br>[0167] 特別是，滅菌步驟可W在rc^i2rc高壓鍋內(nèi)進(jìn)行(濕熱），獲得F0>15(滅菌值）。
[0168] 在運(yùn)方面，如上述的，根據(jù)本發(fā)明的組合物特別有利的在于，它對該滅菌步驟顯示 非常有趣的高電阻。
[0169] 事實(shí)上，如在實(shí)施例1和2中所示的，對于根據(jù)本發(fā)明的組合物由滅菌產(chǎn)生的G'的 損失低于含有利多卡因而不是甲贓卡因的組合物。
[0170] 根據(jù)一個(gè)具體的實(shí)施方案，根據(jù)本發(fā)明的透明質(zhì)酸的凝膠的制備方法可W進(jìn)一步 包括步驟d)，由如下組成：加入不同于甲贓卡因或其鹽的另外的麻醉劑或其鹽，如上述的， 優(yōu)選利多卡因或其鹽，所述步驟d)在步驟b)之前，同時(shí)和/或之后進(jìn)行。
[0171] 當(dāng)步驟a)中考慮的凝膠包含交聯(lián)的透明質(zhì)酸形式時(shí)，該后者可預(yù)先從未交聯(lián)的透 明質(zhì)酸的形式獲得。
[0172] 該網(wǎng)狀可通過使用至少一種交聯(lián)劑的常規(guī)方式進(jìn)行，如上述的。
[0173] 待交聯(lián)的包含交聯(lián)劑和透明質(zhì)酸的含水混合物有利地在進(jìn)行交聯(lián)之前均勻化。
[0174] 該操作的目的尤其是為含水介質(zhì)中透明質(zhì)酸或其鹽的完全水合和均勻化，從而有 助于優(yōu)化預(yù)期的透明質(zhì)酸凝膠的性能。當(dāng)透明質(zhì)酸具有高的分子量時(shí)，該均勻化步驟更加 重要，因?yàn)檫\(yùn)樣的化合物的水合易于導(dǎo)致形成高粘度溶液，其內(nèi)常常觀察到團(tuán)聚的出現(xiàn)。
[0175] 該操作的目的也是為了使混合物內(nèi)的交聯(lián)劑完全均勻化，W便隨后保證均勻的交 聯(lián)反應(yīng)。
[0176] 當(dāng)?shù)玫降娜芤罕痪鶆虻刂?，沒有團(tuán)聚，且具有均勻的粘度時(shí)，均勻化被認(rèn)為是令 人滿意的。均勻化可有利地在溫和的操作條件下進(jìn)行，W防止透明質(zhì)酸鏈的降解。
[0177] 該均勻化步驟的持續(xù)時(shí)間取決于透明質(zhì)酸或其鹽的性質(zhì)，特別是其分子量和濃 度，取決于含水介質(zhì)內(nèi)的操作條件和取決于所用的均勻化設(shè)備，通常地允許溫和的機(jī)械攬 拌的設(shè)備。
[0178] 優(yōu)選地，均勻化步驟可W發(fā)生在小于200分鐘，優(yōu)選小于150分鐘，甚至15至100分 鐘的時(shí)間內(nèi)。
[0179] 交聯(lián)反應(yīng)的目的是創(chuàng)建透明質(zhì)酸鏈之間的橋梁，使得可能從粘稠溶液得到稠密的 固體S維網(wǎng)絡(luò)。
[0180] 為了促進(jìn)交聯(lián)反應(yīng)所采用的具體條件可取決于透明質(zhì)酸的分子量，取決于含水介 質(zhì)和取決于交聯(lián)劑的性質(zhì)。一般來說，該網(wǎng)狀可通過使如上述的包含非交聯(lián)的透明質(zhì)酸和 至少一種交聯(lián)劑與觸發(fā)元素或刺激物接觸而實(shí)現(xiàn)，諸如例如通過加熱或暴露于UV，或甚至 通過使混合物與催化劑型的材料接觸。
[0181] 運(yùn)樣的觸發(fā)元素的選擇屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員的一般知識。
[0182] 在本發(fā)明的情況下，該觸發(fā)元素有利地代表是施加到"非交聯(lián)的透明質(zhì)酸/含水介 質(zhì)/交聯(lián)劑"混合物上的溫度的增加。
