，在移植28天后，胃幽門 壁可以觀察到大量新生的神經(jīng)元表面標記物的熒光表達情況；圖A-a為HuC/D，圖A-b為 Tujl，圖A-c為nNOS表達情況；
[0051] 圖B為與假手術組（SHAM)相比，肌層中再生的PGP9. 5陽性的神經(jīng)元結構形態(tài)學 特征；
[0052] 圖C為從蛋白質印跡法反映注入神經(jīng)修復材料后神經(jīng)元表面標記物HuC/D、Tujl 和nNOS表達情況，縱坐標的中文為相對表達量水平；
[0053] 圖8為注入GFP標記的神經(jīng)修復材料表面神經(jīng)元標記物PGP9. 5表達含量圖；
[0054] 圖中，圖A為GFP標記的神經(jīng)修復材料熒光圖；
[0055] 圖B為神經(jīng)兀表面標記物PGP9. 5表達含量圖；
[0056] 圖C為移植GFP標記的神經(jīng)修復材料神經(jīng)表面元標記物PGP9. 5表達含量圖；
[0057] 圖D為圖C局部放大圖；
[0058] 圖9為注入未處理的BMSC熒光觀察圖；
[0059] 圖中，圖A和圖E為BBM標記的BMSC;
[0060] 圖B和圖F為PGP9. 5表達含量圖；
[0061 ] 圖C為光學顯微鏡下BMSC形態(tài)結構圖；
[0062] 圖D為圖A和B合成圖；
[0063] 圖G為圖E和F的合成圖；
[0064] 圖10為肌層中再生的PGP9. 5陽性神經(jīng)元結構排列形態(tài)學特征圖；
[0065] 圖中，圖A~E分別表示再生的PGP9. 5陽性神經(jīng)元不同排列及不同形態(tài)學特征 圖；
[0066] 圖11為神經(jīng)修復材料注入能夠顯著恢復幽門去神經(jīng)支配后的肌肉松弛程度圖；
[0067] 圖中，圖A為假手術對照組（SHAM)、BAC處理組以及BAC+神經(jīng)修復材料處理組后 肌緊張收縮曲線形態(tài)圖；
[0068] 圖B為圖A肌張力統(tǒng)計圖；圖C為上述三組肌松弛曲線形態(tài)圖；
[0069] 圖D為圖C的統(tǒng)計圖。在BAC去神經(jīng)支配并注入神經(jīng)修復材料組中，我們可以觀 察到隨著肌電刺激頻率的逐級增加，幽門環(huán)形肌恢復了明顯的頻率依賴性的松弛現(xiàn)象。
[0070] 圖E說明N0S抑制劑L-NAME能夠完全阻斷神經(jīng)修復材料所起的作用；圖中縱坐標 的中文含義為肌張力。
[0071] 圖12為未經(jīng)預處理的BMSC移植后不能誘導有效ENS神經(jīng)元再生；
[0072] 圖中，圖A為蛋白質印跡法反映未經(jīng)處理的BMSC和神經(jīng)修復材料注入后神經(jīng)元表 面標記物表達含量圖；圖B為圖A柱狀統(tǒng)計圖；
[0073] 圖13為內源性⑶NF的表達存在一個潛在的正反饋機制結構示意圖；
[0074] 圖14為神經(jīng)修復材料的"⑶NF正反饋"圖；
[0075] 圖中，圖A為神經(jīng)修復材料內源性表達低水平的⑶NF柱狀圖；
[0076] 圖B為加入神經(jīng)修復材料后⑶NF表達含量圖?？v坐標的中文含義為相對⑶NF蛋 白含量表達。
【具體實施方式】
[0077] 為了更好地解釋本發(fā)明，以下結合具體實施例進一步闡明本發(fā)明的主要內容，但 本發(fā)明的內容不僅僅局限于以下實施例。
[0078] 名字簡寫
[0079]
[0080] 實施例1
[0081] 1、動物材料
[0082] 成年SD大鼠，10~12周齡，包括野生型（WT)和GFP轉基因型，飼養(yǎng)于霍普金斯大 學屏障動物實驗中心或華中科技大學動物實驗中心（25°C恒溫，光照與黑暗12h交替）。
