治療和預防癌癥藥物抗性的方法
【專利說明】治療和預防癌癥藥物抗性的方法
[0001] 對相關(guān)申請的交叉引用
[0002] 本申請要求2013年3月6日提交的美國專利申請No. 61/773,720的優(yōu)先權(quán)，通過 提述將其完整收錄。 發(fā)明領(lǐng)域
[0003] 本文中提供使用FGFR信號傳導的拮抗劑治療病理疾患（諸如癌癥）的組合療法。
[0004] 發(fā)明背景
[0005] 相對快速獲得對癌癥藥物的抗性仍然是成功癌癥療法的一項關(guān)鍵障礙。闡明此類 藥物抗性的分子基礎(chǔ)的巨大努力已揭示了多種機制，包括藥物外流、靶物的藥物結(jié)合缺陷 突變體的獲得、備選存活途徑的卷入、后生改變。用EGFR酪氨酸激酶抑制劑治療包含活化 性EGFR突變的NSCLC患者導致對療法的抗腫瘤應答，然而患者最終由于獲得藥物抗性而在 治療的情況下進展。已知的抗性機制包括EGFR基因中的繼發(fā)突變（EGFR??)或MET基因 擴增，然而在約40-45%的案例中根本的抗性機制仍然有待闡明。需要新的治療方法來成功 解決癌癥細胞群體內(nèi)的異質(zhì)性和癌細胞對藥物治療的抗性的出現(xiàn)。
[0006] 發(fā)明概述
[0007] 本文中提供使用FGFR信號傳導的拮抗劑和EGFR拮抗劑的組合療法。
[0008] 特別地，本文中提供在個體中治療癌癥的方法，其包括對該個體伴隨施用（a)FGFR 信號傳導的拮抗劑和（b)EGFR拮抗劑。在一些實施方案中，所述FGFR信號傳導的拮抗劑和 所述EGFR拮抗劑各自的量有效延長癌癥敏感性的時段和/或延遲癌癥形成對所述EGFR拮 抗劑的抗性。在一些實施方案中，所述FGFR信號傳導的拮抗劑和所述EGFR拮抗劑各自的 量有效提高包含EGFR拮抗劑的癌癥治療的功效。例如，在一些實施方案中，與包括在沒有 所述FGFR信號傳導的拮抗劑的情況下（在所述FGFR信號傳導的拮抗劑缺失下）施用有效 量的所述EGFR拮抗劑的標準治療相比，所述FGFR信號傳導的拮抗劑和所述EGFR拮抗劑各 自的量有效提高功效。在一些實施方案中，與包括在沒有所述FGFR信號傳導的拮抗劑的情 況下（在所述FGFR信號傳導的拮抗劑缺失下）施用有效量的所述EGFR拮抗劑的標準治療 相比，所述FGFR信號傳導的拮抗劑和所述EGFR拮抗劑各自的量有效提高響應（例如完全 響應）。在一些實施方案中，所述FGFR信號傳導的拮抗劑和所述EGFR拮抗劑各自的量有效 提高和/或恢復癌癥對所述EGFR拮抗劑的敏感性。
[0009] 本文中還提供在個體中治療對EGFR拮抗劑治療有抗性的癌細胞的方法，其包括 對該個體施用有效量的FGFR信號傳導的拮抗劑和有效量的所述EGFR拮抗劑。另外，本文 中提供在個體中治療對EGFR拮抗劑有抗性的癌癥的方法，其包括對該個體施用有效量的 FGFR信號傳導的拮抗劑和有效量的所述EGFR拮抗劑。
[0010] 本文中提供提高和/或恢復對EGFR拮抗劑的敏感性的方法，其包括對該個體施用 有效量的FGFR信號傳導的拮抗劑和有效量的所述EGFR拮抗劑。
[0011] 本文中還提供在個體中提高包含EGFR拮抗劑的癌癥治療的功效的方法，其包括 對該個體伴隨施用（a)有效量的FGFR信號傳導的拮抗劑和（b)有效量的所述EGFR拮抗劑。
[0012] 本文中提供在個體中治療癌癥的方法，其包括對該個體伴隨施用（a)有效量的 FGFR信號傳導的拮抗劑和（b)有效量的EGFR拮抗劑，其中所述癌癥治療具有與包含在沒有 所述FGFR信號傳導的拮抗劑的情況下（在所述FGFR信號傳導的拮抗劑缺失下）施用有效 量的所述EGFR詰抗劑的標準治療相比升高的功效。
