、脂質(zhì)和/或糖類(lèi)類(lèi)型 或這些化合物的簡(jiǎn)單混合物或化學(xué)結(jié)合物的的抗原的制劑。一種優(yōu)選的疫苗制劑包含一種 或多種抗原分子；分子量超過(guò)500Da的分子，最通常是超過(guò)1，500Da并具有預(yù)防性或治療 性疫苗活性或意圖的多肽和蛋白質(zhì)，或分子量超過(guò)500Da并計(jì)劃用于局部（治療性）作用 于表皮的分子。一般地，所述疫苗制劑包含肽或多肽類(lèi)型的至少一種抗原。例如，其可以 是細(xì)菌抗原，病毒抗原，腫瘤抗原等，諸如流感病毒的抗原，肝炎病毒（/或丙型肝炎）的抗 原，流感嗜血桿菌（Haemophilus Influenzae)的抗原，呼吸道合胞病毒的抗原，沙門(mén)氏菌 (Salmonella)(志賀氏菌（Shigella))的抗原，或肺結(jié)核（Tiphy)的抗原，或自身免疫疾病、 癌、阿爾茨海默氏病、過(guò)敏癥等等的特征性抗原。所述疫苗制劑還可包含適于藥學(xué)應(yīng)用的賦 形劑或介質(zhì)，或任何具有免疫調(diào)節(jié)活性的化合物諸如細(xì)胞因子，Toll受體的配體化合物等 等。
[0047] 所述疫苗制劑以"干形式"使用，即，以脫水形式，特別是以粉末、顆粒、團(tuán)塊、餅、干 燥形式等施用。所述干形式可以通過(guò)冷凍干燥或由簡(jiǎn)單蒸發(fā)而獲得。
[0048] 在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述疫苗制劑為粉末形式。
[0049] 在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述疫苗制劑被保持在所述裝置的表面上，一般被保 持在所述隔室的背襯上，如果在該表面上沒(méi)有粘合材料時(shí)，通過(guò)化學(xué)力或物化力保持。所述 疫苗制劑優(yōu)選通過(guò)靜電力或通過(guò)范德華力被保持在所述裝置的表面上，一般被保持在所述 隔室的背襯上。
[0050] 在一個(gè)正常的實(shí)施方案中，所述裝置包含0· I yg/cm2到500 yg/cm2、優(yōu)選20yg到 300 μ g/cm2、進(jìn)一步優(yōu)選20 μ g到100 μ g/cm2的疫苗制劑量。要理解，該量可由本領(lǐng)域技術(shù) 人員相對(duì)于目的、病變、治療持續(xù)時(shí)間、對(duì)象等等進(jìn)行調(diào)整。
[0051] 本發(fā)明使得能夠誘導(dǎo)重要的免疫應(yīng)答，即使是在沒(méi)有佐劑和皮膚處理的條件下。 本發(fā)明可被用于抗任何類(lèi)型的病原體（病毒、寄生蟲(chóng)、細(xì)菌、蛋白質(zhì)等等）、抗腫瘤細(xì)胞或抗 自體抗原的預(yù)防性或治療性接種，或用于治療過(guò)敏性個(gè)體。給出的結(jié)果顯示了抗原特異性 應(yīng)答的誘導(dǎo)，特別是IgG類(lèi)型抗體的應(yīng)答。
[0052] 免疫應(yīng)答的幅度可以通過(guò)改變所述裝置的施用時(shí)間和/或通過(guò)進(jìn)行反復(fù)施用進(jìn) 行調(diào)適。如實(shí)施例所示的，在三次施用疫苗歷時(shí)僅6小時(shí)后誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答，與施用時(shí)間為 24小時(shí)所觀察到的免疫應(yīng)答相等（實(shí)施例2)。我們已顯示，例如，保持約6小時(shí)到24小時(shí) 時(shí)段的水合足以形成免疫應(yīng)答，即使沒(méi)有先前的皮膚處理和沒(méi)有佐劑的共同給藥。
[0053] 另外，我們還將施用時(shí)段延長(zhǎng)到48小時(shí)和72小時(shí)（實(shí)施例5)。獲得的結(jié)果顯示 出，48小時(shí)時(shí)間給出了令人驚訝的結(jié)果，因?yàn)榭贵w特異性應(yīng)答與24小時(shí)的施用時(shí)間相比增 加了幾乎一個(gè)量級(jí)。繼續(xù)施用超過(guò)48小時(shí)，例如72小時(shí)的施用時(shí)間，不再出現(xiàn)進(jìn)一步促 進(jìn)所述抗體應(yīng)答的增加。
