人HSP90α-2抗原表位肽、抗原、抗體、應(yīng)用及試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于多膚化學(xué)和免疫學(xué)領(lǐng)域，具體設(shè)及人熱休克蛋白90α -2化SP90a -2) 抗原表位膚、用該抗原表位膚制備的HSP90 α -2特異性抗原和相應(yīng)的單克隆抗體或多克隆 抗體、所述抗體在制備人HSP90 α -2體外診斷試劑盒上的應(yīng)用，人HSP90 α -2體外診斷試劑 盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，對(duì)腫瘤標(biāo)志物的研究已經(jīng)引起許多研究者的注意。尋找一種可靠的、非侵 入式的、能反映腫瘤的發(fā)生、增值分化的腫瘤標(biāo)志物是眾多研究者的共同屯、愿。通過對(duì)血 液、組織液的研究，目前發(fā)現(xiàn)一些腫瘤標(biāo)志物可W對(duì)腫瘤的發(fā)生、增殖分化進(jìn)行預(yù)測(cè)。其中， 人熱休克蛋白90 α -2化SP90 α -2)就是運(yùn)樣的一種腫瘤標(biāo)志物。
[0003] 熱休克蛋白90 α-2是熱休克蛋白家族中的重要的蛋白之一，其作為分子伴侶來 參與調(diào)控、維持細(xì)胞內(nèi)多種蛋白的構(gòu)象和功能，在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和調(diào)亡等方面發(fā)揮重 要的作用。近年發(fā)現(xiàn)，熱休克蛋白90α-2作為伴侶蛋白對(duì)腫瘤的惡性轉(zhuǎn)變、生長(zhǎng)、增殖及 侵襲有著重要的作用。有許多報(bào)道證實(shí)，人體腫瘤組織中，熱休克蛋白的表達(dá)發(fā)生了改變。 在不同部位的腫瘤組織中，熱休克蛋白表達(dá)的改變并不一致。目前發(fā)現(xiàn)腫瘤病人血清中的 HSP90 α -2含量與腫瘤的惡性程度，尤其是轉(zhuǎn)移正相關(guān)。因此，HSP90 α -2有希望作為腫瘤 診斷和預(yù)后的標(biāo)志物。
[0004] 檢測(cè)血清中的HSP90 α -2水平的最理想的方法為免疫檢測(cè)。因此，尋找合適的具 有免疫原性的HSP90 α -2抗原表位膚、制備特異性的HSP90 α -2抗原及抗體即成了重點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】
陽0化]為解決上述現(xiàn)有技術(shù)中所存在的問題，本發(fā)明提供了一種人HSP90 α -2抗原表位 膚，用該抗原表位膚制備的HSP90 α-2特異性抗原和相應(yīng)的單克隆抗體或多克隆抗體，其 在制備人HSP90 α -2試劑盒上的應(yīng)用，W及人HSP90 α -2體外診斷試劑盒。
[0006] 具體而言，本發(fā)明提供了：
[0007] 一種人服Ρ90 α -2抗原表位膚，其中所述服Ρ90 α -2抗原表位膚的氨基酸序列 為：
[0008] Tyr-Glu-Lys-Glu-Ser-Glu-Asp-Lys-Pr〇-Glu-Ile-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asp-G luo
[0009] 本發(fā)明還提供了一種服P90 α -2抗原，其是通過使所述的人服P90 α -2抗原表位 膚與載體蛋白偶聯(lián)制備而成的。
[0010] 本發(fā)明還提供了一種人服Ρ90 α -2抗體，其是由所述的服Ρ90 α -2抗原制備而成 的單克隆抗體或多克隆抗體，其中所述HSP90 α -2抗原是通過使所述的人HSP90 α -2抗原 表位膚與載體蛋白偶聯(lián)制備而成的。
[0011] 本發(fā)明還提供了所述的人服Ρ90α -2抗體在制備人服Ρ90α -2體外診斷試劑盒上 的應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明還提供了一種人服P90 α -2體外診斷試劑盒，其包含所述的人服P90 α -2 抗體作為包被抗體或結(jié)合抗體。
[0013] 優(yōu)選地，所述試劑盒還包含另一種人服Ρ90α -2抗體，并且上述的人服Ρ90α -2抗 體和所述的另一種人HSP90 α-2抗體中的一者作為包被抗體，另一者作為結(jié)合抗體，其中 所述的另一種人服Ρ90 α -2抗體由包含如W下序列所示的抗原表位的另一種服Ρ90 α -2抗 原制備而成：
[0014] Tyr-Ar邑-Gly-Ile-Asp-Glu-Asp-Asp-Pro-Thr-Ala-Asp-Asp-Thr-Ser-Ala-Ala-V al-Thr-GlUo
[0015] 優(yōu)選地，所述包被抗體為單克隆抗體。優(yōu)選地，所述結(jié)合抗體為多克隆抗體。
[0016] 優(yōu)選地，所述試劑盒還包含酶標(biāo)記的抗抗體。
