如前述權利要求中任一項所述的方法，其中，所述緩沖體系還包含pKa大于5.5的中 和緩沖化合物。19. 如權利要求18所述的方法，其中，所述中和緩沖化合物包含嗎啉、哌嗪或N-環(huán)己基 化合物。 2 0.如權利要求19所述的方法，其中，所述中和緩沖化合物是2 - (N -嗎啉基）乙磺酸 (MES)、3-(N-嗎啉基)丙磺酸(MOPS)、3_嗎啉基-2-羥基丙磺酸(M0PS0)、4-(2_羥乙基)-1-哌 嗪乙磺酸(HEPES)、3-[4-(2-羥乙基)-1-哌嗪基]丙磺酸(EPPS或HEPPS)、哌嗪-W-二（2-乙磺酸）（PIPES)、N-(2-羥乙基）哌嗪-^-(2-羥基丙磺酸）（HEPPS0)、N-(2-羥乙基）哌嗪_ V -(4-丁磺酸）（HEPBS)、N-環(huán)己基-2-氨基乙磺酸(CHES)、N-環(huán)己基-3-氨基丙磺酸(CAPS)、 4-(環(huán)己基氨基)-1-丁磺酸(CABS)或3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸(CAPS0)。21.如權利要求18至20中任一項所述的方法，其中，所述緩沖體系還包含pKa為6至8的 鎖定緩沖化合物，其中，所述中和緩沖化合物的pKa高于8。22. 如權利要求21所述的方法，其中，所述中和緩沖化合物的pKa為8至11。23. 如權利要求21或22所述的方法，其中，鎖定緩沖劑是MOPS或HEPES。24. 如權利要求21至23中任一項所述的方法，其中，所述鎖定緩沖化合物的濃度小于所 述中和緩沖化合物的濃度。25. 如前述權利要求中任一項所述的方法，其中，所述標記物包括酶、熒光蛋白、有機染 料、有色顆粒、生物素、抗生蛋白鏈菌素或聚合物。26. 如前述權利要求中任一項所述的方法，所述方法在5至9的pH下執(zhí)行。27. 包含除甘氨酸外的一元羧酸緩沖化合物的緩沖液在從固相中洗脫出抗體中的應 用，所述一元羧酸緩沖化合物帶有處在α位或β位的氨基取代基。28. 如權利要求27所述的應用，其中，所述固相安置在柱中。29. 如權利要求27或28所述的應用，其中，所述固相包含針對所述抗體的親和基質。30. 如權利要求27至29中任一項所述的應用，其中，所述一元羧酸緩沖化合物還包含一 個或多個非氨基取代基或者不包含其它取代基。31. 如權利要求27至30中任一項所述的應用，其中，所述一元羧酸的氨基取代基是仲氨 基或叔氨基，或者是季銨。32. 如權利要求31所述的應用，其中，所述氨基取代基是季銨取代基。33. 如權利要求32所述的應用，其中，所述一元羧酸緩沖化合物是甜菜堿。34. 如權利要求33所述的應用，其中，所述甜菜堿是Ν，Ν，Ν-三甲基甘氨酸。35. 如權利要求27至30中任一項所述的方應用，其中，所述一元羧酸緩沖化合物是伯氨 基酸。36. 如權利要求35所述的應用，其中，所述伯氨基酸是丙氨酸、β-丙氨酸或2-氨基丁酸。37. 如權利要求31所述的應用，其中，所述一元羧酸緩沖化合物是脯氨酸、三(羥甲基） 甲基甘氨酸、Ν-甲基甘氨酸、Ν，Ν-二甲基甘氨酸或2-吡啶甲酸。38. 如權利要求27至37中任一項所述的應用，其中，所述一元羧酸緩沖化合物的羧基的 pKa為1至4。39. 如權利要求38所述的應用，其中，所述一元羧酸緩沖化合物的羧基的pKa為1.5至 3.5〇40. 如權利要求25至37中任一項所述的應用，其中，所述一元羧酸緩沖化合物的氨基的 pKa大于8。41. 如權利要求40所述的應用，其中，所述一元羧酸緩沖化合物的氨基的pKa大于9。42. 如權利要求27至41中任一項所述的應用，其中，所述一元羧酸緩沖化合物以小于 200mM的濃度存在。43. 如權利要求42所述的應用，其中，所述一元羧酸緩沖化合物的濃度小于lOOmM。44. 如權利要求43所述的應用，其中，所述一元羧酸緩沖化合物的濃度小于50mM。45. 如權利要求27至44中任一項所述的應用，其中，所述緩沖液的pH是1.8至4.8。