[0054] 在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括對(duì)對(duì)象連續(xù)施用至少兩個(gè)裝置、優(yōu)選至少三 個(gè)裝置，每次施用間隔約7到30天，優(yōu)選間隔10到20天，一般間隔約15天。
[0055] 對(duì)于每次施用，優(yōu)選所述裝置被保持在皮膚上歷時(shí)約6到72小時(shí)、優(yōu)選約6到48 小時(shí)、更優(yōu)選約48小時(shí)的時(shí)段。
[0056] -個(gè)特別優(yōu)選的誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方案包括至少三次連續(xù)施用裝置歷時(shí)約48小 時(shí)，每次施用間隔約15天。
[0057] 在上文中，表述"約"是指與給定值相比有±10%的變化。
[0058] 本發(fā)明還表明，當(dāng)所述疫苗制劑是干形式并且被施用歷時(shí)一個(gè)或多個(gè)約48小時(shí) 的時(shí)段、優(yōu)選反復(fù)施用約48小時(shí)的時(shí)段時(shí)，通過(guò)在完好無(wú)損的皮膚上表皮接種獲得了主要 抗體應(yīng)答。
[0059] 本發(fā)明可用于在任何哺乳動(dòng)物中進(jìn)行抗任何抗原的接種。其可用在兒童或成人中 并且基本上是無(wú)創(chuàng)的，且不要求使用佐劑。
[0060] 本發(fā)明的其它方面和優(yōu)點(diǎn)將通過(guò)閱讀以下的實(shí)施例而變得顯而易見(jiàn)，所述實(shí)施例 被視為是示例性的而非限制性的。
【附圖說(shuō)明】
[0061] 圖1:A-具有冷凝隔室的皮膚裝置的示意圖：[1]生物相容材料環(huán)[2]通過(guò)雙面 粘合劑粘附于所述圓盤(pán)上的"背襯"圓盤(pán)，[3]在施用之前被剝離并保護(hù)粘合劑的剝離襯里。 B-在冷凝隔室內(nèi)的水蒸汽流動(dòng)示意圖。
[0062] 圖2:使用包括冷凝隔室的裝置，在沒(méi)有佐劑的共同給藥的條件下，在完好無(wú)損的 皮膚上經(jīng)由表皮途徑誘導(dǎo)抗原特異性抗體免疫應(yīng)答。
[0063] 圖3:包括冷凝隔室的裝置在施用于皮膚上6小時(shí)或24小時(shí)后，經(jīng)由表皮途徑誘 導(dǎo)抗卵清蛋白抗體免疫應(yīng)答。
[0064] 圖4:進(jìn)入所述隔室的水蒸汽的量與冷凝水的量之間的比率作為時(shí)間的函數(shù)： 在所述隔室內(nèi)積聚的水量，和?在所述隔室內(nèi)冷凝的水量。
[0065] β,在20小時(shí)之后在水蒸氣狀態(tài)下的水量。
[0066] _在20小時(shí)之后冷凝的水蒸氣的量。
[0067] 圖5:相對(duì)于包含冷凝隔室的裝置的施用時(shí)間，表皮的不同層（上層表皮、上層和 中層表皮、整個(gè)表皮）的水合百分率的增加。
[0068] 圖6:相對(duì)于包括冷凝隔室的裝置的施用時(shí)間，在皮膚表面上積聚的水量的增加。
[0069] 圖7:通過(guò)延長(zhǎng)具有冷凝隔室的裝置的皮膚施用時(shí)間，通過(guò)表皮途徑誘導(dǎo)的抗卵 清蛋白抗體免疫應(yīng)答的增強(qiáng)。
[0070] 圖8:在沒(méi)有任何佐劑或任何皮膚穿刺或磨損處理的條件下，通過(guò)與貼片類(lèi)型的 系統(tǒng)相比較，經(jīng)由表皮途徑誘導(dǎo)的強(qiáng)大的免疫原特異性抗體免疫應(yīng)答。
[0071] 圖9:在沒(méi)有任何佐劑的條件下，采用低劑量的抗原，經(jīng)由表皮途徑誘導(dǎo)的抗TT抗 體免疫應(yīng)答。
