。通氮?dú)馄陂g，用移液器量取 4血提純后的苯乙締，并經(jīng)四口燒瓶的加料口緩慢滴加，稱取36mg過硫酸鐘，用ImL純化水 溶解后，加入到反應(yīng)體系中，水浴鍋溫度設(shè)定至85°C，加熱引發(fā)聚合。稱取10mg2-甲基丙締 酷氧乙基憐酸膽堿，用ImL長鏈簇基單體溶解，攬拌溶解至變成乳白色，此過程中保持氮?dú)?通入。將乳白色液體加入到苯乙締反應(yīng)體系中，溫度穩(wěn)定在85°C，反應(yīng)化后結(jié)束。
[0048] 待制備聚苯乙締微球的四口燒瓶冷卻至室溫后，將冷凝管上端的干燥管換為磨口 具活塞，活塞處接真空累抽提反應(yīng)殘留單體，真空度要求保持在200Pa，持續(xù)2小時(shí)，由于苯 乙締的強(qiáng)揮發(fā)性，可有效除去殘留未聚合單體。
[0049] 在IOml填料柱下端放上聚丙締墊片，墊片在使用前需要超聲清洗，在墊片上加入 4-5ml瓊脂糖離子交換Q柱，待填料自然沉降后，用純化水清洗3次，置換填料中的溶劑。加 入乳白色為全球液體Iml到填料中，待產(chǎn)物完全沒入填料柱后，加入3-4mL純水將產(chǎn)物完全 沖出。舍棄前段不含膠乳的流出液，收集膠乳流出液，后半段微球溶液顏色變淺時(shí)，也舍棄 之。待填料中殘留的微球溶液完全沖去后，在進(jìn)行上樣。填料柱每過10次時(shí)，應(yīng)用0.0 lmol/ 1的氯化鋼溶液洗涂，后用純水洗涂，再用于微球的過濾。
[0050] 對純化后的微球溶液進(jìn)行分裝，離屯、濃縮，4°C下1500化pm離屯、20min，棄上清。純 化水復(fù)溶沉淀并濃縮，重復(fù)清洗3次，除去游離的2-甲基丙締酷氧乙基憐酸膽堿和長鏈簇 基單體。
[0051] 所得微球?qū)ζ溥M(jìn)行烘干法測定固形物含量，留取備用。 實(shí)施例2簇酸型兩性離子型聚苯乙締微球制備 制備方法參照實(shí)施例1，具體實(shí)施方法如下： 在四口燒瓶中加入45mg十二烷基橫酸鋼，加入純化水IOOmL攬拌溶解。然后通氮?dú)怅?氧，通氮?dú)馄陂g，用移液器量取4血苯乙締，并經(jīng)四口燒瓶的加料口緩慢滴加。稱取36mg過 硫酸鐘，用ImL純化水溶解后，加入到反應(yīng)體系中，將水浴鍋溫度設(shè)定至85°C，加熱引發(fā)聚 合。稱取IOmg N，N-二甲基-N-甲基丙締酷氧乙基-N-乙酸內(nèi)鹽，用ImL長鏈簇基單體溶 解攬拌溶解至變成乳白色，此過程中保持氮?dú)馔ㄈ?。將乳白色液體加入到苯乙締反應(yīng)體系 中，溫度穩(wěn)定在85 °C，反應(yīng)化后結(jié)束。
[0052] 所得微球經(jīng)過過離子交換柱純化，并離屯、濃縮，最后對其進(jìn)行烘干法測定固形物 含量，留取備用。 實(shí)施例3憐酸型兩性離子型聚苯乙締磁性微球的制備 在配有冷凝管、氮?dú)馔贰⒊曊穹鶙U和機(jī)械攬拌的四口燒瓶中加入130ml水和20ml 乙醇兩者混勻后加入90mg十二烷基橫酸鋼和270mg十六醇，加熱50°C將其溶解并通氮?dú)獬?氧設(shè)定攬拌漿轉(zhuǎn)速為50化pm，通氮?dú)馄陂g，用移液器移取IOml苯乙締，加入到0. 4g油酸修 飾的四氧化S鐵中，超聲分散均勻后緩慢滴加到四口燒瓶反應(yīng)體系中。加入36mg過硫酸鐘 的水溶液，并開啟超聲（功率650W，頻率30%，工作2秒，間斷1秒），將油溶性單體和磁性 顆粒分散均勻，形成均一的灰色反應(yīng)體系，最后加入正十六燒2ml來穩(wěn)定小油滴，并設(shè)置水 浴鍋溫度為85°C，超聲1小時(shí)后，關(guān)閉超聲，向反應(yīng)體系中加入20mg2-甲基丙締酷氧乙基憐 酸膽堿和2mL長鏈簇基單體，于85°C反應(yīng)10個(gè)小時(shí)。