[0083] 在本實驗中動物飼養(yǎng)以及相應操作均符合NIH準則，動物實驗研究方案得到霍普 金斯大學和華中科技大學的ACUC批準。
[0084] 在下述實驗中，成年雄性大鼠（10~12周）用于BMSC的提取，成年雌性大鼠用于 建立胃幽門部去神經(jīng)支配模型以及作為BMSC注入的受體。
[0085] 2、骨髓基質干細胞分離和培養(yǎng)
[0086] 2. 1細胞分離
[0087] 1)將成年SD大鼠處死后，并用體積分數(shù)為75%的酒精浸泡5min，無菌條件下分離 股骨，除去骨表面附著軟組織，無菌PBS清洗干凈后，置于無菌培養(yǎng)皿的DMEM培養(yǎng)基中；
[0088] 2)采用眼科剪將兩端干骺端切除，暴露骨髓腔；用5ml的注射器以DMEM低糖培養(yǎng) 基反復沖洗骨髓腔，獲得單細胞懸液；
[0089] 3)將上述得到的骨髓單細胞懸液移入15ml離心管中，在lOOOrpm條件下離心 5min，棄上清，用含體積分數(shù)為15%FBS的DMEM低糖培養(yǎng)基洗2次；
[0090]4)將最終收集的細胞懸液接種于25ml細胞塑料培養(yǎng)瓶中，記為P。代，置于37°C、 5%C02、飽和濕度的細胞培養(yǎng)室培養(yǎng)。
[0091] 2. 2 培養(yǎng)
[0092] 1)將SD大鼠股骨中分離得到的BMSC置于培養(yǎng)在含有體積分數(shù)為15%FBS的DMEM 低糖培養(yǎng)基中（包含2mM的谷氨酰胺、1 %的青霉素和鏈霉素）；原代（P。）細胞培養(yǎng)24h后 換液，洗去未貼壁的細胞，以后每3~4d換液1次；
[0093] 2)待細胞增殖融合至約80~90%時，0· 25% (重量體積比g/mL)胰酶消化、傳 代培養(yǎng)；采用貼壁培養(yǎng)法，利用BMSC易于消化脫落的特點，嚴格控制細胞消化時間，純化 BMSC;實驗選取6~8代的BMSC細胞。
[0094] 如圖1A可見，上述分尚和培養(yǎng)出骨髓來源的貼壁細胞，在接種24h后，從大鼠骨髓 中分離出來的細胞已貼壁生長在細胞培養(yǎng)瓶中。在接種后的3~7天內，細胞呈單克隆樣 生長，速度緩慢（圖lA，a_c);
[0095] 當BMSC細胞長至第2~6代時，BMSC呈現(xiàn)典型的梭形（圖1A，d-f)，它可以有效 增殖至少至20代。
[0096] 實施例2
[0097] 1、BMSC的流式鑒定
[0098] 1)選取原代培養(yǎng)第6代對數(shù)生長期BMSC細胞，行流式細胞術鑒定細胞表面抗原； 0. 25% (重量體積比g/mL)胰酶消化細胞，吹打制成單細胞懸液，離心收集，PBS洗滌1次；
[0099] 2)每個樣本取2只流式檢測管，分別標記同型對照、檢測，每管取約5X105個細胞 重懸于100yL無菌PBS中；
[0100] 3)按照流式抗體說明書，取第6代的BMSC進行⑶73、⑶90、⑶105和⑶45流式鑒 定分離得到的BMSC。
[0101] 如圖1B可見，將取生長至第6代的BMSC做流式檢測，分析結果顯示BMSC表面抗原 ⑶90,⑶73,⑶105的陽性率高達95%以上，⑶45 (造血細胞表面抗原）陰性表達（圖1B); BMSC細胞高度純化。
[0102] 2、體外誘導BMSC向脂肪細胞，成骨細胞，軟骨細胞分化
[0103] 2. 1成脂肪細胞誘導實驗
[0104] 1)取生長至第6代的BMSC細胞，當融合度達到80~90%時，用0. 25%胰酶進行 消化；