46. 如權利要求1至24中任一項所述的方法，其中，在使所述抗體與所述標記物、衍生化 試劑、活化的標記物或活化的衍生化試劑接觸的步驟之前，通過如權利要求28至45中任一 項所述從固相中洗脫出所述抗體的步驟來分離所述抗體，且其中，所述緩沖體系包含用于 所述洗脫出所述抗體的步驟的緩沖劑。47. -種抗體分離試劑盒，所述試劑盒包含：用于結合抗體的固相親和基質，和用于在 所述抗體結合至所述親和基質時洗脫所述抗體的緩沖液，其中，所述緩沖液包含除甘氨酸 外的一元羧酸緩沖化合物，所述一元羧酸緩沖化合物帶有處于α位或β位的氨基取代基。48. 如權利要求47所述的抗體分離試劑盒，其中，所述緩沖液如權利要求30至45中任一 項所定義。49. 如權利要求47或48所述的抗體分離試劑盒，其還包含pKa大于5.5的中和緩沖液。50. 如權利要求49所述的抗體分離試劑盒，其中，所述中和緩沖液包含嗎啉、哌嗪或N-環(huán)己基化合物。51. 如權利要求50所述的抗體分離試劑盒，其中，所述中和緩沖液包含2-(N-嗎啉基）乙 磺酸(MES)、3-(N-嗎啉基)丙磺酸(MOPS)、3-嗎啉基-2-羥基丙磺酸(MOPSO)、4-(2-羥乙基)-1 -哌嗪乙磺酸(HEPES)、3-[4-(2-羥乙基)-1 -哌嗪基]丙磺酸(EPPS或HEPPS)、哌嗪-N，Y -二 (2-乙磺酸）（PIPES)、N-(2-羥乙基）哌嗪-(2-羥基丙磺酸）（HEPPSO)、N-(2-羥乙基）哌 嗪-(4-丁磺酸）（HEPBS)、N-環(huán)己基-2-氨基乙磺酸（CHES)、N-環(huán)己基-3-氨基丙磺酸 (CAPS)、4-(環(huán)己基氨基)-1-丁磺酸(CABS)或3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸(CAPSO)。52. 如權利要求49至51中任一項所述的抗體分離試劑盒，其還包含pKa為6至8的鎖定緩 沖液，其中，所述中和緩沖液的pKa高于8。53. 如權利要求52所述的抗體分離試劑盒，其中，所述中和緩沖液的pKa為8至11。54. 如權利要求52或53所述的抗體分離試劑盒，其中，所述鎖定緩沖液是MOPS或HEPES。55. 如權利要求52至54中任一項所述的抗體分離試劑盒，其中，所述鎖定緩沖液的濃度 小于所述中和緩沖液的濃度。56. 如權利要求52至55中任一項所述的抗體分離試劑盒，其中，所述鎖定緩沖液的pH為 6至8〇57. 如權利要求49至56中任一項所述的抗體分離試劑盒，其中，所述中和緩沖液的pH高 于6〇58. 如權利要求57所述的抗體分離試劑盒，其中，所述中和緩沖液的pH高于8。59. 如權利要求58所述的抗體分離試劑盒，其中，所述中和緩沖液的pH為8.5至11。60. 如權利要求59所述的抗體分離試劑盒，其中，所述中和緩沖液的pH為9至9.5。61. -種用于綴合反應中的抗體組合物，所述組合物包含處于緩沖體系中的分離的抗 體，其中，所述緩沖體系包含除甘氨酸外的一元羧酸緩沖化合物，所述一元羧酸緩沖化合物 帶有處在α位或β位的氨基取代基。62. 如權利要求61所述的抗體組合物，其中，所述一元羧酸緩沖化合物還包含一個或多 個非氨基取代基或者不包含其它取代基。63. 如權利要求61或62所述的抗體組合物，其中，所述一元羧酸的氨基取代基是仲氨基 或叔氨基，或者是季銨。64. 如權利要求63所述的抗體組合物，其中，所述氨基取代基是季銨取代基。65. 如權利要求64所述的抗體組合物，其中，所述一元羧酸緩沖化合物是甜菜堿。66. 如權利要求65所述的抗體組合物，其中，所述甜菜堿是Ν，Ν，Ν-三甲基甘氨酸。67. 如權利要求61或62所述的抗體組合物，其中，所述一元羧酸緩沖化合物是伯氨基 酸。68. 如權利要求67所述的抗體組合物，其中，所述伯氨基酸是丙氨酸、β-丙氨酸或2-氨 基丁酸。69. 