[0013] 另外，本文中提供在個體中延遲和/或阻止癌癥形成對EGFR拮抗劑的抗性，其包 括對該個體伴隨施用（a)有效量的FGFR信號傳導的拮抗劑和（b)有效量的所述EGFR。
[0014] 本文中提供治療形成對EGFR拮抗劑的抗性的可能性升高的具有癌癥的個體的方 法，其包括對該個體伴隨施用（a)有效量的FGFR信號傳導的拮抗劑和（b)有效量的所述 EGFR拮抗劑。
[0015] 本文中進一步提供在具有癌癥的個體中提高對EGFR拮抗劑的敏感性的方法，其 包括對該個體伴隨施用（a)有效量的FGFR信號傳導的拮抗劑和（b)有效量的所述EGFR拮 抗劑。
[0016] 本文中還提供在具有癌癥的個體中延長EGFR拮抗劑敏感性的時段的方法，其包 括對該個體伴隨施用（a)有效量的FGFR信號傳導的拮抗劑和（b)有效量的所述EGFR拮抗 劑。
[0017] 本文中提供在具有癌癥的個體中延長對EGFR拮抗劑的響應的持續(xù)時間的方法， 其包括對該個體伴隨施用（a)有效量的FGFR信號傳導的拮抗劑和（b)有效量的所述EGFR 拮抗劑。
[0018] 在任何所述方法的一些實施方案中，所述FGFR信號傳導的拮抗劑是抗體抑制劑、 小分子抑制劑、結(jié)合多肽抑制劑、和/或多核苷酸拮抗劑。在一些實施方案中，所述FGFR信 號傳導的拮抗劑是結(jié)合多肽抑制劑。在一些實施方案中，所述結(jié)合多肽抑制劑包含與Fc域 連接的FGFR胞外域的一個區(qū)域（例如與免疫球蛋白鉸鏈和Fc域連接的FGFR胞外域的一 個區(qū)域）。在一些實施方案中，所述FGFR信號傳導的拮抗劑是FGFR1信號傳導的拮抗劑。 在一些實施方案中，所述FGFR信號傳導的拮抗劑是FGFR2信號傳導的拮抗劑。在一些實施 方案中，所述FGFR信號傳導的拮抗劑是FGFR3信號傳導的拮抗劑。在一些實施方案中，所 述FGFR信號傳導的拮抗劑是FGFR4信號傳導的拮抗劑。在一些實施方案中，所述FGFR信 號傳導的拮抗劑是小分子。在一些實施方案中，所述FGFR信號傳導的拮抗劑是抗體。
[0019] 在一些實施方案中，所述FGFR1信號傳導的拮抗劑結(jié)合和/或抑制FGFRlb、 FGFRlc、FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、和 FGF10 中一項或多項。在一些實施方案 中，所述小分子是^[2-[[4-(二乙基氨基）丁基]氨基]-6-(3,5-二甲氧基苯基）吡啶 并[2, 3_d]啼啶-7-基]-Ν'-(1，1-二甲基乙基）-脲（N-[2-[[4_(diethylamino)butyl] amino]-6-(3, 5-dimethoxyphenyl)pyrido[2, 3-d]pyrimidin-7-yl]-N' -(1, 1-dimethyle thyl)-urea)或其藥學可接受鹽。在一些實施方案中，所述小分子是BGJ398 (Novartis)、 AZD4547 (AstraZeneca)、和 / 或 FF284 (Chugai/Debiopharm (Debio 1347))。在一些實施 方案中，所述FGFR1信號傳導的拮抗劑是抗FGF2抗體。在一些實施方案中，所述FGFR1信 號傳導的拮抗劑是抗FGFR1抗體。在一些實施方案中，所述FGFR1信號傳導的拮抗劑是抗 FGFRl-IIIb抗體。在一些實施方案中，所述FGFR1信號傳導的拮抗劑是抗FGFRl-IIIc抗 體。在一些實施方案中，所述FGFR信號傳導的拮抗劑是能夠結(jié)合超過一種FGFR多肽的抗 FGFR抗體。