[0105] 2)將消化下來的細胞按照2X104cellS/cm2的細胞密度接種在六孔板中，每孔加 入2mL完全培養(yǎng)基；
[0106] 3)將細胞置于37°C，5% 0)2的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)；
[0107] 4)每3天更換一次完全培養(yǎng)基，直到細胞長至100 %融合；
[0108] 5)細胞融合度達100 %后，繼續(xù)用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)；
[0109] 6) 3天后，將完全培養(yǎng)基輕輕吸走，每孔加入2mL成脂肪誘導培養(yǎng)基；
[0110] 7)3天后，將成脂肪誘導培養(yǎng)基換作成脂肪維持培養(yǎng)基；
[0111] 8) 24h后，將成脂肪維持培養(yǎng)基換作成脂肪誘導培養(yǎng)基；
[0112] 9)重復7~8的步驟3次；
[0113] 10)重復更換成脂肪誘導培養(yǎng)基/脂肪維持培養(yǎng)基3次后，繼續(xù)用成脂肪維持培養(yǎng) 基培養(yǎng)7天，每3天更換培養(yǎng)基；
[0114] 11)誘導結束后，吸走六孔板中的成脂肪維持培養(yǎng)基，用1XPBS沖洗1~2次海 孔加入2mL4%多聚甲醛溶液，固定30min;
[0115] 12)吸走多聚甲醛溶液，用1XPBS沖洗2次，用1ml的油紅染色30min;
[0116] 13)吸走油紅染液，用1XPBS沖洗2~3次；
[0117] 14)將培養(yǎng)板置于顯微鏡下觀察成脂肪染色效果。
[0118] 2. 2成骨細胞誘導實驗
[0119] 1)取生長至第6代的細胞，當融合度達到80~90%時，用0.25% (重量體積比 g/mL)胰酶進行消化；
[0120] 2)將消化下來的細胞按照2X104cells/cm2的細胞密度接種在預先包被0. 1 %明 膠的六孔板中，每孔加入2mL完全培養(yǎng)基；
[0121] 3)將細胞置于37°C，5% 0)2的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)；
[0122] 4)當細胞融合度達到60~70%時，輕輕將孔內完全培養(yǎng)基吸走，加入2mL成骨誘 導分化完全培養(yǎng)基，每隔3天更換一次成骨誘導分化完全培養(yǎng)基；
[0123] 5) 3周后，吸走六孔板中的成骨誘導分化完全培養(yǎng)基，用1XPBS沖洗1~2次；每 孔加入2mL4%多聚甲醛溶液，固定30min;
[0124] 6)吸走多聚甲醛溶液，用1XPBS沖洗2次；每孔中加入lmL茜素紅染液染3~ 5min；
[0125] 7)吸走茜素紅染液，用1XPBS沖洗2~3次；
[0126] 8)將培養(yǎng)板置于顯微鏡下觀察成骨染色效果。
[0127] 2. 3成軟骨細胞實驗
[0128] 1)取生長至第6代的細胞，當融合度達到80~90%時，用0. 25%胰酶進行消化， 加入軟骨非完全培養(yǎng)基終止消化；
[0129] 2)將消化下來的細胞轉至15mL離心管中；
[0130] 3)室溫，150g，離心5min，棄上清，用成軟骨誘導分化非完全培養(yǎng)基重懸細胞；
[0131] 4)室溫，150g，離心5min，棄上清；
[0132] 5)用成軟骨誘導分化完全培養(yǎng)基重懸細胞，調整細胞濃度在5.OX105cells/mL;
[0133] 6)取0. 5mL細胞在15mL離心管中，室溫，在150g條件下離心5min;
[0