如權利要求63所述的抗體組合物，其中，所述一元羧酸緩沖化合物是脯氨酸、三(羥 甲基）甲基甘氨酸、Ν-甲基甘氨酸、Ν，Ν-二甲基甘氨酸或2-吡啶甲酸。70. 如權利要求61至69中任一項所述的抗體組合物，其中，所述一元羧酸緩沖化合物的 羧基的pKa為1至4。71. 如權利要求70所述的抗體組合物，其中，所述一元羧酸緩沖化合物的羧基的pKa為 1.5至3.5〇72. 如權利要求61至71中任一項所述的抗體組合物，其中，所述一元羧酸緩沖化合物的 氨基的pKa大于8。73. 如權利要求71所述的抗體組合物，其中，所述一元羧酸緩沖化合物的氨基的pKa大 于9〇74. 如權利要求61至73中任一項所述的抗體組合物，其中，所述一元羧酸緩沖化合物以 小于200mM的濃度存在。75. 如權利要求74所述的抗體組合物，其中，所述一元羧酸緩沖化合物的濃度小于 100mM〇 7 6.如權利要求7 5所述的抗體組合物，其中，所述一元羧酸緩沖化合物的濃度小于 50mM〇77. 如權利要求61至76中任一項所述的抗體組合物，其中，所述緩沖體系還包含pKa大 于5.5的中和緩沖化合物。78. 如權利要求77所述的抗體組合物，其中，所述中和緩沖化合物包含嗎啉、哌嗪或N- 環(huán)己基化合物。79. 如權利要求78所述的抗體組合物，其中，所述中和緩沖化合物是2-(N-嗎啉基）乙磺 酸(MES)、3-(N-嗎啉基)丙磺酸(MOPS)、3_嗎啉基-2-羥基丙磺酸(M0PS0)、4-(2_羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)、3-[4-(2_羥乙基）-1-哌嗪基]丙磺酸（EPPS或HEPPS)、哌嗪-二 (2-乙磺酸）（PIPES)、N-(2-羥乙基）哌嗪-(2-羥基丙磺酸）（HEPPS0)、N-(2-羥乙基）哌 嗪-(4-丁磺酸）（HEPBS)、N-環(huán)己基-2-氨基乙磺酸（CHES)、N-環(huán)己基-3-氨基丙磺酸 (CAPS)、4-(環(huán)己基氨基)-1-丁磺酸(CABS)或3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基-1-丙磺酸(CAPS0)。80. 如權利要求77至79中任一項所述的抗體組合物，其中，所述緩沖體系還包含pKa為6 至8的鎖定緩沖化合物，其中，所述中和緩沖化合物的pKa高于8。81. 如權利要求80所述的抗體組合物，其中，所述中和緩沖化合物的pKa為8至11。82. 如權利要求80或81所述的抗體組合物，其中，鎖定緩沖劑是MOPS或HEPES。83. 如權利要求80至82中任一項所述的抗體組合物，其中，所述鎖定緩沖化合物的濃度 小于所述中和緩沖化合物的濃度。84. 如權利要求61至83中任一項所述的抗體組合物，所述抗體組合物的pH為5至9。85. 如權利要求61至84中任一項所述的抗體組合物，其中所述分離的抗體與標記物綴 合。86. 如權利要求85所述的抗體組合物，其中，所述標記物包括酶、熒光蛋白、有機染料、 有色顆粒、生物素、抗生蛋白鏈菌素或聚合物。87.權利要求77至80中任一項所定義的緩沖體系作為抗體或抗體綴合物的儲存介質的 應用。
【專利摘要】一種將分離的抗體綴合至標記物或衍生化試劑的方法，所述方法包括：在包含除甘氨酸以外的一元羧酸緩沖化合物(其帶有處于在α或β位的氨基取代基)的緩沖體系中，使該抗體與經活化的標記物或經活化的衍生化試劑接觸，或者在抗體綴合試劑的存在下使所述抗體與所述標記物或衍生化試劑接觸。
【IPC分類】A61K49/00, A61K47/48
【公開號】CN105592860
【申請?zhí)枴緾N201480043061
【發(fā)明人】N·S·吉, B·富塞蒂
【申請人】創(chuàng)新生物科學有限公司
【公開日】2016年5月18日
【申請日】2014年5月30日
【公告號】EP3003385A1, US20160122416, WO2014191560A1