Ci、10Ci、4mCi、l. 5mCi、0. 6mCi。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)淋洗的68Ga 90%存在第 二第三管，尤其第二管占50%以上的淋洗6SGa。
[0064] (2) 68Ga 標(biāo)記方法：
[0065] 配制I. 25M的醋酸鈉：稱(chēng)取102. 5g醋酸鈉，加入雙蒸水定容到1000mL。
[0066] 取93 μ L I. 25M的醋酸鈉置于一個(gè)新的EP管（即Eppendorf離心管）中待用。
[0067] 將含有IOmci 68Ga淋洗液的EP管與93 μ L I. 25Μ NaAC (中文名稱(chēng)為醋酸鈉）混 合，然后加入10 μ g DOTA-TMVPr，混合后100°C加熱15min (如表1所示）。標(biāo)記完成后 自然冷卻至室溫，用毛細(xì)吸管點(diǎn)樣至快速薄層色譜層析板上，用甲醇與乙酸銨體積比為1:1 的混合溶液作為展開(kāi)劑，展開(kāi)完成后晾干放入r-counts (中文名稱(chēng)為薄層層析條帶掃描 儀，型號(hào)為AR-2000,產(chǎn)自Bioscan公司，美國(guó)）上檢測(cè)Rf值為1. 0,檢測(cè)的放射性化學(xué)純度 為90%。然后用0. 22 μ m的濾器濾除在淋洗68GeZ58Ga膠體柱時(shí)攜帶的放射性膠體。
[0068] 表1標(biāo)記反應(yīng)體系
[0070] 3.純化
[0071] 用IOmL無(wú)水乙醇激活Sep-pak C-18柱（美國(guó)waters公司，WAT054955)、激活 后IOmL生理鹽水清洗該柱殘余乙醇待用。取經(jīng)濾過(guò)的上述標(biāo)記產(chǎn)物68Ga-DOTA-TMVPl' 緩慢通過(guò)激活的S印-pakC-18柱，利用5mL的生理鹽水清洗殘液。用ImL無(wú)水乙醇洗脫68Ga-DOTA-TMVPr，為了保證收集的產(chǎn)物濃度高將洗脫溶液每6滴分別收集于一個(gè)I. 5mL 的EP管中，檢測(cè)每管中的放射性活度及放射性化學(xué)純度分別為0. 2mCi、ImCi、2. 5mCi、 ImCi、0. 6mCi。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)結(jié)果第三管占到總放射計(jì)量的50%以上。
[0072] 4.68Ga-DOTA-TMVPl'的質(zhì)量控制
[0073] HPLC和iTLC-SG (Bioscan公司，美國(guó)）分析68Ga-DOTA-TMVPl'的標(biāo)記效率及放射 性化學(xué)純度，檢測(cè)的標(biāo)記效率為>99 %，放射性化學(xué)純度為95 %。
[0074] HPLC的參數(shù)及條件如下表所示。iTLC-SG采用的展開(kāi)體系按照甲醇：0.1 M醋酸銨 =l:l(v/V)配制。
[0075] HPLC的參數(shù)見(jiàn)表2, RP-HPLC流動(dòng)相的A液為乙腈，B液為磷酸鹽平衡液。
[0076] 表2 HPLC的參數(shù)
CN 105126128 A 說(shuō)明書(shū) 7/10 頁(yè)
[0078] 實(shí)施例2體外穩(wěn)定性試驗(yàn)：
[0079] 取37MBq實(shí)施例1制備的68Ga-DOTA-TMVPP分別置于半胱氨酸、生理鹽水和正常 血清（指非腫瘤患者的血清）中，并分別在37°C孵育30分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)和3小時(shí)后，然 后使用HPLC和iTLC-SG測(cè)定不同樣品的不同孵育時(shí)間的放射性化學(xué)純度（RCP)。
[0080] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：圖1為利用HPLC檢測(cè)68Ga-DOTA-TMVP P在生理鹽水中的穩(wěn)定性 的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，HPLC檢測(cè)68Ga-DOTA-TMVPP在生理鹽水的殘留時(shí)間為10. 6min ;圖2為68Ga-DOTA-TMVPr的體外穩(wěn)定性的驗(yàn)證結(jié)果，經(jīng)HPLC及iTLC-SG檢測(cè)68Ga-DOTA-TMVPr 在生理鹽水中、半胱氨酸和正常血清中穩(wěn)定性較好，三個(gè)半衰期后分別仍達(dá)到92%。
[0081] 實(shí)施例3腫瘤模型的建立和PET顯像
[0082] 1、建立宮頸癌皮下瘤模型：
[0083] (1)細(xì)胞培養(yǎng)
[0084] 宮頸癌細(xì)胞系C-33A、HeLa和SiHa(購(gòu)自美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù)）用含有體積分?jǐn)?shù)10% 的血清的DMEM培養(yǎng)基（Gibco, ThermoFish公司，美國(guó)）培養(yǎng)，（37°C，5% 0)2培養(yǎng)箱培養(yǎng)）， 待細(xì)胞融合度達(dá)到80%時(shí)用胰酶溶液（含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 25%的胰酶和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 1% 的EDTA)消化，用DMEM培養(yǎng)基終止消化后，800rpm離心5分鐘，去上清，用磷酸鹽緩沖液 PBS (pH為7. 4)重懸，再次800rpm離心5分鐘，用PBS (pH為7. 4)重懸后，細(xì)胞計(jì)數(shù)，結(jié)果為 I X l〇7mL。（因?yàn)镻BS為本領(lǐng)域常規(guī)的磷酸鹽緩沖液，所以配方并未詳細(xì)列出。）
