預防中心(U.S.Centers for Disease Control and Prevention) (CDC)的分級（參見美國衛(wèi)生與人類服務公共衛(wèi)生服務部;疾病控制和預防中 心；國立衛(wèi)生石開究院（U.S.Department of Health and Human Services，Public Health Service；Centers for Disease Control and Prevention；National Institutes of Health).微生物學和生物醫(yī)學實驗室的生物安全.附件A-生物危害的初級防護:生物安全 柜的選擇、安裝和使用（Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories.Appendix A-Primary Containment for Biohazards : Selection， Installation and Use of Biological Safety Cabinets).第五版，HHS出版號（CDC)21_ 1112,2009年 12月修訂）和NSF/ANSI標準49-2007的規(guī)定（參見NSF International (NSF);美 國國家標準學會（American National Standards Institute) (ANSI) .NSF/ANSI標準49-2007. II級（層流）生物安全柜（Class II(laminar flow)biosafety cabinetry) .Ann Arb〇r(MI);2004)。所述安全工作臺通常在與所述生產(chǎn)室相同的壓力下運行。
[0047] BSC包含工作艙、用于供應空氣以形成從所述工作艙的上部行進到下部的單向氣 流的空氣供應機構、和用于排放所述單向氣流的空氣的空氣排放機構。生物安全柜通過在 處理中的產(chǎn)物上方拉上無菌空氣幕而發(fā)揮作用。然后在工作面(例如，桌或臺）的下面抽取 所述空氣，回到頂部。一部分空氣被排出，而另一部分再次被引入所述工作區(qū)以拉上無菌空 氣幕。在所述系統(tǒng)的一些點處，所述空氣通過一個或多個過濾器，通常是HEPA(高效粒子空 氣級別)過濾器，以便所述排出空氣和再循環(huán)空氣二者是無菌和無粒子的。所述排出的空氣 由被吸入柜前面的空氣補充，所述被吸入的空氣然后在所述工作面的下面與在所述工作面 之下內(nèi)側處從所述柜抽取的再循環(huán)空氣合并。在典型的II級A1型BSC的情況下，約30 %的空 氣通過排出型HEPA過濾器和約70%通過供應型HEPA過濾器再循環(huán)回所述柜的工作區(qū)內(nèi)。II 級A2型BSC與A1型相似，但最低流入速度通常是約100ft/min或更高。
[0048]應該理解在本發(fā)明的含義內(nèi)的"BSC"不是"凈化臺"。"凈化臺"，在本文中使用時， 是指水平層流"凈化臺"或垂直流"凈化臺"，其通常只為需要無粒子環(huán)境的工序提供100級 別的工作區(qū)域。補充空氣被過濾，而排出的空氣不被過濾。相反，在BSC的情況下，所述補充 和排出的空氣二者都被過濾，例如被HEPA過濾。因此，凈化臺只提供產(chǎn)物保護但不防止工作 者暴露于在凈化臺上操作的材料。通常，凈化臺不適合用于任何潛在生物危險性材料，包括 毒性、致突變或致癌物質、生物毒素、傳染原(例如，細菌、病毒、寄生蟲等等），并且如果工作 需要無菌條件的話通常是不可用的。
[0049]所述安全工作臺的傳送系統(tǒng)優(yōu)選包含彼此可拆卸連接的第一傳送單元和第二傳 送單元，其中所述第一傳送單元是安裝在BSC表面上的可密封部件，通常固定在所述BSC的 壁上，而所述第二傳送單元是可密封的容器。所述可密封的容器可以由各種材料例如不銹 鋼、聚乙烯等制成。它可以是剛性的或柔性的，例如袋子的形式，并且可以是一次性使用或 可再使用的容器。優(yōu)選地，所述傳送系統(tǒng)是DPTE'1，送系統(tǒng)(Getinge)包含兩個獨立的單 元，g卩α和β部分，其各自裝有門、鎖和密封功能并且容許在不破壞包含在所述α或β組件內(nèi)的 無菌或毒性環(huán)境的完整性下連續(xù)傳送材料。
[0050] 本發(fā)明的壓力梯度裝置還包含第一隔離器單元和任選的第二或另一個隔離器單 元。所述第一隔離器單元和所述第二或另一個隔離器單元是II級BSC，其配備了允許將材料 無菌傳送進出所述BSC的傳送系統(tǒng)。通常，前面附有手套以防止與所述神經(jīng)毒素接觸。所述 傳送系統(tǒng)可以是，例如，與所述安全工作臺相連接的上述DPTE系統(tǒng)。所述第一隔離器單元包 含發(fā)酵罐，在其中進行培養(yǎng)肉毒桿菌的步驟。所述第一和第二或另一個隔離器單元二者位 于通過氣鎖與環(huán)境連接的生產(chǎn)室內(nèi)，其中在所述隔離器單元、生產(chǎn)室和氣鎖之間形成壓力 梯度。