[0183] 交聯(lián)反應(yīng)特別適宜的溫度為35°C至60°C，優(yōu)選45°C至55°C，且更好地是48°C至52 r。
[0184] 交聯(lián)程度還取決于交聯(lián)時(shí)間和施加到"非交聯(lián)的透明質(zhì)酸/含水介質(zhì)/交聯(lián)劑"混 合物上的溫度。時(shí)間越長，交聯(lián)程度越高，然而不超過透明質(zhì)酸無降解風(fēng)險(xiǎn)的最佳效果。
[01化]因此，在35°C至60°C的溫度下，交聯(lián)反應(yīng)可進(jìn)行30至300分鐘，優(yōu)選100至200分鐘， 且更好地是150至190分鐘的時(shí)間。
[0186] 優(yōu)選地，調(diào)整交聯(lián)條件W獲得使交聯(lián)的透明質(zhì)酸凝膠W粘的，粘彈性凝膠，甚至是 固體凝膠形成的交聯(lián)程度。
[0187] 停止交聯(lián)反應(yīng)需要將交聯(lián)的凝膠或，在交聯(lián)過程中，甚至是含有它的容器，暴露于 適合于停止交聯(lián)的條件或暴露于能夠停止各種透明質(zhì)酸鏈之間形成鍵的條件。
[0188] 例如，在將用于刺激交聯(lián)過程的熱條件方面，交聯(lián)可W被停止：
[0189] -通過簡單地將容器從恒溫浴去除并冷卻至室溫；
[0190] -通過將容器置于冷水浴中，優(yōu)選地在低于室溫的溫度下，直至所述容器內(nèi)的溫度 接近室溫;或甚至
[0191] -通過從所述容器提取出凝膠。
[0192] 根據(jù)一個(gè)具體的實(shí)施方案，均勻化和交聯(lián)可W在至少部分地由可變形壁劃定的密 封腔內(nèi)進(jìn)行，優(yōu)選在可變形的袋內(nèi)做，其至少手動觸診地可變形，如尤其在WO 2010/131175 中描述的。
[0193] 在交聯(lián)步驟結(jié)束時(shí)所獲得的凝膠通常不能直接注射，特別是因?yàn)樗母咄该髻|(zhì)酸 濃度和/或可能存在的交聯(lián)劑殘留，或因?yàn)榕c上面考慮的應(yīng)用領(lǐng)域中的用于不兼容的其生 理學(xué)上的和/或抑條件。
[0194] 此外，一些凝膠可能尤其具有如向患者注射時(shí)太高的剛度。因此，可W進(jìn)行本領(lǐng)域 技術(shù)人員已知的一些另外的步驟W獲得可注射的水凝膠。尤其是，需要中和和擴(kuò)展該凝膠 的步驟，W便賦予它其植入物質(zhì)量。然后拉伸和水合透明質(zhì)酸網(wǎng)絡(luò)的鏈，同時(shí)pH值被調(diào)整為 皮膚的pH值。
[0195] 根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員的實(shí)際知識，還可進(jìn)行保護(hù)和再稠密化凝膠的步驟進(jìn)一步提 高植入物的質(zhì)量。該凝膠必須是通過在與那些注射的介質(zhì)相當(dāng)量的鹽存在下生理學(xué)地配制 的。
[0196] 為了甚至更高的純度，還可進(jìn)行另外的純化步驟。
[0197] 有利的是，在可注射的透明質(zhì)酸的該制備過程結(jié)束，就在如上述的滅菌步驟之前 時(shí)加入甲贓卡因或其鹽，及另外的麻醉劑（出現(xiàn)的情況）。
[0198] 根據(jù)一個(gè)具體的實(shí)施方案，可使用加入的甲贓卡因和可選的另外的麻醉劑的水凝 膠W在可控大氣條件下填充注射器，所述注射器然后可能經(jīng)歷滅菌步驟，優(yōu)選熱滅菌步驟， 如上面定義的。
[0199] 組合物的施用
[0200] 可W使用任何本領(lǐng)域已知方法注射根據(jù)本發(fā)明的組合物。
[0201] 特別是，本發(fā)明的組合物可W通過適用于表皮內(nèi)和/或皮內(nèi)和/或皮下的注射設(shè)備 施用。
