卵巢合成和/或分泌。Α)膳食補充WS以劑量依賴性方式增加血漿雌二醇。補充雌二醇的動物具有最高水平的血漿雌二醇。B)日內對照數(shù)據(jù)。將補充雌二醇組(較高)和未補充雌二醇組(較低)的ANOVA參數(shù)插入每幅圖中。在Tukey事后檢驗中，不共有共同字母的處理彼此具有顯著性差異(p〈0.05)。誤差線代表SEM0
[0042]圖6.在切除卵巢雌性大鼠中，膳食匪S未改變體重且未使子宮增重(uterotrophic) ο A)補充匪S組和對照膳食組之間無平均體重差異；與所有其它組相比，在整個實驗過程中，植入(implant)雌二醇的動物具有顯著降低的體重。B和C)當貫穿研宄或在研宄結束時檢驗時，作為原始重量百分比的重量變化在膳食處理組之間無差異，例外是植入雌二醇的動物。D)補充80天后，匪S未改變子宮重量；與切除卵巢對照和所有補充匪S的組相比，植入雌二醇的動物具有顯著較高的子宮重量。在適當情況下，通過重復測量ANOVA或單向ANOVA判定組之間的顯著性差異(p〈0.05)，隨后進行Tukey事后檢驗(***，P<0.0ODo當檢測到顯著的主效果時，將ANOVA參數(shù)插入每幅圖中。誤差線代表SEM。
[0043]圖7.膳食匪S未改變切除卵巢雌性大鼠中的情緒行為測量。A)在強迫游泳試驗(FST ;總試驗時間為600s)的第二階段期間，植入雌二醇的動物不動的時間較少(抗抑郁狀行為)。B)在FST的第二階段期間，攀爬時間在組之間無顯著差異。C)在開放場地(用于焦慮狀行為和運動的試驗)，在30分鐘的試驗期間，在場地(arena)中行進的總距離在組之間無差異。D)在高架十字迷宮中(用于焦慮狀行為的試驗)所有組中的總探索行為都低，且在開放臂花費的時間(鎮(zhèn)靜行為)在組之間無差異。通過單向ANOVA和隨后的Tukey’s事后檢驗(*，P<0.05)判定組之間的顯著性差異(p〈0.05)。當檢測到顯著的主效果時，將ANOVA參數(shù)插入各圖中。誤差線代表SEM。
[0044]圖8.用于評估來自碾磨的Zanthoxylum種子的膳食匪S-葡糖苷對絕經期動物模型中的熱潮紅和情緒相關行為的影響的隨訪研宄設計。如第一研宄(圖2)，使動物經受手術誘導的絕經期(卵巢切除術；0VX)。在該第二研宄中，飼喂一些動物重復2次劑量匪S的膳食，同時飼喂其它動物碾磨的Zanthoxylum種子以提供等效劑量的匪S-葡糖苷。然后，檢驗動物在開放場地的運動活性、在高架十字迷宮上的焦慮狀行為和在游泳試驗中的抑郁狀行為。然后利用靜脈內(1.v.)降鈣素基因相關肽(CGRP)誘導熱潮紅并監(jiān)測皮膚溫度。CGRP挑戰(zhàn)后2小時，收集組織。
[0045]圖9.來自碾磨的Zanthoxylum種子的膳食匪S-葡糖苷以類似于雌二醇和匪S的方式減弱了 CGRP誘導的熱潮紅反應。A)重復測量ANOVA檢測到:接受Zanthoxylum種子的動物具有降低的熱潮紅反應，其與未經處理的對照顯著不同，但等效于給予雌二醇或等效劑量的化學合成草酸匪S的動物。B)當利用單向ANOVA分析曲線下面積時，檢測到了對熱潮紅反應的類似效果。統(tǒng)計參數(shù)在圖中。誤差線代表平均數(shù)標準誤差(SEM)。在Tukey’ s事后檢驗中，不共有共同字母的處理彼此具有顯著性差異(P〈0.05)。
[0046]圖10.類似于第一研宄，隨訪研宄證明:Zanthoxylum種子和匪S未改變情緒行為測量。在A)開放場地(用于焦慮狀行為和運動的試驗)、B)高架十字迷宮(用于焦慮狀行為的試驗)或C)強迫游泳試驗(用于抑郁狀行為的試驗)中，未檢測到顯著處理效果。誤差線代表SEM。
[0047]圖11.來自Zanthoxylum種子的膳食匪S-葡糖苷未使切除卵巢雌性大鼠的子宮增重，但可已改變體重。A)類似于第一研宄，Zanthoxylum種子和匪S未改變子宮重量，但正如預期，接受雌二醇的動物具有比切除卵巢對照和所有其它組顯著更高的子宮重量。B)經過一段時間，作為原始重量百分比的重量變化在對照和補充辣椒組或補充匪S組之間存在差異。與所有其它組相比，在實驗過程中，植入雌二醇的動物具有顯著較低的體重。C)然而，如同第一研宄，當在研宄結束時檢驗時，作為原始重量百分比的總重量變化在膳食處理之間無差異，例外是植入雌二醇的動物。在適當情況下，通過重復測量ANOVA或單向ANOVA判定組之間的顯著性差異(p〈0.05)。在Tukey’s事后檢驗中，不共有共同字母的處理彼此具有顯著性差異(p〈0.05)。為了簡化的目的，將ANOVA參數(shù)從⑶和(C)中去除。誤差線代表SEM。
[0048]此處報告的研宄聚焦于膳食匪S和匪S-葡糖苷對絕經期動物模型中的熱潮紅反應和情緒相關行為的影響。如圖2和圖8中的研宄設計所示，使動物經受手術誘導的絕經期并飼喂含不同水平WS或WS-葡糖苷的膳食。我們檢驗了被補充動物在開放場地的運動活性、在高架十字迷宮上的焦慮狀行為和在游泳試驗中的抑郁狀行為。然后，我們實驗誘導了熱潮紅反應并監(jiān)測動物的皮膚溫度變化。這項工作的總體目標是為WS或WS-葡糖苷作為膳食補充劑用于絕經期女性，或經歷絕經期癥狀的圍絕經期或絕經后期階段的女性、或期望降低經歷所述癥狀的風險的女性提供支持數(shù)據(jù)。
