一種總蟾毒內(nèi)脂plga納米微球凍干制劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及凍干制劑，尤其涉及總蟾毒內(nèi)酯PLGA納米微球凍干制劑，本發(fā)明還涉及所述總蟾毒內(nèi)酯PLGA納米微球凍干制劑的制備方法，屬于PLGA納米微球凍干制劑及其制備領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]取自中藥中華大蟾蜍皮部的華蟾素能解毒，消腫，止痛。適用于中、晚期腫瘤，慢性乙型肝炎等的治療。但經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，華蟾素注射液中具抗腫瘤活性的總蟾毒內(nèi)酯類(蟾毒配基類、蟾蜍毒素類)成分含量極低，主要為水溶性吲哚類生物堿(如5-羥色胺、蟾蜍色胺、蟾蜍特尼、蟾蜍硫黃等)類、氨基酸等成分，而大量的內(nèi)酯類有效成分損失殆盡，目前尚未有生物堿成分有抗腫瘤活性的研究報道，且臨床研究認為華蟾素不良反應(yīng)心律失常、局部靜脈刺激反應(yīng)、皮膚反應(yīng)、哮喘、超敏反應(yīng)等均為水溶性吲哚類生物堿成分的藥理作用所致。綜上，華蟾素存在有效成分含量低，雜質(zhì)多，質(zhì)量及臨床療效不穩(wěn)定、毒副作用大等嚴重缺陷，因此，富集發(fā)揮抗腫瘤活性的內(nèi)酯類成分、去除生物堿及其他雜質(zhì)成了我們研究的重心。
[0003]對華蟾素提取液進行分離純化，得華蟾素有效部位一一總蟾毒內(nèi)酯，主要含有蟾毒配基(resibufogenin)、華蟾醉毒基(cinobufagin)、蟾毒靈(bufalin)、蟾毒它靈(Bufotalin)、日蟾毒它靈-3-半辛二酸酯(Gamabufotalin-3-hydrogen Suberate)、蟾餘靈-3- 丁二酰精氨酸酯、華蟾毒精-3- 丁二酰精氨酸酯等內(nèi)酯類成分。針對市場上中藥注射液普遍存在的諸多問題，開發(fā)出工藝先進、質(zhì)量穩(wěn)定、療效高、毒副作用少的中藥注射制劑是十分必要的，鑒于總蟾毒內(nèi)酯具有獨特的技術(shù)優(yōu)勢，我們對華蟾素注射液進行二次深度開發(fā)，研制了總蟾毒內(nèi)酯凍干制劑一一 “注射用華蟾內(nèi)酯”。
[0004]PLGA具有良好的生物相容性、緩釋特性、可降解性，已被廣泛用于微球的制備，該微球體系具有保護藥物免遭破壞，靶向藥物到某些特殊組織，延緩/控制藥物釋放，延長藥物作用時間，降低藥物毒性和刺激性等優(yōu)點。FDA批準用作藥物載體的材料，使其成為一種正在被廣泛應(yīng)用的抗腫瘤藥物的載體，較傳統(tǒng)化療制劑相比具有抗腫瘤新生血管生成等多方面優(yōu)勢。并且我們可以根據(jù)臨床需求具體調(diào)整合適的粒徑，利用靜脈注射、間質(zhì)給藥、口服給藥等多種方式。
[0005]納米微球(nanospheres, NSs)是20世紀70年代興起的一種新型的給藥系統(tǒng)，它是利用適宜的天然或者合成的高分子材料將載體包裹或者藥物吸附而形成的球形或者是類球形的微粒。納米微球制劑的主要優(yōu)點:(I)解決口服水解藥物的給藥途徑。(2)選擇適宜的載體材料并優(yōu)化制備工藝，可實現(xiàn)藥物在體內(nèi)幾周或幾個月緩慢釋放，減少或者給藥次數(shù)。(3)實現(xiàn)靶向給藥，如微球修飾，藥物作用于靶部位。(4)提高難溶性藥物的溶解度和溶出度，發(fā)揮緩釋作用。(5)納米微球以一定速率釋放，以維持有效血藥濃度微球可以包載很多種藥物，如化學(xué)類藥物、蛋白類藥物、多肽、DNA、RNA、天然藥物，而且微球可以使幫助藥物實現(xiàn)給藥方式的多元化，可以通過口服、肺部、鼻腔給藥。因此納米微球是一種非常有前景的載體形式，值得我們進一步的研究與推廣。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種總蟾毒內(nèi)酯PLGA納米微球；
[0007]本發(fā)明所要解決的另一個技術(shù)問題是提供一種總蟾毒內(nèi)酯PLGA納米微球凍干制劑；
[0008]本發(fā)明所要解決的另一個技術(shù)問題是提供一種總蟾毒內(nèi)酯PLGA納米微球及總蟾毒內(nèi)酯PLGA納米微球凍干制劑的制備方法。
[0009]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是:
[0010]本發(fā)明首先公開了一種總蟾毒內(nèi)酯PLGA納米微球，包括以下各組分:總蟾毒內(nèi)酯、PLGA、凍干保護劑。