[0020] 在任何所述方法的一些實施方案中，所述EGFR拮抗劑是N-(3-乙炔基苯 基）-6, 7_ 二（2_ 甲氧基乙氧基）_4_ 喹唑啉胺（N-(3-ethynylphenyl) _6, 7_bis (2-methoxy ethoxy)-4_quinazolinamine)和/或其藥學可接受鹽。在一些實施方案中，所述EGFR詰抗 劑是N-(3-乙炔基苯基）-6, 7-二（2-甲氧基乙氧基）-4-喹唑啉胺。在任何所述方法的一 些實施方案中，所述EGFR拮抗劑是N- (3-氯-4-氟-苯基）-7-甲氧基-6- (3-嗎啉-4-基 丙氧基）喹唑啉 _4_ 胺（N-(3-chlor〇-4-fluor〇-phenyl)-7-methoxy-6-(3-morpholin-4- ylpropoxy)quinazolin-4-amine)和/或其藥學可接受鹽。在一些實施方案中，所述EGFR 拮抗劑是N- (3-氯-4-氟-苯基）-7-甲氧基-6- (3-嗎啉-4-基丙氧基）喹唑啉-4-胺。
[0021] 在任何所述方法的一些實施方案中，所述癌癥是肺癌。在一些實施方案中，所述肺 癌是NSCLC。在一些實施方案中，所述癌癥已經(jīng)經(jīng)歷上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)變。
[0022] 附圖簡述
[0023] 圖1A-C。|HCC4006-ER細胞對厄洛替尼有抗性。A，在所示濃度的厄洛替尼存在 下72小時時測定親本（HCC4006)和厄洛替尼選擇的HCC4006細胞（HCC4006-ER)的細胞存 活力。B，將HCC4006和HCC4006-ER細胞用或不用ΙμΜ厄洛替尼處理72小時，用碘化丙 啶（ΡΙ)和膜聯(lián)蛋白V染色，并通過FACS分析以定量膜聯(lián)蛋白陽性細胞。C，將HCC4006和 HCC4006-ER細胞用所示濃度的厄洛替尼處理8小時，并用所示抗體對細胞裂解物進行免疫 印跡。
[0024] 圖2A-D。| HCC4006-ER細胞展現(xiàn)EMT的特征。A，將親本和厄洛替尼抗性HCC4006 細胞裂解物對上皮相關(guān)蛋白質(zhì)和間充質(zhì)相關(guān)蛋白質(zhì)（分別是E-鈣粘著蛋白和波形蛋 白）進行免疫印跡。B，在抓傷測定法中測量HCC4006和HCC4006-ER細胞的迀移率，并通 過Imaginon Incucyte監(jiān)測傷口閉合。C，在1%或10%胎牛血清$133)存在下在透孔 (transwell)測定法中測量細胞侵入。D，在所示時間點測量HCC4006和HCC4006-ER細胞的 細胞存活力。
[0025] 圖3A-C。|在HCC4006-ER細胞中AXL抑制不能克服對厄洛替尼的抗性。A，在所 示濃度的AXL激酶抑制劑R428和/或厄洛替尼存在下培養(yǎng)72小時后，測量親本和厄洛替 尼抗性HCC4006細胞的細胞存活力。B，在siRNA介導的AXL敲低或?qū)φ誷iRNA之后，在所 示濃度的厄洛替尼存在下測量厄洛替尼抗性HCC4006-ER細胞的細胞存活力。C，免疫印跡 對照，演示靶向AXL的siRNA對AXL表達水平的影響。