[0085] (2)皮下瘤模型
[0086] 取3-4周的BALB/c-nude小鼠，BALB/c-nude小鼠均購(gòu)自北京華阜康生物科技股份 有限公司。選擇15只小鼠，將這15只小鼠的每只小鼠的腋窩脂肪墊處分別接種5X IO6個(gè) C-33A細(xì)胞；另外選擇5只小鼠，將這5只小鼠的每只小鼠的腋窩脂肪墊處分別接種3X IO6個(gè)HeLa細(xì)胞。21-28天后待皮下瘤長(zhǎng)到1-1. 5cm2時(shí)，得到荷瘤小鼠，用于下面步驟的PET 顯像。
[0087] 2、PET 顯像
[0088] 按照本發(fā)明實(shí)施例1制備方法合成純化68Ga-DOTA-TMVPr，將18. 5MBq該 藥物68Ga-DOTA-TMVPP通過(guò)尾靜脈注射入荷瘤小鼠 （η = 5)中，異氟烷氣體持續(xù)麻 醉后分別于30分鐘、60分鐘、90分鐘和120分鐘對(duì)荷瘤小鼠進(jìn)行microPET顯像（靜 態(tài)采集10分鐘）。進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合實(shí)驗(yàn)使，將300 yg的D0TA-TMVP"與放射性藥物68Ga-DOTA-TMVPP (18. 5MBq)從尾靜脈同時(shí)注射入一只小鼠 （η = 3)體內(nèi)，于1小時(shí)對(duì)小 鼠進(jìn)行microPET顯像。
[0089] 為確認(rèn)荷瘤鼠的腫瘤生長(zhǎng)狀況，將37KBq的18F-FDG (北京協(xié)和醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科制備， 制備方法參照Irie T etc. al，1982, Radioisotopes，PMID:7071382)通過(guò)尾靜脈注入已經(jīng) 注射了實(shí)施例1所述的方法合成的68Ga-DOTA-TMVPP并進(jìn)行microPET顯像過(guò)后24h的瘤 鼠體內(nèi)，于60min進(jìn)行microPET。
[0090] PET顯像實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
[0091] 圖3為尾靜脈注射68Ga-DOTA-TMVPP后不同時(shí)間點(diǎn)的C-33A腫瘤模型的 microPET顯像結(jié)果；圖4為C-33A荷瘤鼠的68Ga-DOTA-TMVPP的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合顯像結(jié)果；圖 5為C-33A和HeLa荷瘤鼠的68Ga-DOTA-TMVPP與18F-FDG顯像對(duì)比結(jié)果。
[0092] l)30min即可出現(xiàn)腫瘤顯像。但隨著68Ga-DOTA-TMVPP注射的時(shí)間延長(zhǎng)，腫瘤部 位的顯像出現(xiàn)先高后低的變化，而肝臟、血液的攝取卻持續(xù)性降低。
[0093] 2)300 yg 的 D0TA-TMVP1'與顯像劑 68Ga-DOTA-TMVPl'同時(shí)注射入 C-33A 荷瘤小 鼠內(nèi)后，競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合組小鼠的腫瘤攝取明顯較未同時(shí)注射組的小鼠的腫瘤攝取低。提示該 顯像劑能被腫瘤特異性攝取。3)經(jīng)18F-FDG確認(rèn)腫瘤的活性狀態(tài)及68Ga-DOTA-TMVPP對(duì)宮 頸癌模型C-33A、Hela顯像，可得到6sGa-DOTA-TMVP^對(duì)腫瘤的顯像是通過(guò)與受體的結(jié)合 而非滲漏。
[0094] 實(shí)施例4體內(nèi)分布試驗(yàn)
[0095] (1)實(shí)施例1合成的68Ga-DOTA-TMVPP用無(wú)菌生理鹽水稀釋成 1850KBq(50 yCi)/100 yL。
[0096] (2)將15只C-33A荷瘤鼠隨機(jī)分成5個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組3只；其中4組為實(shí)驗(yàn)組分 另I油尾靜脈注射100 μ L步驟⑴稀釋后的藥品，另外一組作為競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合實(shí)驗(yàn)組，在注射 步驟⑴稀釋的藥品前IOmin由尾靜脈注射300 μ g冷的TMVPP。另取100 μ L稀釋后的 步驟（1)樣品用IOOmL的水稀釋?zhuān)靹蚝髲闹腥mL作為標(biāo)準(zhǔn)品。
[0097] (3)實(shí)驗(yàn)組注射 68Ga-DOTA-TMVPl'后分別于 10min，30min，60min 和 120min 頸椎 離斷處死荷瘤小鼠，然后解剖取出心肝脾肺腎和