[0053] 反應(yīng)結(jié)束后，將四口燒瓶中的產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到塑料小瓶中，利用磁鐵對產(chǎn)物進(jìn)行磁分 離，去除磁性較弱的部分，然后復(fù)溶，重復(fù)篩選，要求直到產(chǎn)物能在30秒內(nèi)能完成完全的磁 分離。之后磁性微球使用Se地adex G25填料進(jìn)行純化，去除微球中顆粒較大的部分雜質(zhì)。 在微型層析柱中加入G25填料4-5ml，待填料由于重力沉降，濾去原溶劑后，用水沖洗3次， 后加入磁性微球溶液2ml，待微球溶液完全沒入填料后，用純化水將產(chǎn)物沖出，收集流出液 中夜色較深部分，舍棄后半段殘余較淺的微球溶液，期間粒徑較大雜質(zhì)顆粒會(huì)殘留在填料 柱中。
[0054] 所得微球?qū)ζ溥M(jìn)行烘干法測定固形物含量，留取備用。 實(shí)施例4橫酸型兩性離子聚苯乙締磁性微球的制備 制備方法可參照實(shí)施例3,具體方法如下： 在四口燒瓶中將250mL水和50mL乙醇混合均勻，通成約30min除氧，加入十二烷基橫 酸鋼160mg和十六醇480mg到上述溶劑中，機(jī)械攬拌同時(shí)加熱至65°C，使溶解，得到略發(fā)白 的分散液。向體系中加入磁流體0. 6g和單體20mL混合液。對反應(yīng)體系進(jìn)行超聲處理，并加 入過硫酸鐘72mg，升溫至85°C開始聚合，反應(yīng)進(jìn)行Ih后關(guān)閉超聲，向反應(yīng)體系中加入20mg N，N-二甲基-N-甲基丙締酷胺基丙基-N-丙烷橫酸內(nèi)鹽，和2mL長鏈簇基單體，反應(yīng)10小 時(shí)結(jié)束。
[0055] 反應(yīng)結(jié)束后，對產(chǎn)物進(jìn)行磁性分離純化W及過凝膠柱純化，最后對其進(jìn)行烘干法 測定固形物含量，留取備用。 實(shí)施例5憐酸型兩性離子型聚苯乙締巧光微球的制備 電子天平稱取25mg bodipy(542/564)巧光染料，加入8ml95%乙醇，超聲溶解后，用油 系0. 22um的濾膜過濾，棄去不溶固體殘?jiān)?，備用。向配有冷凝管，氮?dú)馔?、磁力攬拌和?浴加熱的四口燒瓶中加入45mg十二烷基橫酸鋼，量取100mL純化水?dāng)埌枞芙?。待固體粉末 溶解完畢后加入乙醇溶解的巧光染料溶液，從導(dǎo)氣管口通入氮?dú)獬?，并將水浴鍋的溫?設(shè)定為70°C，待溫度恒定后，持續(xù)通氮?dú)?0min，此過程中冷凝管內(nèi)部不通冷凝水，W除去 多余的乙醇。之后，將整四口燒瓶從水浴鍋中取出，將水浴鍋內(nèi)熱水換為冷水，四口燒瓶也 用冷水沖洗降至室溫。
