皮膚免疫用方法和組合物的制作方法
【專利說明】
[0001] 本申請(qǐng)為國際申請(qǐng)PCT/FR2008/052198于2010年6月2日進(jìn)入中國國家階段、申 請(qǐng)?zhí)枮?00880118865. 0、發(fā)明名稱為"皮膚免疫用方法和組合物"的分案申請(qǐng)。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及通過皮膚途徑遞送疫苗的方法和系統(tǒng)的開發(fā)。本發(fā)明更特別地涉及包 含用于表皮（印icutaneou)接種的冷凝隔室的裝置的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及可以在無需任何 皮膚處理的條件下即獲得有效的免疫應(yīng)答的表皮接種方案。本發(fā)明還可用于任何哺乳動(dòng)物 中，優(yōu)選用于人類，以誘導(dǎo)抗任何類型的抗原的治療性或預(yù)防性免疫應(yīng)答。
【背景技術(shù)】
[0003] 大多數(shù)病原體通過粘膜或皮膚進(jìn)入體內(nèi)。皮膚，如粘膜，因此具有發(fā)覺病原體 和自身防護(hù)所需的所有工具。這道防線特別地包括一支專職性的、駐留的抗原遞呈細(xì)胞 (Langerhans cells，APCs)隊(duì)伍。在正常情況下存在于表皮中的唯一的APCs是郎格罕氏 細(xì)胞（LC)，其是來自骨髓的樹突狀細(xì)胞（DC)。在捕捉抗原后，活化的LCs移動(dòng)到引流淋巴 結(jié)中，在那里它們啟動(dòng)強(qiáng)大的全身免疫應(yīng)答。因此，對(duì)于通過傳統(tǒng)注射給藥途徑來開發(fā)更有 效的疫苗而言，皮膚代表了潛在的替代方法。另外，皮膚免疫系統(tǒng)還可以是用于誘導(dǎo)在不同 病變諸如自身免疫疾病、過敏性和可能還有癌癥中的耐受性的理想靶標(biāo)。
[0004] 然而，角質(zhì)層（SC)，即皮膚的最頂層，是對(duì)抗流體、大分子（多肽和蛋白質(zhì)）、或粒 子乃至微生物進(jìn)入的有效的物化屏障。已經(jīng)測(cè)試了許多技術(shù)以致力于經(jīng)由表皮途徑、即通 過向皮膚施用抗原獲得有效的免疫應(yīng)答。這些技術(shù)全部都涉及角質(zhì)層的物理破壞，例如，輕 度或中度磨損（在敷用膠條或使用砂紙后），通過應(yīng)用超聲或微針。這些不同的技術(shù)在或 大或小的程度上都表現(xiàn)出作為抗原施用前的先行步驟的效力，用于促進(jìn)抗原進(jìn)入包含免疫 細(xì)胞的皮膚表層（表皮），和誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。例如，已顯示向先前已經(jīng)過磨損的皮膚共同施 加抗原和佐劑諸如霍亂毒素（CT)或大腸桿菌的不穩(wěn)定毒素（LT)有效產(chǎn)生免疫抗體應(yīng)答 (Glenn GM1Rao M1Matyas GR1Alving CR. Skin immunization made possible by cholera toxin.Nature. 1998.391:851 ；Glenn GM, Scharton - Kersten T,Vassell R, Matyas GR, Alving CR. Transcutaneous immunization with bacterial ADP - ribosylating exotoxins as antigens and adjuvants. Infect Tmmun. 1999. 67:1100 - 6.) 〇另一方面，在 施加抗原之前皮膚僅僅水合，無論是否隨后進(jìn)行封閉性處理，都決不引起特異性抗體應(yīng)答。 其僅能在皮膚先前經(jīng)處理，導(dǎo)致角質(zhì)層的物理擾動(dòng)，或者如果抗原與強(qiáng)力的佐劑（CT或LT) 共同給藥下獲得。
[0005] 其它工作后來顯示出，使用封閉系統(tǒng)將疫苗制劑保持就位，以液體形式在動(dòng)物皮 膚上沉積1-24小時(shí)的時(shí)段，使得只有在皮膚處理后方可在動(dòng)物或在人中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。然 而，使用0-24小時(shí)的接觸時(shí)間誘導(dǎo)的應(yīng)答，在質(zhì)和/或量上沒有變化。