[0072] 圖10:與破壞皮膚穩(wěn)態(tài)有關(guān)的表皮的誘導(dǎo)變厚，其與具有冷凝隔室的裝置的皮膚 施用時(shí)間的延長(zhǎng)成比例。
[0073] 圖11:誘導(dǎo)抗原進(jìn)入皮膚以及其由樹(shù)突狀細(xì)胞進(jìn)行的處理，其與具有冷凝隔室的 裝置的皮膚施用時(shí)間的延長(zhǎng)成比例。
[0074] 圖12:表皮郎格罕氏細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)中所誘導(dǎo)的變化，與這些細(xì)胞的活化有關(guān)，其與具 有冷凝隔室的裝置的皮膚施用時(shí)間的延長(zhǎng)成比例。
[0075] 圖13:在將具有含腫瘤抗原的冷凝隔室的裝置施用于皮膚24小時(shí)之后，誘導(dǎo)產(chǎn)生 對(duì)腫瘤抗原特異的抗體，能夠在體外靶定表達(dá)該抗原的細(xì)胞。
[0076] 圖14:在將具有含RSV抗原的冷凝隔室的裝置施用于皮膚48小時(shí)之后，在幼年 小鼠中誘導(dǎo)的抗呼吸道合胞病毒（RSV)感染的部分防護(hù)。
【具體實(shí)施方式】
[0077] 實(shí)施例1
[0078] 包括冷凝隔室的皮膚裝置的制備
[0079] 使用涂有泡沫環(huán)從而賦予隔室以所需高度的聚乙烯薄膜（3M)作為背襯，環(huán)的兩 面制成粘合性，制備具有冷凝隔室的皮膚施用裝置（厚度=〇.7_)。該裝置因此具有在 Icm2皮膚上的布及面積和用于空氣擴(kuò)散通過(guò)皮膚的70mm 3的擴(kuò)張隔室（參見(jiàn)圖1A)。
[0080] 采用了幾種具有不同濕氣透過(guò)率（MVTRs)的聚合物，特別是CoTran K 9706 (MVTR = 26. 4g/m2/24h)，CoTmn* 9720 (MVTR = 9. 4g/m2/24h)和 CoTran? 9722 (MVTR =7. 9g/m2/24h) 〇
[0081] 實(shí)施例2
[0082] 在沒(méi)有任何佐劑化合物，也沒(méi)有任何穿刺或磨損皮膚處理的條件下，經(jīng)由表皮途 徑誘導(dǎo)抗原特異性抗體免疫應(yīng)答。
[0083] 根據(jù)實(shí)施例1制備了包括冷凝隔室的皮膚給藥裝置，但是其具有包含干形式的卵 清蛋白模型抗原（OVA)，破傷風(fēng)毒素（TT)，腫瘤抗原或市售的抗流行性感冒疫苗的IOmm 3/ cm2體積，將所述裝置施用于雌性BALB/c小鼠 （η = 6-10)的后背24小時(shí)，小鼠后背在施用 前一天經(jīng)過(guò)剃毛和脫毛。在首次施用之后第2和4周重新施用。通過(guò)對(duì)最后一次施用之后 2周取樣的動(dòng)物血清進(jìn)行ELISA，檢測(cè)抗-抗原總IgG類(lèi)型抗體。圖2給出的結(jié)果用抗原特 異性抗體滴度表示。對(duì)于每只動(dòng)物的血清，其是在450nm測(cè)量的吸光度等于對(duì)未試驗(yàn)過(guò)的 小鼠的血清測(cè)定截止值時(shí)的稀釋度的倒數(shù)。獲得的結(jié)果顯示了即使不使用佐劑，所誘導(dǎo)的 強(qiáng)抗原特異性免疫應(yīng)答。
[0084] 實(shí)施例3
[0085] 在沒(méi)有佐劑化合物的條件下，在施用于完好無(wú)損的皮膚6或24小時(shí)之后，經(jīng)由表 皮途徑誘導(dǎo)抗卵清蛋白抗體免疫應(yīng)答。
[0086] 根據(jù)實(shí)施例1制備包括冷凝隔室的皮膚給藥裝置，但是其具有包含干形式的 OVA(K)O μ g)的10mm3/cm2體積，將所述裝置施用于雌性BALB/c小鼠 （η = 10)的后背6或 24小時(shí)，小鼠后背在施用前一天經(jīng)過(guò)剃毛和脫毛。在首次施用之后2和4周重新施用。對(duì) 最后一次施用之后2周取樣的動(dòng)物血清使用ELISA，檢測(cè)抗-抗原總IgG類(lèi)型抗體。圖3中 示出的結(jié)果表示為抗原特