10-C)，79.3(CH，11-C)，70.1(CH，12-C)，56.0(C，13-C)，208.1 (C，14-C)，85.1(C，15-C)，16.2(CH 3，16-C)，18.9(CH3，17-C)，25.1(CH3，18-C)，14.7(CH3， 19-C)，10.5(CH3,20-C)，131.1(C，1'-C)，130.2(CH，2'-C)，129.3(CH，3'-C)，133.5(CH，4'-〇，129.3(01，5'-〇，130.2(01，6'-〇，167.2((：，7'-〇 ;碳原子標(biāo)記參見圖1。紅外光譜表明 該化合物含有羥基（3583,3502和3378cm-羰基（1708和1689cm-4和芳環(huán)（1605和1496cm -1)基團(tuán)。4 NMR譜顯示該化合物含有一個(gè)苯甲?；糠枝摩?.05 (2H，d，J = 7.0Hz，H-2 '和!1-6'），7.52(1!1，^ = 7.0抱，!1-4'）和7.44(2!1，^ = 7.0抱，!1-3'和!1-5'）；四個(gè)含氧次甲基5 H5.69(t，J = 5.0Hz，H-3)，3.37(dd，J = 9.5,4.5Hz，H-9)，3.01(d，J = 2.5Hz，H-llWP3.36 ((1，了 = 2.5他，!1-12);五個(gè)甲基3!10.91((1，了 = 7.5!^，!13-16)，1.07(!13-17)，0.93(!13-18)， 0.79(H3-19)和1.11 (H3-20)。除了苯甲?；糠?，13C NMR和DEPT譜顯示20個(gè)碳信號(hào)，除了對(duì) 應(yīng)上述的功能單元外還包括六個(gè)季碳(兩個(gè)羰基碳SC212.3，208.1和一個(gè)含氧碳SC85.1)。 根據(jù)核磁數(shù)據(jù)分析表明該化合物是一個(gè)雙萜醇苯甲酸酯類化合物。HMBC譜中，H 2-l與C-2， C-3，C-4，C-15和C-16;H-3與C-1，C-15和C-7' ；H3-16與C-l，C-2和C-3;0H-15與C-4和C-14的 相關(guān)性，以及結(jié)合這些質(zhì)子和共振碳的化學(xué)位移，表明該化合物含有一個(gè)連有甲基和苯甲 酰片段的五元環(huán)，此外C-15位連有一個(gè)羥基基團(tuán)。通過HMBC譜中H-4與C-5和C-6;H 3-17與C-5，C-6 和 C-13 ;H3-20 與 C-6，C-13 和 C-14; 0H-15 與 C-14 的相關(guān)性，可知 1，4-環(huán)己二酮通過 C-4 和C-15與五元環(huán)相連，且C-6和C-13位連有兩個(gè)甲基。此外，H-9和Η-ll與C-18和C-19;H-11 與 C-12 和 C-13;H-12 與 C-13 和 C-20;H3-17 與 C-7;H3-18 和 H3-19 與 C-9，C-10 和 C-ll;H3-20 與 C-12;0H-9與C-9和C-10的相關(guān)性表明八元環(huán)通過C-6和C-13與六元環(huán)相連，C-9，C-11和C-12位各連有一個(gè)羥基，以及C-10位連有兩個(gè)甲基。NOESY譜中，H-12與H 3-19的相關(guān)性表明它 們?yōu)闃?gòu)型。此外，H-3與H-2和H-4;H-4與H-2，H-3和H3-17;H-9與Η-ll和H 3-18的相關(guān)性表明 這些質(zhì)子為α-構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)， 可基本確定該化合物如圖1所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本 一致(圖2)。
[0045]化合物（Π )分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0046] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購(gòu)自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0047]制備方法：（a)貓爪草的干燥塊根（10kg)粉碎，用80 %乙醇熱回流提取（25L X 3 次），合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽 和的正丁醇(3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(398g)和正丁醇萃取 物；（b)步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用15%乙醇洗脫8個(gè)柱體積， 再用75%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏 (163g); (c)步驟(b)中75%乙醇洗脫浸膏用200-300目正相硅膠分離，依次用體積比為85:1 (10個(gè)柱體積）、45:1 (9個(gè)柱體積）、20:1 (8個(gè)柱體積）、10:1 (8個(gè)柱體積)和1:1 (5個(gè)柱體積） 的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分3(49g)用200-300目正相硅膠 進(jìn)一步分離，依次用體積比為25:1 (8個(gè)柱體積）、20:1 (10個(gè)柱體積)和10:1 (5個(gè)柱體積）的 二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2(21g)用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠0DS-C18分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個(gè)柱體積 洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（Π )(43mg)。