[0006] 在WO 2004/03069申請(qǐng)中，其設(shè)想了借助于包含抗原和免疫刺激化合物的干形式 的組合物，使用PosIntro或ISCOM系統(tǒng)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。
[0007] 在國際申請(qǐng)WO 2007/122226中還提議使用皮膚貼片以獲得免疫應(yīng)答。然而，該文 獻(xiàn)中所述的方法采用佐劑。
[0008] 因此，如果沒有任何先行的物理或物化處理（砂紙，乙醇，丙酮，膠條，甘油）或使 用強(qiáng)力的佐劑（LT或CT)或其它促進(jìn)性賦形劑的話，不能檢測(cè)到抗原特異性抗體應(yīng)答。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明首次描述了能夠通過皮膚途徑誘導(dǎo)抗原特異性免疫應(yīng)答而無需使用佐劑 (CT或LT)或預(yù)處理或穿刺皮膚的方法。更具體地說，本發(fā)明描述了即使在缺乏任何佐劑下 也是有效的表皮接種方法，該方法基于在允許形成冷凝隔室的條件下被施用于皮膚的干疫 苗制劑的應(yīng)用。本發(fā)明表明了產(chǎn)生和維持皮膚水合導(dǎo)致SC擾動(dòng)，允許抗原通過。另外，水 積聚在遞送系統(tǒng)下，允許了干疫苗制劑再水合和溶解并開始與接觸皮膚。我們?cè)谂R床前試 驗(yàn)中已顯示了，與目前為止所述的不同的皮膚系統(tǒng)相反，本發(fā)明允許在沒有共同給藥任何 佐劑（CT或LT類型）和無任何皮膚準(zhǔn)備（磨損或穿刺）的條件下，誘導(dǎo)免疫原特異性抗體 應(yīng)答。在特別值得注意的方式中，本發(fā)明能夠在無任何積極處理的條件下進(jìn)行大分子（主 要是多肽和蛋白質(zhì)）的皮膚轉(zhuǎn)運(yùn)，這是現(xiàn)有技術(shù)所從未描述過的。如實(shí)施例中所闡述的，在 使用本發(fā)明的方法三次施用疫苗之后，觀察到特別強(qiáng)的免疫應(yīng)答。
[0010] 因此，本發(fā)明的一個(gè)目的在于疫苗制劑在制備哺乳動(dòng)物、優(yōu)選人的表皮接種用組 合物中的應(yīng)用，特征在于所述疫苗制劑為干形式并且不含任何佐劑，以及特征在于所述疫 苗制劑借助于在接觸皮膚時(shí)形成包含所述疫苗制劑的冷凝隔室的皮膚裝置而被施用于哺 乳動(dòng)物的皮膚上進(jìn)行給藥。
[0011] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于皮膚給藥裝置在制備計(jì)劃用于在沒有任何先前皮膚處 理或沒有任何佐劑的共同給藥的條件下將包含抗原的疫苗制劑進(jìn)行給藥的組合物中的應(yīng) 用，所述皮膚給藥裝置包含干形式的疫苗制劑并且不含佐劑化合物，并且在接觸皮膚時(shí)形 成包含所述疫苗制劑的冷凝隔室，從而允許在沒有任何佐劑或先前皮膚處理的條件下所述 抗原進(jìn)入表皮并誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。
[0012] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于在沒有任何的先前皮膚處理或佐劑的共同給藥的條件 下將包含抗原的疫苗制劑進(jìn)行給藥的皮膚給藥裝置的應(yīng)用，所述皮膚給藥裝置包含干形式 的疫苗制劑并且不含佐劑化合物，并且在接觸皮膚時(shí)形成包含所述疫苗制劑的冷凝隔室， 從而允許在沒有佐劑或任何先前皮膚處理的條件下所述抗原進(jìn)入表皮并誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。