[0026] 圖4A-C。| FGFR1和特定FGF配體在HCC4006-ER細胞中顯著升高。A，與HCC4006 細胞相比，HCC4006-ER中FGF家族受體和配體的基因表達的倍數(shù)變化（log)，基于微陣列序 型分析。B，qRT-PCR對選定基因的確認。C，F(xiàn)GF2蛋白質(zhì)水平在HCC4006-ER細胞的上清液 和裂解物中均升高，通過ELISA檢測。
[0027] 圖5A-C。|在HCC4006-ER細胞中對配體依賴性FGFR信號傳導的特異性抑制 克服對厄洛替尼的抗性。A，在所示濃度的厄洛替尼或TO173074存在下72小時時測定 HCC4006 (左）和HCC4006-ER (右）細胞中的細胞存活力。B，將HCC4006和HCC4006-ER細 胞用所示藥物處理2小時，并用所示抗體對細胞裂解物進行免疫印跡。用外源FGF2+肝素 刺激細胞充當FGFR激活的陽性對照。C，在重組可溶性FGFR-Fc (用于中和FGF配體）和對 照存在下處理72小時后HCC4006和HCC4006-ER細胞中的細胞存活力。
[0028] 圖6。|在HCC4006細胞中FGFR抑制阻抑形成對厄洛替尼的抗性。用厄洛替尼 (1 yM)、PD173074(0. 5 μΜ)或組合連續(xù)處理細胞（lxio5個），之后固定并用結(jié)晶紫染色。未 處理的和HH73074處理的培養(yǎng)物在4周時染色，而厄洛替尼和組合處理的培養(yǎng)物在6周時 染色。
[0029] 圖7A-B。|FGFR而非AXL抑制使另一種與EMT有關(guān)的厄洛替尼抗性模型HCC827-ER 對EGFR抑制的存活效應部分再敏化。A，在所示濃度的厄洛替尼、R428、或TO173074存在下 72小時時測定HCC827-ER細胞中的細胞存活力。B，在重組可溶性FGFR-Fc (用于中和FGF 配體）和對照存在下處理72小時后HCC827和HCC827-ER細胞中的細胞存活力。
[0030] 圖8。|在厄洛替尼存在或缺失下在HCC4006-ER細胞中對一組小分子抑制劑的篩 選揭示了 FGFR抑制劑HH73074能逆轉(zhuǎn)對厄洛替尼的抗性。顯示了生長抑制劑IC5。。
[0031] 發(fā)明詳述
[0032] I.定義
[0033] 感興趣多肽的"拮抗劑"（可互換稱作"抑制劑"）是干擾感興趣多肽的活化或功 能，例如部分或完全阻斷、抑制、或中和由感興趣多肽介導的生物學活性的藥劑。例如，多 肽X的拮抗劑可以指部分或完全阻斷、抑制、或中和由多肽X介導的生物學活性的任何分 子。抑制劑的例子包括抗體；配體抗體；小分子詰抗劑；反義和抑制性RNA (例如shRNA)分 子。優(yōu)選地，抑制劑是結(jié)合感興趣多肽的抗體或小分子。在一個特定實施方案中，抑制劑具 有約1，000ηΜ或更少的對感興趣多肽的結(jié)合親和力（解離常數(shù)）。在另一個實施方案中， 抑制劑具有約1〇〇ηΜ或更少的對感興趣多肽的結(jié)合親和力。在另一個實施方案中，抑制劑 具有約50nM或更少的對感興趣多肽的結(jié)合親和力。在一個特定實施方案中，抑制劑共價結(jié) 合至感興趣多肽。在一個特定實施方案中，抑制劑以1，〇〇〇ηΜ或更少的IC5。抑制感興趣多 肽的信號傳導。在另一個實施方案中，抑制劑以500nM或更少的IC5。抑制感興趣多肽的信 號傳導。在另一個實施方案中，抑制劑以50nM或更少的IC5。抑制感興趣多肽的信號傳導。 在某些實施方案中，拮抗劑將感興趣多肽的表達水平或生物學活性降低或抑制至少10%、 20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。在一些實施方案中，感興趣多肽是 FGFR(例如 FGFR1、FGFR2、FGFR3、和 / 或 FGFR4)或 FGF(例如 FGF1-23)。在一些實施方案 中，感興趣多肽是EGFR。
