技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種EYFP基因標(biāo)記根瘤菌的方法，所述方法包括以下步驟：一、將EYFP?pUC19載體酶切純化后獲得EYFP產(chǎn)物；二、將EYFP產(chǎn)物與載體pBBR1MCS?2相連，酶切驗(yàn)證，將構(gòu)建的EYFP?pBBR1MCS?2轉(zhuǎn)入E.coli?DH5α中；三、將供體菌EYFP?pBBR1MCS?2、輔助菌pRK2013、受體菌慢生型大豆根瘤菌三親本雜交；四、同源重組：通過在KmR的平板上生長(zhǎng)，篩選重組子；五、PCR驗(yàn)證，確定篩選的重組子已經(jīng)插入到慢生型大豆根瘤菌的基因組中，而基因組中不含有野生株；六、顯微鏡下觀察EYFP蛋白基因表達(dá)。本發(fā)明采用同源重組的方法，將EYFP與載體pBBR1MCS?2連接，通過KmR抗性篩選重組子后，采用PCR法篩選突變株，確保插入染色中，使其穩(wěn)定表達(dá)。

技術(shù)研發(fā)人員：于徳水;甄濤;張先成;于盛竹;曲娟娟
受保護(hù)的技術(shù)使用者：黑龍江省科學(xué)院微生物研究所
文檔號(hào)碼：201610847787
技術(shù)研發(fā)日：2016.09.23
技術(shù)公布日：2017.02.22