[0011]各組分的重量為:總蟾毒內(nèi)酯I?5份，PLGA 5?50份，凍干保護劑0.5-5份
[0012]優(yōu)選的，各組分的重量為:總蟾毒內(nèi)酯I份，PLGA 10份，凍干保護劑0.5份。
[0013]其中，所述高分子聚合物PLGA的分子量為0.5-50000，其乳酸:羥基乙酸單體的摩爾比例為75:25、50:50、25:75中的一種或者幾種材料混合。
[0014]本發(fā)明還公開了一種所述總蟾毒內(nèi)酯PLGA納米微球的制備方法，包括以下步驟:
[0015](I)按照所述配比稱取各組分，將總蟾毒內(nèi)酯、PLGA加入有機溶劑中，作為分散相；
[0016](2) F68水溶液為連續(xù)相；
[0017](3)超聲環(huán)境下將分散相緩慢注入連續(xù)相中，形成0/W乳劑，
[0018](4)隨即轉(zhuǎn)移至磁力攪拌器上攪拌，使有機溶劑充分揮發(fā)后，冰浴條件下攪拌得納米微球溶液，離心處理，即得總蟾毒內(nèi)脂PLGA納米微球。
[0019](5)將總蟾毒內(nèi)脂PLGA納米微球加入F68水中，加入凍干保護劑，冷凍干燥得到總蟾毒內(nèi)酯PLGA納米微球凍干制劑。
[0020]其中，步驟⑴所述有機溶劑選自二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮或無水乙醇中任意一種或兩種以上按照任意比例組成的混合物；優(yōu)選為二氯甲烷和乙酸乙酯按照任意比例組成的混合物；最優(yōu)選為，二氯甲烷和乙酸乙酯按照體積比1:1組成的混合物；
[0021]步驟(4)的溶劑揮發(fā)過程中的攪拌速率為300?15000rpm，溫度控制在4°C?40°C，溶劑揮發(fā)采用室溫蒸發(fā)；冰浴條件下攪拌得到納米微球溶液后，離心，離心速度為3000 ?12000rpm。
[0022]步驟(5)凍干保護劑選自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇、氯化鈉、乳糖、山梨醇、木糖醇、葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、右旋糖酐、甘油或甘氨酸的任意一種或兩種以上按照任意比例組成的混合物
[0023]本發(fā)明所制備的總蟾毒內(nèi)酯PLGA納米微球粒徑為150-210nm，包封率為50% -90%。
[0024]本發(fā)明中所述高分子聚合物PLGA不同分子量、其乳酸:羥基乙酸單體的不同摩爾比、有機溶劑的不同種類及其不同用量對總蟾毒內(nèi)酯PLGA納米微球平均粒徑、包封率起重要影響作用。其中，高分子聚合物PLGA分子量40000，其乳酸:羥基乙酸單體的摩爾比75:25、有機溶劑為二氯甲烷和乙酸乙酯1:1所制得的總蟾毒內(nèi)酯PLGA納米微球平均粒徑為168.5nm，包封率為89.8%，質(zhì)量評價最好。因為，總蟾毒內(nèi)酯PLGA納米微球的粒徑越小，其制得的凍干粉制劑藥物的靶向性越好；單位投藥量包封率越大，其可作用于腫瘤細胞的藥量越大，效果越好。
[0025]本發(fā)明技術(shù)方案與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下有益效果:
[0026]1.使用本方法制備的一種總蟾毒內(nèi)脂PLGA納米微球在保證總蟾毒內(nèi)脂穩(wěn)定性的條件下具有較高的包封率，可以保持體內(nèi)最佳的藥物濃度，并且延長藥物作用的時間。因此，可實現(xiàn)藥物的緩釋、靶向給藥，具有重要的理論價值和實際應(yīng)用前景。
[0027]2.該制備方法具有工藝簡便、制備成本低、工藝重現(xiàn)性好、樣品需要量少，試驗篩選的處方和工藝也可放大到生產(chǎn)應(yīng)用，因而對產(chǎn)業(yè)化的應(yīng)用具有指導(dǎo)意義。
【具體實施方式】
[0028]下面結(jié)合具體實施例來進一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述而更為清楚。但是應(yīng)理解所述實施例僅是范例性的，不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細節(jié)和形式進行修改或替換，但這些修改或替換均落入本發(fā)明的保護范圍。
[0029]實施例1總蟾毒內(nèi)酯PLGA納米微球的制備
[0030]將2mg總蟾毒內(nèi)酯、20mgPLGA(高分子聚合物PLGA分子量40000，其乳酸:輕基乙酸單體的摩爾比75:25)溶于2mL 二氯甲烷和乙酸乙酯(體積比1:1)混合溶液中，作為分散相(油相)，F(xiàn)68水溶液為連續(xù)相(水相)，在800rpm室溫攪拌下將