[0056] 重新將四口燒瓶放回水浴中，開啟磁力攬拌，緩慢滴加4ml苯乙締，整個(gè)過程維持 在10-15分鐘完成，重新將水浴鍋溫度設(shè)定為85°C，同時(shí)加入引發(fā)劑過硫酸鐘36mg，將冷凝 水打開，進(jìn)行回流反應(yīng)，反應(yīng)1小時(shí)后，加入IOmg 2-甲基丙締酷氧乙基憐酸膽堿和ImL長 鏈簇基單體，W引入官能基團(tuán)和兩性離子親水基團(tuán)。整個(gè)過程繼續(xù)保持通氮?dú)?。反?yīng)8小 時(shí)后，關(guān)閉水浴鍋的加熱W及攬拌。
[0057] 所得產(chǎn)物經(jīng)過瓊脂糖離子交換Q柱進(jìn)行純化后，進(jìn)行離屯、清洗濃縮。其清洗過程 要求一致洗到上清液中測不出巧光為止。
[0058] 所得微球?qū)ζ溥M(jìn)行烘干法測定固形物含量，留取備用。 實(shí)施例6包裹法制備橫酸型兩性離子聚苯乙締巧光微球 制備方法可參照實(shí)施例5,具體方法如下： 稱取23mg 8-苯胺-1-糞橫酸巧光染料，用乙醇溶解后過濾，備用。向四口燒瓶中加入 45mg十二烷基苯橫酸鋼，量取100mL純化水?dāng)埌枞芙?。待固體粉末溶解完畢后加入巧光染 料溶液，從導(dǎo)氣管口通入氮?dú)獬?，升溫保持通?0min，，W除去多余的乙醇。之后，將整 四口燒瓶降溫，并重新向四口燒瓶緩慢滴加4ml苯乙締，再次升溫至85°C，同時(shí)加入引發(fā)劑 過硫酸鐘36mg，通冷凝水進(jìn)行反應(yīng)，1小時(shí)后加入加入IOmg N，N-二甲基（甲基丙締酷氧乙 基）錠基丙橫酸內(nèi)鹽，ImL長鏈簇基單體，整個(gè)過程繼續(xù)保持通氮?dú)?，反?yīng)8小時(shí)后結(jié)束。
[0059] 所得產(chǎn)物經(jīng)過瓊脂糖離子交換Q柱進(jìn)行純化后，進(jìn)行離屯、清洗濃縮。其清洗過程 要求一直洗到上清液中測不出巧光為止。
[0060] 所得微球?qū)ζ溥M(jìn)行烘干法測定固形物含量，留取備用。 實(shí)施例7溶脹法制備憐酸型兩性離子聚苯乙締巧光微球 先制備憐酸型兩性離子型聚苯乙締微球，參照實(shí)施例1，具體如下：量取純化水IOOmL 倒入四口燒瓶中，稱取45mg十二烷基橫酸鋼，加入到燒瓶中溶解。通氮?dú)獬?0min。通氮 氣結(jié)束后，量取5mL苯乙締，0. 2ml的二乙締基苯經(jīng)前口緩慢滴加入到四口燒瓶中，此過程 維持在15min左右完成。
[006U 稱取36mg過硫酸鋼，用1血加入到反應(yīng)體系加入到反應(yīng)體系中，升溫至85°C，記下 開始時(shí)間，反應(yīng)1小時(shí)后，稱取IOmg 2-甲基丙締酷氧乙基憐酸膽堿，加入反應(yīng)體系中，繼續(xù) 反應(yīng)直至化后反應(yīng)結(jié)束。所得的憐酸型雙離子聚苯乙締交聯(lián)微球經(jīng)離屯、清洗純化后備用。
[0062] 用移液器移取4ml憐酸型雙離子聚苯乙締交聯(lián)微球到圓底燒瓶中，并加入2ml的 1 %的十二烷基橫酸鋼水溶液，搖勻。稱取IOmgS (1,3-二苯-1,3-苯S徑基）（1,10-鄰 二氮雜菲）館，并溶解于Iml的邸2化中，得到稀±館巧光染料的CH 2化溶液。
[0063] 將稀±館巧光染料的CH2CI2溶液加入含有SDS的交聯(lián)微球溶液中，超聲將混合