[0017] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有W下優(yōu)點(diǎn)和積極效果： 陽01引 1.本發(fā)明的人服P90 α -2抗原表位膚具有良好的抗原性，用其制備的抗原（免疫 原）免疫動(dòng)物能夠產(chǎn)生高度特異性的單克隆抗體和多克隆抗體。
[0019] 2.用本發(fā)明制備的服Ρ90 α -2單克隆抗體和多克隆抗體能夠高度特異地與血液 樣本中的服Ρ90 α -2結(jié)合。
[0020] 3.本發(fā)明的人服Ρ90 α -2體外診斷試劑盒可W有效地檢測(cè)血清中的服Ρ90 α -2的 水平，可用來判斷腫瘤的惡性程度，并對(duì)轉(zhuǎn)移和預(yù)后進(jìn)行預(yù)測(cè)。
【具體實(shí)施方式】
[0021] W下通過【具體實(shí)施方式】的描述對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但運(yùn)并非是對(duì)本發(fā)明的限 審IJ，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可W做出各種修改或改進(jìn)，但是只要不脫離本 發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0022] 一、人服Ρ90 α -2抗原表位膚
[0023] 本文中所述的人服Ρ90α -2蛋白是本領(lǐng)域已知的，其氨基酸序列是本領(lǐng)域已知 的，可W在NCBI等專業(yè)數(shù)據(jù)庫(kù)中查到。
[0024] 本發(fā)明提供了人服Ρ90 α -2抗原表位膚（1)和（2)，其氨基酸序列分別如序列表 沈Q ID No. 1和沈Q ID No. 2所示，為： 陽0巧] (l)Y-E-K-E-S-E-D-K-P-E-I-E-D-V-G-S-D-E ;和
[0026] (2)Y-R-G-I-D-E-D-D-P-T-A-D-D-T-S-A-A-V-T-E。
[0027] 本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過大量的理論研究和實(shí)驗(yàn)摸索，最終篩選得到兩種具有良好的 抗原性的抗原表位膚。
[0028] HSP90 α -2抗原表位膚（1)包含人服P90 α -2蛋白（NCBI登錄號(hào)NP_005339. 3) N 端第249位至第265位的膚段，并且在該膚段的N段加上Y，從而構(gòu)成包含18個(gè)氨基酸的 HSP90 α -2抗原表位膚（1)。
[0029] HSP90 α -2抗原表位膚（2)包含人服Ρ90 α -2蛋白（NCBI登錄號(hào)ΝΡ_005339. 3) C 端第697位至第714位膚段，并且在該膚段的Ν段加上Υ和R，從而構(gòu)成包含20個(gè)氨基酸的 HSP90 α -2抗原表位膚（2)。
[0030] 運(yùn)兩個(gè)膚段均具有親水性、抗原性強(qiáng)并且易于合成的特點(diǎn)。
[0031] 目前，本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的服P90 α -2抗原表位膚具有如下功能：
[0032] 1.具有抗原性；2.與載體蛋白連接后作為免疫原刺激動(dòng)物產(chǎn)生特異性的抗體； 3.用抗原表位膚制備的抗體可特異性地與人服Ρ90 α -2結(jié)合。
[0033] 本發(fā)明的HSP90 α -2抗原表位膚的制備方法可用化學(xué)合成法：利用美國(guó)ΑΒΙ431Α 型多膚自動(dòng)合成儀，通過固相法合成抗原表位膚。本發(fā)明的抗原表位膚（1)和（2)的分子 量分別為2404. 35、2483. 39,可用質(zhì)譜進(jìn)行確定，并通過多膚序列測(cè)定鑒定所合成的抗原表 位膚序列。膚段的純度可用薄層色譜和高效液相色譜進(jìn)行評(píng)定，并測(cè)定抗原表位膚的濃度。
[0034] 二、HSP90a-2 抗原
[0035] 本發(fā)明還提供了服Ρ90α -2抗原，其通過使本發(fā)明的人服Ρ90α -2抗原表位膚（1) 和（2)中的一者與載體蛋白偶聯(lián)制備而成。具體而言，本發(fā)明提供了 HSP90a-2抗原（1) 和（2)，所述服Ρ90α-2抗原（1)通過使本發(fā)明的人服Ρ90α-2抗原表位膚（1)與載體蛋白 偶聯(lián)制備而成；所述服Ρ90 α -2抗原（2)通過使本發(fā)明的人服Ρ90 α -2抗原表位膚（2)與 載體蛋白偶聯(lián)制備而成。本發(fā)明的服Ρ90 α -2抗原具有免疫原性和特異性，是一種免疫原， 可用來免疫動(dòng)物從而制備特異性的HSP90 α -2抗體。在本發(fā)明中，可用的載體蛋白的例子 包括KLH(鑰孔血藍(lán)蛋白）、牛血清白蛋白度SA)、卵清蛋白OVA等。由于KLH(鑰孔血藍(lán)蛋 白）免疫原性強(qiáng)，結(jié)合位點(diǎn)多，免疫效果較好，并且與免疫動(dòng)物親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，用其作為載 體蛋白不易引起交叉反應(yīng)，因此是優(yōu)選的。
[0036] Ξ、HSP90 α -2單克