[0034] 除非另有說明，如本文中使用的，術(shù)語"多肽"指來自任何脊椎動物來源（包括哺 乳類動物，諸如靈長類動物（例如人）和嚙齒類動物（例如小鼠和大鼠））的任何天然感興 趣多肽。該術(shù)語涵蓋"全長"、未加工多肽以及源自細胞中加工的任何形式的多肽。該術(shù)語 還涵蓋多肽的天然發(fā)生變體，例如剪接變體或等位變體。
[0035] "多核苷酸"或"核酸"在本文中可互換使用，指任何長度的核苷酸聚合物，包括DNA 和RNA。核苷酸可以是脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經(jīng)過修飾的核苷酸或堿基、和/或其 類似物，或者是可通過DNA或RNA聚合酶，或者通過合成反應摻入聚合物中的任何底物。多 核苷酸可包含經(jīng)過修飾的核苷酸，諸如甲基化核苷酸及其類似物。若存在的話，對核苷酸結(jié) 構(gòu)的修飾可以在裝配聚合物之前或之后進行。核苷酸序列可以由非核苷酸組分中斷。多核 苷酸可以在合成后進一步修飾，諸如通過與標記物綴合。其它類型的修飾包括例如"帽"， 將一個或多個天然存在的核苷酸用類似物替代，核苷酸間修飾諸如例如具有不帶電荷連接 (例如甲基膦酸酯、磷酸三酯、磷酰胺酯（phosphoamidate)、氨基甲酸酯等）和具有帶電荷 連接（例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等）的修飾，含有懸垂模塊（pendant moiety)諸如 例如蛋白質(zhì)（例如核酸酶、毒素、抗體、信號肽、聚L-賴氨酸等）的修飾，具有嵌入劑（例如 吖啶、補骨脂素等）的修飾，含有螯合劑（例如金屬、放射性金屬、硼、氧化性金屬等）的修 飾，含有燒化劑的修飾，具有經(jīng)修飾連接（例如α端基異構(gòu)核酸（anomeric nucleic acid) 等）的修飾，以及未修飾形式的多核苷酸。另外，通常存在于糖類中的任何羥基基團可以 用例如膦酸（phosphonate)基團、磷酸（phosphate)基團替換，用標準保護基團保護，或活 化以制備與別的核苷酸的別的連接，或者可綴合至固體或半固體支持物?？闪姿峄蛘哂?胺或1-20個碳原子的有機加帽基團模塊取代5'和3'末端0H。其它羥基也可衍生成標 準保護基團。多核苷酸也可含有本領(lǐng)域普遍知道的核糖或脫氧核糖糖類的類似物形式，包 括例如2' -氧-甲基_、2' -氧-烯丙基_、2' -氟-或2' -疊氮-核糖，碳環(huán)糖類似物， 端基異構(gòu)糖，差向異構(gòu)糖諸如阿拉伯糖、木糖或來蘇糖、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖，無 環(huán)類似物及脫堿基核苷類似物諸如甲基核糖核苷?？捎脗溥x連接基團替換一個或多個磷酸 二酯連接。這些備選連接基團包括但不限于以下實施方案，其中磷酸酯用P(〇)S( "硫代酸 酯"（thioate))、P ⑶ S ( "二硫代酸酯"（dithioate))、（0) NR2 ( "酰胺酯"（amidate))、P (0) 尺、卩(0)01?'、0)或012("甲縮醛"&〇^&〇6七&1))替代，其中1?或1?'各自獨立為!1或者取代 或未取代的烴基（1-20個C)，任選含有醚（-0-)連接、芳基、烯基、環(huán)烴基、環(huán)烯基或芳烴基 (araldyl)。并非多核苷酸中的所有連接都必需是相同的。前述描述適用于本文中提及的 所有多核苷酸，包括RNA和DNA。
