射器、試管或多用途容器。在另一個實施方式中，目標肽組合物是凍干的。
[0090] 本文所述的療組合物單劑可含有至少或約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、 15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、 40、41、42、43、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、 66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、 91、92、93、94、95、96、97、98,99 或 100 各乘以 1、10、102、103、104、105、10 6、107、10s、109、IO10或 更多個細胞/公斤患者體重。在一些實施方式中，一個劑量包含約、至少或高于1-20、2-19、 3-18、4-17、5-16、6-15、7-14、8-13、9-12 或 10-11 各乘以 IO6個干細胞。
[0091] 在一些實施方式中，在發(fā)明組合物中添加匪II拮抗劑能夠允許臨床醫(yī)師給予患 者與不添加時用不含NM II拮抗劑的一群干細胞實現(xiàn)同樣療效所需劑量相比更低劑量的干 細胞。在一些實施方式中，在發(fā)明組合物中添加匪II拮抗劑讓臨床醫(yī)師能夠?qū)颊咛峁?與不添加時在一段確定時間內(nèi)實現(xiàn)相同療效所需劑量相比更少的干細胞，每劑量減少至少 或約 5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、90%或以上。
[0092] 本文公開了治療心血管疾病的方法和組合物；減少使用MSC治療心血管疾病時并 發(fā)癥的方法。另外，公開了包含細胞，NM II拮抗劑，藥學上可接受的運載體和可任選的合 適說明書的試劑盒。
[0093] 本發(fā)明還涉及一種降低用包含MSC的組合物治療的外周動脈病患者截肢率的方 法，包括在治療前使MSC接觸非肌肉肌球蛋白II拮抗劑。理想的，非肌肉肌球蛋白II拮抗 劑是布雷他汀。
[0094] 在一些實施方式中，治療方法一般可涉及在CVD例如PAD造成的損傷位點處或附 近肌肉內(nèi)注射一定劑量的用匪II拮抗劑，例如布雷他汀處理過的MSC組合物。這樣的注 射通常導致肢體功能、血流和缺血性癥狀改善。另外，在組合物中使用匪II拮抗劑，例如布 雷他汀顯著加速受損組織的MSC觸發(fā)的再生。另外，施用MSC和布雷他汀劇烈減少與PAD 和/或?qū)加蠵AD的患者移植MSC有關(guān)的并發(fā)癥。
[0095] 這些方法和試劑盒還可包括其他心血管藥物，或醫(yī)療裝置，例如支架（可以是或 不是藥物洗脫性的）。在另一個實施方式中，這樣的支架可裝載MSC，其在移植前或過程中 與匪II拮抗劑接觸。
[0096] 其他文獻：
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[0108] 實施例1-實驗律立
[0109] 本文公開的是在后肢外周缺血的小鼠模型中測試BM MSC。外周動脈疾?。≒AD)是 外周血管疾病（PVD)的一種形式，其中對肢體，通常是腿的血液供應被部分或完全阻斷，弓丨 起組織中血液流動受損和缺氧。當PAD發(fā)展，其達到重癥肢體缺血（CLI)的階段，伴有皮膚 潰瘍、壞疽和不可避免的截肢。糖尿病血管并發(fā)癥最有希望的創(chuàng)新治療之一是基于干細胞 的產(chǎn)品，其增強血管生成（TRef 1-3)。已用后肢缺血動物模型來評估各種致力于干細胞移植 的治療方法。