[0202] 本發(fā)明的組合物還可通過適用于牙銀、關(guān)節(jié)和/或眼內(nèi)區(qū)域的注射設(shè)備施用。
[0203] 注射設(shè)備，尤其是當(dāng)本發(fā)明組合物通過適用于表皮內(nèi)和/或皮內(nèi)和/或皮下的注射 設(shè)備施用時(shí)，可W選自于注射器、一套微量注射器、激光設(shè)備、液壓設(shè)備、注射槍、無針注射 設(shè)備、具有微針的針筒。
[0204] 優(yōu)選地，注射設(shè)備可W選自于注射器或一套微量注射器。
[0205] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，注射設(shè)備能適應(yīng)美塑療法技術(shù)。
[0206] 美塑療法是通過表皮內(nèi)和/或皮內(nèi)和/或皮下活性產(chǎn)品的治療技術(shù)。
[0207] 根據(jù)本發(fā)明的表皮內(nèi)和/或皮內(nèi)和/或皮下施用是在表皮區(qū)、真皮表皮或真皮中注 入本發(fā)明的組合物。
[0208] 注射設(shè)備可W包括任何常規(guī)施用的注射如皮下注射針或插管。
[0209] 根據(jù)本發(fā)明的針或插管可W具有18至34G，優(yōu)選25至32G的直徑，和4至70mm，優(yōu)選4 至25mm的不同長度。
[0210] 針或插管優(yōu)選是一次性的。
[0211] 有利的是，針或插管與注射器或其他能夠通過針或插管遞送所述可注射的組合物 的設(shè)備相連。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，導(dǎo)管可W插入在針/插管和注射器之間。
[0212] 在已知的方式中，注射器可W由執(zhí)業(yè)醫(yī)生或由注射器固定器作為注射針手動操 作。
[0213] 在整個(gè)說明書中，包括權(quán)利要求書，表述"包含一個(gè)"應(yīng)被理解為與"包含至少一 個(gè)"同義，除非另有明確說明。
[0214] 表述"…至…""范圍從…到…"應(yīng)被理解為指包括極限值，除非另有說明。實(shí)施例:
[0215] 材料和方法:
[0216] 本文對組合物的粘彈性的測量定義后的程序適用于W下實(shí)施例。
[0217] 組合物的粘彈性可W用具有錐體/板幾何結(jié)構(gòu)（1°錐角/35mm直徑的板）的流變儀 (尤其是化ake RS6000)測量。應(yīng)力為5化下進(jìn)行應(yīng)變掃描，和測量彈性模量G'（ W化計(jì))和移 相角8(從°計(jì)）。
[0218] 實(shí)施例1:使用非交聯(lián)的透明質(zhì)酸制備根據(jù)本發(fā)明的組合物的程序和關(guān)于其對滅 菌的穩(wěn)定性的分析
[0219] 混合3g透明質(zhì)酸（1.5MDa，）和197g憐酸鹽緩沖液(如在FR 2 979 539中定義的）。
[0220] 制備程序如下：
[0221] 1.在密封容器(Nalgene罐）中室溫下S維均勻化混合物"透明質(zhì)酸+憐酸鹽緩沖 液"至少20小時(shí)；
[0222] 2.將得到的非交聯(lián)的凝膠分離為2等值部分（W下稱為部分Al和A2);
[0223] 3.對于部分Al,加入甲贓卡因（憐酸鹽緩沖液中30重量％ )的溶液的凝膠1重量％ 和0.4重量％的1 %的NaO田容液;或
[0224] 4.對于部分A2,加入利多卡因（憐酸鹽緩沖液中30重量％ )的溶液的凝膠1重量％ 和0.4重量％的1 %的NaOH溶液;和
[0225] 5.均勻化，包裝在ImL注射用注射器中并滅菌(F0>15)。
[0226] ?。?br>[0227] 下表給出所得的水凝膠的彈性模量G'（ W化計(jì))和擠壓力F(N)的值。
[0229] 按