或梭形，體積較 大，排列緊密，邊緣光滑，胞質(zhì)飽滿，核膜、核仁等結(jié)構(gòu)輪廓明顯，細(xì)胞生長(zhǎng)迅速;經(jīng)10.〇mg/L 化合物（Π )處理后，細(xì)胞密度逐漸降低，生長(zhǎng)速度明顯減慢至幾乎停滯，細(xì)胞逐漸脫落并漂 浮于培養(yǎng)液中。細(xì)胞體積縮小，胞膜皺縮，成小圓形或不規(guī)則形態(tài)，胞內(nèi)多見(jiàn)小顆粒狀物質(zhì)。 藥物作用時(shí)間越長(zhǎng)，細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變?cè)矫黠@。
[0098] 2、細(xì)胞毒試驗(yàn)
[0099]不同濃度化合物（11)對(duì)前列腺癌細(xì)胞株？03和01]145的生長(zhǎng)均有抑制作用。2.5， 5.0，10.0，20.0mg/L化合物（Π )作用兩種細(xì)胞24，48和72h后的存活率如下表所示(表3及表 4)。其中，10.011^/1化合物（11)作用于?03和01]145細(xì)胞24,45,7211后的細(xì)胞存活率分別為 56.2%，42.5%，24.3%和50.8%，32.6%，20.7%;2.5,5.0，10.0,20.011^/1，化合物（11)作 用兩種細(xì)胞72h后的存活率分別為53.3%，38.7%，25.5%，14.0%和53.2%，31.8%， 20.6%，11.0% (見(jiàn)圖7及圖8)。兩因素方差分析示不同濃度與不同時(shí)間處理組之間差別具 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈〇.〇5)，提示化合物（Π )對(duì)PC3和DU145的生長(zhǎng)抑制呈時(shí)間濃度依賴。
[0100] 3、集落形成試驗(yàn)
[0101] 試驗(yàn)顯示，對(duì)照組PC3和DU145的集落形成率分別為67.7和64%，而2.5，5.0，10.0， 20.0mg/L化合物（Π )處理組分別為60.7%，51.3%，39.3%，27.0%和49.7%，34.0%， 27.7%，15.7%(見(jiàn)表5)。這進(jìn)一步證實(shí)了化合物（11)對(duì)?03和01]145細(xì)胞具有增殖抑制作 用。
[0102] 結(jié)論，本試驗(yàn)中通過(guò)CCK-8法和集落形成試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證化合物（Π )對(duì)前列腺癌細(xì)胞 株P(guān)C3和DU145的作用，且抑制作用具有濃度一時(shí)間依賴性關(guān)系?；衔铮é?)可能成為晚期 前列腺癌治療中的一個(gè)具有潛力的選擇。
[0103] 表3不同濃度化合物（Π )作用于PC3后的細(xì)胞存活率
[0105] 表4不同濃度化合物（Π )作用于DU145后的細(xì)胞存活率
[0107]^表5不同濃度化合物（Π )作用下PC3和DU145的集落形成率
[0108]
[0109]與上述類似地，將本發(fā)明實(shí)施例中的組分A、組分B和組分C組合的藥物進(jìn)行如上實(shí) 驗(yàn)通過(guò)CCK-8法和集落形成試驗(yàn)，
[0110] CCK-8法證明：不同濃度藥物對(duì)前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3和DU145的生長(zhǎng)均有抑制作用。 2.5，5.0，10.0，20.0 mg/L組合的藥物作用兩種細(xì)胞24，48和72h后的存活率如下表6和表7所 示。其中，10.0mg/L組合的藥物作用于PC3和DU145細(xì)胞24,48,72h后的細(xì)胞存活率分別為 45.0%，30.0%，8.3%和37.8%，20.6%，9.7%。兩因素方差分析示不同濃度與不同時(shí)間處 理組之間差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈〇.〇5)，組合的藥物對(duì)PC3和DU145的生長(zhǎng)抑制呈時(shí)間濃度 依賴，并且組合的藥物的抑制效果遠(yuǎn)比單組分A或B均好。
[0111] 表6不同濃度組合的藥物作用于PC3后的細(xì)胞存活率
[0113] 表7不同濃度組合的藥物作用于DU145后的細(xì)胞存活率
[0115] ~集落形成試驗(yàn)證明：對(duì)照組PC3和DU145的集落形成率分別為67.7和64%，而2.5， 5 · 0，10.0，20.0 mg/L 組合的藥物處理組分別為 52 · 70 %，41 · 33 %，30.35 %，20.10 % 和 41.70 %，30.00 %，22.70 %，11.30 % (見(jiàn)表8)。這進(jìn)一步證實(shí)了組合的藥物對(duì)PC3和DU145細(xì) 胞具有增殖抑制作用，并且效果優(yōu)于單組分A或B。
[0116] 表8不同濃度組合的藥物作用下PC3和DU145的集落形成率
[0117]
[0118] 結(jié)論：由45 %的式（I)的組分A、35 %的下式（Π )的組分B和20 %的組分C組成的藥 物，具有很好的抑制前列腺癌的作用，它對(duì)前列腺癌的抑制作用明顯強(qiáng)于單組分A和單組分 B的單獨(dú)作用。
[0119] 實(shí)施例2:-種抑制前列腺癌的藥，按照重量百分含量計(jì)，它由40%的式（I)的組分 A、35%的下式（Π )的組分B和25%的組分C組成。
[0120] 實(shí)施例3:-種抑制前列腺癌的藥，按照重量百分含量計(jì)，它由50%的式（I)的組分 A、30%的下式（Π )的組分B和20%的組分C組成。
[0121] 實(shí)施例4: 一種抑制前列腺癌的藥，按照重量百分含量計(jì)，它由50%的式（I)的組分 A、35%的下式（Π )的組分B和15%的組分C組成。
[0122] 實(shí)施例5:-種抑制前列腺癌的藥，按照重量百分含量計(jì)，它由45%的式（I)的組分 A、30%的下式（Π )的組分B和25%的組分C組成。
[0123] 實(shí)施例6:片劑的制備：先制得實(shí)施例1-5任意一項(xiàng)的藥物，再利用有機(jī)酸如酒石 酸、或檸檬酸或甲酸或乙二酸等、無(wú)機(jī)酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，按其與賦形劑重量 比為1:9的比例加入賦形劑，制粒壓片。
[0124] 實(shí)施例7: 口服液制備：先制得實(shí)施例1-5任意一項(xiàng)的藥物，再利用有機(jī)酸如酒石 酸、或檸檬酸或甲酸或乙二酸等、無(wú)機(jī)酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，按常規(guī)口服液制法 制成口服液。