[0110] 根據(jù)國立衛(wèi)生研究院（NIH)和實驗動物評估和認證委員會（AAALAC)處理動物。 將動物養(yǎng)在尺寸為42. 5X265. 6 X 18. 5cm，具有不銹鋼頂架，以及丸狀食物投喂設施和裝 在玻璃狀透明的聚碳酸酯瓶內(nèi)的飲用水和寢具的聚砜（PSU)籠內(nèi)（每籠7-8只）：用蒸 汽消毒的清潔稻殼（Harlan，Sani-chip，批號#: 106S8216)，寢具材料和籠子一起至少一 周換兩次。用市售嗤齒動物飼料（Teklad Certified Global 18% Protein Diet批次 #:106S8216)自由投喂動物。動物可自由接觸來自城市供水系統(tǒng)的高壓滅菌和酸化的飲用 水（pH在2. 5-3. 5之間）。動物被安置在標準實驗室條件下，配有空調(diào)并提供充足的經(jīng)過 濾（HEPA6/6)新鮮空氣供應（最少每小時空氣交換15次）。動物置于溫度受控的環(huán)境下。 溫度范圍是20 - 24°C，且RH范圍是30-70%，12小時光照/避光循環(huán)。物種/品系：小鼠/ 無胸腺裸鼠；性別/數(shù)量/年齡：雄性/152/9-10周齡；來源：哈倫實驗室，以色列；體重： 在研究初始（第1天）平均體重為28. 4g。組中最小和最大重量在組平均重量的±20% 范圍內(nèi)；馴化期：5-10天；命名：三處耳部打孔，以及籠卡。未發(fā)現(xiàn)動物處于瀕死狀態(tài)，或顯 示有嚴重疼痛或具有嚴重壓力的狀態(tài)。手術(shù)日在該研究中被定為"第0日"。在手術(shù)日，用 I. 5-3. 0%異氟烷、I. 5%N2O和0? 5%O2進行麻醉。
[0111] 測試項目：人骨髓間充質(zhì)干細胞（隆薩科隆有限公司）。載體：DMEM+10%FCS，可 任選：IOyM布雷他汀（BB)。
[0112] 在麻醉狀態(tài)下，將小鼠背側(cè)向上放置。在腹股溝的皮膚上切開0. 5-1.Ocm的切口。 用6-0號絲線結(jié)縫合股動脈兩次，在縫線之間切斷。用4-0絲線閉合創(chuàng)口，讓小鼠恢復。
[0113] 在第1天，手術(shù)后24小時，每只動物在肌肉內(nèi)的兩個位點（手術(shù)創(chuàng)口的近端和遠 端側(cè)）注射，或在尾靜脈內(nèi)靜脈內(nèi)注射。對于肌肉內(nèi)注射，動物在每個位點注射50y1，每只 動物共注射100y1。對于靜脈內(nèi)注射，每只動物注射200y1。分組見表1。
[0114] 表1 :分組
[0115]
[0116] 在研究日-1，手術(shù)前和之后每周測量體重。
[0117] 血液流動測量：用非接觸激光多普勒在術(shù)前和手術(shù)后1、3、7、14、21、28和35日 測量兩側(cè)腿中的血流。血流測量值表示成缺血肢體與正常肢體之間流動的比例（Goto等， Tokai J Exp Clin Med.，31 卷，第 3 期，第 128-132, 2006)。一致地，在用 MSC_BB 處理的第 4組動物中顯示最佳再生（圖1)。
[0118] 缺血嚴重性的宏觀評估：手術(shù)后每周一次，用壞死區(qū)域的形態(tài)學級別來進行缺血 肢體的宏觀評估（Goto等）：參見表2。
[0119] 表2壞死區(qū)域的形態(tài)學級別
[0120]

[0121] 體內(nèi)評估肢體功能和缺血損傷。用以下評分表在術(shù)后一周一次對缺血肢體的受損 運用進行半定量評估（Stabile 等，Circulation. 2003 ;15 ;108(2) :205-210).參見表 3。
[0122] 表3肢體功能的評估
[0123]
[0124] 在部分或完全肢體截肢的情況下，肢體功能定級為"不適用"。此時，在統(tǒng)計學分析 中不包括血流測量值。
[0125] 肢體功能的體內(nèi)評估。用分級功能性評分表在第7到35日進行缺血肢體的受損 運用的半定量評估。自第14日起，在用細胞治療的第4組動物中，相對于用第1和2組對 照動物發(fā)現(xiàn)了改善的肢體功能（圖2A)。在缺血后第35日，在第3和5組動物中發(fā)現(xiàn)了這 種改善。在靜脈內(nèi)給予測試物的動物中，在第9組中相對于對照組6和7從第28日起發(fā)現(xiàn) 了肢體功能改善（圖2B)。
[0126] 實施例2-統(tǒng)計學分析
[0127] 該研究的目的是測試受測干細胞作為緩解動物裸鼠模型中HLI癥狀的可能性。
[0128] 研究終點為：臨床評