[0036] 術(shù)語"小分子"指具有約2000道爾頓或更小，優(yōu)選約500道爾頓或更小的分子量 的任何分子。
[0037] "分離的"抗體指已經(jīng)與其天然環(huán)境的組分分開的抗體。在一些實施方案中，抗體 純化至大于95%或99%的純度，如通過例如電泳（例如SDS-PAGE、等電聚焦（IEF)、毛細管 電泳）或?qū)游觯ɡ珉x子交換或反相HPLC)測定的。關(guān)于用于評估抗體純度的方法的綜述， 見例如 Flatman 等人，J. Chromatogr. B 848 :79-87 (2007) 〇
[0038] 本文中的術(shù)語"抗體"以最廣義使用，并且涵蓋各種抗體結(jié)構(gòu)，包括但不限于單克 隆抗體、多克隆抗體、多特異性抗體（例如雙特異性抗體）、和抗體片段，只要它們展現(xiàn)出期 望的抗原結(jié)合活性。
[0039] 術(shù)語"抗感興趣多肽抗體"和"結(jié)合感興趣多肽的抗體"指能夠以足夠親和力結(jié)合 感興趣多肽，使得該抗體可作為診斷劑和/或治療劑用于靶向感興趣多肽的抗體。在一個 實施方案中，根據(jù)例如通過放射免疫測定法（RIA)的測量，抗感興趣多肽抗體結(jié)合無關(guān)的、 非感興趣多肽的蛋白質(zhì)的程度小于該抗體對感興趣多肽的結(jié)合的約10%。在某些實施方案 中，結(jié)合感興趣多肽的抗體具有彡1 μ M、彡100nM、彡10nM、彡InM、彡0.1 nM、彡0.0 lnM、或 彡0· OOlnM(例如10 SM或更少、例如10 SM至10 13M、例如10 9M至10 13M)的解離常數(shù)（Kd)。 在某些實施方案中，抗感興趣多肽抗體結(jié)合在來自不同物種的感興趣多肽中保守的感興 趣多肽表位。在一些實施方案中，感興趣多肽是FGFR(例如FGFR1、FGFR2、FGFR3、和/或 FGFR4)和/或FGF (例如FGF1-23)。在一些實施方案中，感興趣多肽是EGFR。
[0040] "阻斷性"抗體或"拮抗性"抗體是抑制或降低其結(jié)合的抗原的生物學活性的抗體。 優(yōu)選的阻斷性抗體或拮抗性抗體實質(zhì)性或完全抑制抗原的生物學活性。
[0041] "親和力"指分子（例如抗體）的單一結(jié)合位點與其結(jié)合配偶（例如抗原）之間全 部非共價相互作用總和的強度。除非另有指示，如本文中使用的，"結(jié)合親和力"指反映結(jié) 合對的成員（例如抗體和抗原）之間1:1相互作用的內(nèi)在結(jié)合親和力。分子X對其配偶Y 的親和力通?？梢杂媒怆x常數(shù)（Kd)來表述。親和力可以通過本領(lǐng)域知道的常用方法來測 量，包括本文中所描述的方法。下文描述了用于測量結(jié)合親和力的具體的說明性和例示性 的實施方案。
[0042] "抗體片段"指與完整抗體不同的分子，其包含完整抗體中結(jié)合完整抗體結(jié)合的抗 原的部分?？贵w片段的例子包括但不限于？1?&13、？&13'、？&13'-5!^( &13'）2;雙抗體；線性 抗體；單鏈抗體分子（例如scFv);和由抗體片段形成的多特異性抗體。
[0043] 與參照抗體"結(jié)合相同表位的抗體"指在競爭測定法中將參照抗體對其抗原的結(jié) 合阻斷50%或更多的抗體，且相反，參照抗體在競爭測定法中將該抗體對其抗原的結(jié)合阻 斷50%或更多。