[0049]匪S、匪S-葡糖苷或其它匪S前體的植物來源
[0050]可用作匪S、匪S-葡糖苷和/或其它匪S前體的來源的植物包括！Zanthoxylum物種，例如 Z.piperitum、Z.simulans、Z.bungeanum、Z.schinifolium、Z.nitidum、Z.rhetsa、Z.alatum、Z.acanthopodium 和 / 或 Z.americanum。優(yōu)選的來源是 Z.piperitum.。
[0051]此外，還已知柑橘類植物含有匪S前體，因此也可以使用Citrus bergamia(佛手柑)、梓檬、橙子、橘子(mandarin orange)、番石植蜜柑(chinotto)、香橡。柑橘類植物中的化合物可發(fā)現(xiàn)于葉子、皮、內果皮和種子中。
[0052]也可以使用Collema 屬的地衣，包括 C.cristatum、C.callopismum、C.flaccidum和 C.fuscovirens0
[0053]可通過簡單地擠壓、研磨或粉化來制備種子以供使用。可根據(jù)本領域眾所周知的方法制造提取物，例如，通過(an)利用溶劑(例如甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二乙醚、正己烷、二氯甲烷)，或利用超臨界流體(例如二氧化碳(純凈的或與其它溶劑例如醇混合)或氧化二氮提??；(b)水蒸餾以獲得精油；或(C)利用熱氣(例如氮氣)提取/蒸餾。
[0054]根據(jù)本發(fā)明的種子的攝取不同于僅僅作為香料或調味品(例如許多亞洲或受亞洲影響的(Asian-1nspired)食物菜肴中所使用的)的種子的攝取，因為本發(fā)明考慮在缺乏伴隨(accompanying)食物的情況下使用匪S-葡糖苷。因此，本發(fā)明明確排除與食物混合的WS-葡糖苷或WS-葡糖苷前體(例如在加香料的餐食或小吃中)的攝取。
[0055]劑量
[0056]成年人的每日劑量中需要存在的NMS “有效劑量”為至少5微克至225毫克、優(yōu)選地50微克至100毫克；更優(yōu)選地100微克至75毫克?；蛘撸行┝繛槊刻熘辽?、10、25、50、100、200、250、500、750、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000 或 4500 微克?；蛘撸隽繛槊刻熘辽?00微克，且優(yōu)選地更高。
[0057]對于日本辣椒種子，“有效劑量”為每天50-20000mg種子；優(yōu)選地每天約80-2500mg種子或更高。
[0058]對于匪S-葡糖苷，成年人的每日劑量中應該存在的“有效劑量”為至少5微克至225毫克、優(yōu)選地50微克至100毫克；更優(yōu)選地100微克至75毫克。或者，有效劑量為每天至少 5、10、25、50、100、200、250、500、750、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000或5500微克。或者，所述量為每天至少600微克，且優(yōu)選地更高。
[0059]對于其它WS-前體，有效量將被計算為產生有效量的WS (如上所述)所需前體的量。
[0060]可使用帶有質譜檢測的液相色譜證實WS和WS-葡糖苷的含量?？蓤?zhí)行類似于Yanase等人，2010中的提取方法。
[0061]可以單次劑量或可在一整天中以多次較小劑量(例如每天2次、每天3次)或以另一種方便的劑量方案攝取如前所述的活性成分的每日劑量。推薦定期消耗，即持續(xù)至少一周，優(yōu)選地持續(xù)至少一個月，更優(yōu)選地持續(xù)能夠被稱為“長期”的時間段，即長于一個月的持續(xù)時間。
[0062]制劑
[0063]根據(jù)本發(fā)明的膳食補充劑和營養(yǎng)品組合物可以是任何適于施用至人類的草本制劑(galenic)形式，尤其是任何通常用于經口施用的形式，例如，固體形式，例如片劑、丸劑、顆粒、糖衣丸、膠囊和泡騰制劑(例如粉末和片劑)，或液體形式，例如溶液、乳劑或懸浮液例如飲料、糊劑和油質懸浮液?？蓪⒑齽┓庋b在硬殼或軟殼膠囊中，其中所述膠囊的特點為:例如(魚、豬、家禽、奶牛)明膠、植物蛋白或木質磺酸鹽的基質。其它應用形式的實例是用于經皮、腸胃外或可注射施用的形式。膳食補充劑和營養(yǎng)品組合物的形式可以為控釋(緩釋)制劑。
[0064]根據(jù)本發(fā)明的膳食和營養(yǎng)品組合物還可含有保護性水膠體(例如樹膠、蛋白質、改性淀粉)、粘合劑、成膜劑、包封劑/材料、壁/殼材料、基質化合物、包衣、乳化劑、表面活化劑、增溶劑(油、脂肪、錯、卵磷脂等)、吸附劑、載劑、填充劑、共-化合物(co-compound)、分散劑、潤濕劑、加工助劑(溶劑)、流化劑、掩味劑、增重劑、成膠劑(jellyfying agent)、凝膠形成劑、抗氧化劑和抗微生物劑。
[0065]提供下列非限制性實施例以更好闡釋本發(fā)明。
實施例
[0066]方法
[0067]動物達到約60天齡，在整個研宄期間對其