[0013] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于在哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)抗原特異性免疫應(yīng)答的方法，該方法 包括，在無任何的先前皮膚處理的條件下，對(duì)所述哺乳動(dòng)物的皮膚施用包含干形式的疫苗 制劑的皮膚給藥裝置，該疫苗制劑包含抗原但不含任何的佐劑化合物，所述裝置接觸皮膚 時(shí)形成包含所述疫苗制劑的冷凝隔室，施用時(shí)間足以允許所述抗原在無佐劑或先前皮膚處 理的條件下進(jìn)入表皮并誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。
[0014] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于通過皮膚途徑誘導(dǎo)抗原特異性免疫應(yīng)答的方法，該方法 包括產(chǎn)生和維持局部的皮膚水合并使所述水合的皮膚接觸不含佐劑的干疫苗制劑歷時(shí)足 夠使抗原進(jìn)入并誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的時(shí)間。
[0015] 本發(fā)明的另一個(gè)目的涉及在對(duì)象中誘導(dǎo)抗蛋白質(zhì)抗原的全身免疫應(yīng)答的方法，該 方法包括借助于皮膚裝置經(jīng)表皮途徑對(duì)所述對(duì)象給藥所述抗原，所述皮膚裝置包括背襯， 所述背襯的周邊部分適于與皮膚形成密封室，其中所述背襯保持所述抗原位于所述背襯在 所述室內(nèi)與皮膚接觸的面上，在所述裝置施用于所述皮膚上之后，所述抗原從所述背襯上 移去，然后經(jīng)由表皮途徑被遞送至對(duì)象，所述給藥導(dǎo)致在對(duì)象中誘導(dǎo)全身免疫應(yīng)答。
[0016] 在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述皮膚裝置的背襯的周邊部分對(duì)濕皮膚具有粘附性 質(zhì)。
[0017] 在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，在借助于皮膚裝置給藥抗原之后誘導(dǎo)的全身免疫 應(yīng)答包括體液應(yīng)答。
[0018] 在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，在將所述皮膚裝置施用于皮膚之后在所述室內(nèi)形成濃縮 物，所述濃縮物引起或增加所述抗原的動(dòng)作和表皮遞送。特別地，該濃縮物可以通過出汗形 成。
[0019] 本發(fā)明的另一個(gè)目的涉及在對(duì)象中誘導(dǎo)抗蛋白質(zhì)抗原的全身免疫應(yīng)答的方法，其 中所述抗原為干形式或粒子形式。更特別地，所述抗原可以無需粘合劑地借助于靜電力和 /或范德華力附著于載體，或借助于載體上的粘合涂層附著于載體。
[0020] 所述抗原優(yōu)選可以借助于噴霧法/干燥法被施加于載體。所述抗原還可被溶解或 分散在液體中，在這種情況下，其被保持在所述載體上的吸附材料儲(chǔ)庫中。
[0021] 本發(fā)明的另一個(gè)目的涉及干形式的疫苗制劑在制備用于在哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)免疫 應(yīng)答的醫(yī)藥產(chǎn)品中的應(yīng)用，特征在于所述疫苗制劑在沒有任何佐劑化合物的條件下借助于 皮膚裝置被施用于哺乳動(dòng)物的未經(jīng)處理的皮膚上，歷時(shí)約48小時(shí)。
[0022] 本發(fā)明的另一個(gè)目的涉及干形式的疫苗制劑在哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的應(yīng)用， 特征在于所述疫苗制劑在沒有佐劑化合物的條件下借助于皮膚裝置被施用于哺乳動(dòng)物的 未經(jīng)處理的皮膚上，歷時(shí)約48小時(shí)。
[0023] 本發(fā)明的另一個(gè)目的涉及在哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法，該方法包括借助于 不含佐劑化合物的皮膚裝置向哺乳動(dòng)物的未經(jīng)處理的皮膚施用干形式的疫苗制劑，歷時(shí)約 48小時(shí)。
[0024] 本發(fā)明的另一個(gè)目的涉及皮膚裝置，其包括背襯，所述背襯的周邊部分適于與皮 膚形成密封室