[0044] 術(shù)語"嵌合"抗體指其中的重和/或輕鏈的一部分自特定的來源或物種衍生，而重 和/或輕鏈的剩余部分自不同來源或物種衍生的抗體。
[0045] 術(shù)語"全長抗體"、"完整抗體"、和"全抗體"在本文中可互換使用，指與天然抗體結(jié) 構(gòu)具有基本上類似的結(jié)構(gòu)或者具有含有Fc區(qū)的重鏈的抗體。
[0046] 如本文中使用的，術(shù)語"單克隆抗體"指從一群基本上同質(zhì)的抗體獲得的抗體，即 構(gòu)成群體的各個抗體是相同的和/或結(jié)合相同表位，除了例如含有天然存在的突變或在單 克隆抗體制備物的生成期間發(fā)生的可能的變體抗體外，此類變體一般以極小量存在。與通 常包含針對不同決定簇（表位）的不同抗體的多克隆抗體制備物不同，單克隆抗體制備物 的每個單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。如此，修飾語"單克隆"指示抗體自一群基本 上同質(zhì)的抗體獲得的特性，而不應解釋為要求通過任何特定方法來生成抗體。例如，可以 通過多種技術(shù)來生成要依照本發(fā)明使用的單克隆抗體，包括但不限于雜交瘤方法、重組DNA 方法、噬菌體展示方法、和利用含有所有或部分人免疫球蛋白基因座的轉(zhuǎn)基因動物的方法， 用于生成單克隆抗體的此類方法和其它例示性方法。
[0047] "人抗體"指擁有與由人或人細胞生成的或利用人抗體全集或其它人抗體編碼序 列自非人來源衍生的抗體的氨基酸序列對應的氨基酸序列的抗體。人抗體的此定義明確排 除包含非人抗原結(jié)合殘基的人源化抗體。
[0048] "人源化"抗體指包含來自非人HVR的氨基酸殘基和來自人FR的氨基酸殘基的嵌 合抗體。在某些實施方案中，人源化抗體會包含至少一個，通常兩個基本上整個可變域，其 中所有或基本上所有HVR(例如CDR)對應于非人抗體的那些，且所有或基本上所有FR對應 于人抗體的那些。任選地，人源化抗體可以至少包含自人抗體衍生的抗體恒定區(qū)的一部分。 抗體，例如非人抗體的"人源化形式"指已經(jīng)經(jīng)歷人源化的抗體。
[0049] "免疫綴合物"指與一種或多種異源分子，包括但不限于細胞毒劑綴合的抗體。
[0050] "個體響應"或"響應"可使用指示對個體益處的任何終點評估，包括但不限于：（1) 一定程度地抑制疾病進展（例如癌癥進展），包括減緩和完全阻滯；（2)縮小腫瘤尺寸；（3) 抑制（即減輕、減緩或完全終止）癌細胞浸潤入臨近周圍器官和/或組織；(4)抑制（即減 輕、減緩或完全終止）轉(zhuǎn)移；（5) -定程度地減輕與疾病或病癥（例如癌癥）有關(guān)的一種或 多種癥狀；(6)無進展存活的長度延長；和/或（8)治療后給定時間點的死亡率降低。
[0051] 術(shù)語"基本上相同"在用于本文時表示兩個數(shù)值之間足夠高的相似程度，以致本領(lǐng) 域技術(shù)人員將認為在用所述數(shù)值（例如Kd值或表達）所測量的生物學特性背景內(nèi)兩個數(shù) 值之間的差異具有很小的或沒有生物學和/或統(tǒng)計學顯著性。作為參照/比較值的函數(shù)， 所述兩個數(shù)值之間的差異例如小于約50 %，小于約40 %，小于約30 %，小于約20 %，和/或 小于約10%。
[0052] 短語"實質(zhì)性不同"