[0125] 實(shí)施例8:膠囊劑或顆粒劑的制備:先制得實(shí)施例1-5任意一項(xiàng)的藥物，再利用有機(jī) 酸如酒石酸、或檸檬酸或甲酸或乙二酸等、無(wú)機(jī)酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，按其與賦 形劑重量比為1:9的比例加入賦形劑，制成膠囊或顆粒劑。
[0126] 實(shí)施例9:注射液的制備:先制得實(shí)施例1-5任意一項(xiàng)的藥物，再利用有機(jī)酸如酒石 酸、或檸檬酸或甲酸或乙二酸等、無(wú)機(jī)酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，按常規(guī)加注射用 水，精濾，灌封滅菌制成注射液。
[0127] 實(shí)施例10:無(wú)菌粉針的制備:先制得實(shí)施例1-5任意一項(xiàng)的藥物，再利用有機(jī)酸如 酒石酸、或檸檬酸或甲酸或乙二酸等、無(wú)機(jī)酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，將其溶于無(wú)菌 注射用水中，攪拌使溶，用無(wú)菌抽濾漏斗過(guò)濾，再無(wú)菌精濾，分裝于安瓿中，低溫冷凍干燥后 無(wú)菌熔封得粉針劑。
[0128] 上述實(shí)施例的作用在于說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種抑制前列腺癌的藥，其特征在于：它由如下式（i)的組分a、如下式（n)的組分b 和組分C組成，按照重量百分含量計(jì)，組分A占總重量的40-50% ; 組分B占總重量的30-40 % ; 組分C占總重量的15-25 %。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抑制前列腺癌的藥，其特征在于： 化合物（I)從祖師麻分離獲得，分離步驟包括： S01:將祖師麻干燥、粉碎，用75~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依 次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和 正丁醇萃取物； S02:步驟SOI中乙酸乙酯萃取物用10 %乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用75~85 %乙醇洗脫10 個(gè)柱體積，收集75~85 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得乙醇洗脫物浸膏； S03:步驟S02中乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為75:1、45:1、20:1、12:1 和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分； S04:步驟S03中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、12:1和5:1的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分； S05:步驟S04中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的 甲醇水溶液等度洗脫，收集10~12個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。 化合物（n)從貓爪草中提取分離獲得，分離步驟包括： a:將貓爪草的干燥塊根粉碎，用75~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇 味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃 取物和正丁醇萃取物； b:步驟a中乙酸乙酯萃取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用15%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用75% 乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫物浸膏； c:步驟b中75 %乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1、45:1、20:1、10:1 和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分； d:步驟c中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為25:1、20:1和10:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分； e:步驟d中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇 水溶液等度洗脫，收集8~10個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（n)。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種抑制前列腺癌的藥，其特征在于:步驟S01和步驟a中，均 用80 %乙醇熱回流提取，合并提取液。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種抑制前列腺癌的藥，其特征在于:步驟S02中用10%乙醇 洗脫之間，乙酸乙酯萃取物需要采用大孔吸附樹(shù)脂除雜;步驟S02和步驟a中，所述大孔樹(shù)脂 均為AB-8型大孔吸附樹(shù)脂。5. 抑制前列腺癌的藥，其特征在于:包含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的藥和藥學(xué)上 可接受的載體。
【專利摘要】本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于抑制前列腺癌的藥物。一種抑制前列腺癌的藥，它由如下二萜類化合物(Ⅰ)的組分A、如下二萜類化合物式(Ⅱ)的組分B和Norzoanthamine組成；體外試驗(yàn)證明該化合物對(duì)前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3和DU145有抑制作用，且抑制作用具有濃度——時(shí)間依賴性關(guān)系，可以用來(lái)開(kāi)發(fā)成抑制前列腺癌的藥物。
【IPC分類】A61K31/235, A61K31/22, A61P35/00, A61P13/08, A61K31/4748
【公開(kāi)號(hào)】CN105726540
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610070758
【發(fā)明人】王賽波
【申請(qǐng)人】溫州統(tǒng)益生物醫(yī)藥科技有限公司
【公開(kāi)日】2016年7月6日
【申請(qǐng)日】2016年1月31日