[0048] 結(jié)構(gòu)確證:HR-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z 489.2808，結(jié)合核磁特征可得分子式為 C26H42〇7，不飽和度為6。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ρρπι，DMS〇-d6，600MHz): H-1 (1 · 16，m)，H-1 (2.03，ddd，J=13.7,8.7，1.8)，H-2(4.21，m)，H-3(1.91，m)，H-3(1.28，m)，H-4(2.20，ddd，J = 14.9,7.2,3.6)，H-6(1.48，m)，H-6(1.64，dt，J=14.0,2.8)，H-7(1.31，m)，H-7(1.12，m)， H-8(1.45，m)，H-10(1.71，d，J=13.7)，H-ll(l.ll，m)，H-ll(1.34，m)，H-12(1.94，m)，H-14 (6.33，dd，J=17.6，10.9)，H-15(5.13，d，J=17.6)，H-15(4.93，d，J=10.8)，H-16(4.93， s)，H-16(4.82，s)，H-17(0.76，d，J = 6.8)，H-18(6.38，d，J = 7.2)，H-19(6.03，s)，H-20 (0.84，s)，H-2'（2.15，td，J = 7.3，1.4)，H-3'（1.52，J = 7.3)，H-4'（0.84，t，J = 7.3)，H-2" (1 · 80，s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δ。(ppm，DMS〇-d6，150Hz): 29 · 1 (CH2，1-C)，66 · 4 (CH，2-C)，29 · 4 (CH2,3-C)，45.3(CH，4-C)，49.2(C，5-C)，22.9(CH2,6-C)，27.0(CH 2,7-C)，36.9(CH，8-C)， 36. l(C，9-C)，34.7(CH，10-C)，32.3(CH2，n-C)，26.3(CH2，12-C)，144.4(C，13-C)，139.4 (CH，14-C)，111.3(CH 2，15-C)，114.4(CH2，16-C)，14.6(CH3，17-C)，97.2(CH，18-C)，99.2 (CH，19-C)，25.7(CH 3,20-C)，171.2(C，r-C)，35.4(CH2,2'-C)，17.2(CH2,3'-C)，12.7(CH 3， 4' -C)，168.8(C，Γ-C)，20.5(CH3，2"-C);碳原子標(biāo)記參見圖1 </3C NMR譜顯示有26個(gè)信號(hào)， 包含兩個(gè)甲基 0(：14.6，17-(：;25.7,2〇-〇，兩個(gè)共輒雙鍵（3(：144.4，13-(：;139.4，14-(： ; 111.3，15-(：;114.4，16-〇，一個(gè)乙酰氧基0(：168.8，1"-(：;2〇.5,2"-〇，一個(gè)丁酰氧基0 (：171.2，1'-(： ;35.4,2'-(：;17.2,3'-(：;12.7,4'-〇。綜合氫譜、碳譜、圓8(：譜和~(^3￥譜，以及 文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如圖1所示，絕對(duì)構(gòu)型依次為2R，4S，5R， 8S，9S，10R，18S，19R;立體構(gòu)型進(jìn)一步通過E⑶試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致(圖4)。
[0049] 化合物（I)藥理作用試驗(yàn)
[0050] -、材料和儀器
[0051 ] 前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3(ArCC-CRL-1435)、前列腺癌細(xì)胞株DU145(ATCC-HTB-81)。化 合物⑴自制，HPLC歸一化純度大于98%，用二甲基亞礬(DMS0)配制成濃度為1.0g/L的儲(chǔ)存 液備用。CCK-8試劑盒為日本同仁化學(xué)研究所產(chǎn)品。RPMI-1640培養(yǎng)基購(gòu)自Gibco公司。胎牛 血清(FBS)購(gòu)自Hyelone公司。青/鏈霉素為上海先鋒藥業(yè)產(chǎn)品。胰蛋白酶購(gòu)自華美生物工程 公司。二甲基亞砜(DMS0)購(gòu)自上海華舜生物工程公司。瓊脂(Agarose)、二硫蘇糖醇(DTT)、 苯甲基磺酞氟(PMSF)、四甲基乙二胺(TEMED)為Sigma公司產(chǎn)品。十二烷基磺酸鈉(SDs)、三 氯甲基烷基甲燒(1'1^8)1'1^8-!1(31、1'1'；[1：01^-100為?1'0111683公司產(chǎn)品。丙稀酞胺、過硫酸錢 (AP)購(gòu)于蘇州化學(xué)試劑廠產(chǎn)品。
[0052] C02細(xì)胞培養(yǎng)箱(ShellLab)，倒置相差顯微鏡(Nikon)，超凈工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備 廠），流式細(xì)胞儀（BD)，F(xiàn)039300A型酶標(biāo)儀（Sunrise)，高壓蒸汽滅菌器（Hirayama HA-300MD)，低溫超速離心機(jī)(Kubota 3740)，萬(wàn)向搖床(江蘇麒麟醫(yī)用儀器廠TS-92)，電泳儀 (Gibco公司），LXJ-n型離心機(jī)(上海醫(yī)用分析儀器廠），DK600型電熱恒溫水浴箱(上海精密 試驗(yàn)設(shè)備公司），電子天平(METTLER TOLEDO)，臺(tái)式干燥箱（上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）， 紫外分光光度儀(Beckman)。
[0053]二、試驗(yàn)方法 [0054] 1、細(xì)胞培養(yǎng)與養(yǎng)護(hù)
[0055] 1.1細(xì)胞培養(yǎng)
[0056]細(xì)胞株培養(yǎng)于腫瘤醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室。培養(yǎng)于含10 %胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基 中，另添加谷氨酞胺(2mmo 1/L)和抗生素（100U/青霉素和100mg/L鏈霉素），置37°C、飽和濕 度、含5 % C〇2氣體的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0057] 1.2細(xì)胞傳代
[0058]①于倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞長(zhǎng)滿貼壁，即可傳代。傳代前用75%酒精擦拭經(jīng) 過紫外線照射的超