[0051] 具體而言，所述第一和第二或另一個隔離器單元中的壓力低于所述生產(chǎn)室，例如 比所述生產(chǎn)室低10至l〇〇Pa、優(yōu)選20至80Pa、更優(yōu)選至50至70Pa、最優(yōu)選60Pa。此外，雖然生 產(chǎn)室中的壓力高于所述第一和第二或另一個隔離器單元，它仍然低于環(huán)境壓力，例如比環(huán) 境壓力低5至50Pa、優(yōu)選10至30Pa、更優(yōu)選12至18Pa、和最優(yōu)選約15Pa。
[0052] 所述氣鎖中的壓力高于環(huán)境壓力，例如比環(huán)境壓力高10至lOOPa、優(yōu)選20至80Pa、 更優(yōu)選25至35Pa、和最優(yōu)選30Pa。換句話說，所述氣鎖和生產(chǎn)室之間通常有約15至150Pa的 壓差，優(yōu)選約30至110Pa，更優(yōu)選約37Pa至53Pa，和最優(yōu)選約45Pa。術語"環(huán)境壓力"是指周圍 大氣的壓力并且通常是約1個大氣壓，但是依據(jù)地理位置或氣象條件可以變化。
[0053] 所述第二或另一個隔離器單元可以是如同上文關于第一隔離器單元所描述的 BSC。它可以在與所述第一隔離器單元相同或不同的壓力下運行。此外，所述第一隔離器單 元可以不與或可以與所述第二或另一個隔離器單元通過例如一個或多個可鎖定的氣鎖、雙 阱容器或端口相連接。根據(jù)本發(fā)明，所述培養(yǎng)步驟(a)和分離步驟(b)可以在第一隔離器單 元中進行。然而，優(yōu)選地，所述培養(yǎng)步驟以及所述提純步驟的至少一個階段在所述第一隔離 器單元中進行，而其余的提純階段在所述第二或另一個隔離器單元中進行。所述第一隔離 器單元可以在較高的溫度下、例如約15 °C至50 °C或20 °C至40 °C下運行，而所述第二或另一 個隔離器單元可以在較低的溫度、例如在約-5°C至+25°C范圍內(nèi)運行。術語"約"，在本發(fā)明 的情形下使用時，是指"大致"或"接近"。在數(shù)值的情形下，不承擔嚴格數(shù)值定義的責任，所 述術語可以解釋為估算所指示的值或范圍的+/-10%的值。
[0054]本發(fā)明的生產(chǎn)室是可在負壓下運行的密封和氣密的室。它可通過一個或多個氣鎖 接通外部。所述生產(chǎn)室包含所述安全工作臺以及所述第一隔離器和任選的所述第二或另一 個隔離器。供應空氣進出所述生產(chǎn)室優(yōu)選通過過濾器、特別是HEPA過濾器發(fā)生。在所述生產(chǎn) 室內(nèi)部，有受控的溫度，例如19 °C至26 °C，和受控的相對濕度，例如40 %至60 %，特別是 55%。某些操作或活動，包括生產(chǎn)肉毒桿菌毒素所必需或相關的測量或測試，可以在隔離器 單元外部執(zhí)行，特別是如果它們與氣溶膠形成無關或者如果所述生物活性材料以對從事肉 毒桿菌毒素生產(chǎn)的人員不造成任何危害的形式存在的話。
[0055]在另一個方面，本發(fā)明涉及高純度的肉毒桿菌毒素神經(jīng)毒性組分，其單鏈含量小 于 2.00wt%。優(yōu)選地，所述單鏈含量小于 1.90wt%，1.80wt%，1.70wt%，1.60wt%， 1 · 50wt %，1 · 40wt %，1 · 30wt %，1 · 20wt %，1 · lOwt %，1 · OOwt %，0 · 90wt % 或小于0 · 80wt %。 此外，本發(fā)明的高純度神經(jīng)毒性組分優(yōu)選具有至少99.90wt %的總純度，更優(yōu)選至少 99.95wt %，和最優(yōu)選99.99wt %，其中術語"總純度"具有上文定義的含義。另外，本發(fā)明的 高純度的肉毒桿菌毒素神經(jīng)毒性組分可以在具有每ml提純后的最終產(chǎn)物等于或小于5.0IU 的內(nèi)毒素含量、特別是等于或小于l.〇IU/ml，即通常lml溶液含有所述高純度肉毒桿菌毒素 神經(jīng)毒性組分的濃度為lOOμg/ml至500μg/ml。
[0056]此外，基于含有濃度為lOOμg/ml至500μg/ml的高純度肉毒桿菌毒素神經(jīng)毒性組分 的lml溶液，本發(fā)明的高純度的肉毒桿菌毒素神經(jīng)毒性組分優(yōu)選具有小于lcfu/ml的總需氧 活細胞計數(shù)，優(yōu)選小于〇. 5cfu/ml，更優(yōu)選0cfu/ml。
[0057]此外，本發(fā)明的高純度肉毒桿菌神經(jīng)毒性組分在LD5Q測定中具有4.0至8. Opg蛋白/ LD5Q單位、特別是5.0至6 . Opg蛋白/LD5Q單位的生物活性（相對功效