1.在CRISPR-Cas9 特異性敲除人PD-1基因中用于靶向人PD-1基因的 gRNA，所述 gRNA 在人PD-1基因上的靶序列符合 5’- N (20)-NGG3’ 或 者 5’-CCN- N (20)N-3’的序列排列規(guī)則，在人PD-1基因上的靶序列是唯一的，其特征在于：所述 gRNA 在人PD-1基因的靶向位點(diǎn)位于人PD-1基因的第2外顯子上。
2.根據(jù)權(quán)利要求 1所述的在 CRISPR-Cas9 特異性敲除人PD-1基因中用于靶向人PD-1基因的 gRNA，其特征在于：其對(duì)應(yīng)的 DNA 序列如序列表 SEQ ID NO. 1-18任意一條序列所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的在 CRISPR-Cas9 特異性敲除人PD-1基因中用于靶向人PD-1基因的 gRNA，其特征在于：該gRNA在腫瘤細(xì)胞治療中具有廣泛的應(yīng)用前景。
4.CRISPR-Cas9 特異性敲除人PD-1基因的方法，具體涉及如下步驟 ：
4.1如權(quán)利要求 1-3 任意一項(xiàng)所述的 gRNA，在其對(duì)應(yīng) DNA 序列的 5’末端加上 CACC 得到正向寡核苷酸序列，在其互補(bǔ)鏈的 5’末端加上 AAAC 得到反向寡核苷酸序列，分別合成正向和反向寡核苷酸序列，然后將合成的序列變性、退火，得到具有 BbsI 粘性末端的雙鏈 DNA 片段 ；
4.2將步驟（1）中合成的雙鏈 DNA 片段和用 BbsI 酶切過的px458 載體進(jìn)行連接，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5a中，涂布于帶有氨芐青霉素抗性的LB平板上，篩選陽性菌落，提取陽性菌落質(zhì)粒進(jìn)行分析及測(cè)序，確定gRNA 表達(dá)載體構(gòu)建成功，命名為 px458- PD-1 -gRNA ；
4.3將步驟（2）構(gòu)建的px458-PD-1-gRNA 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人T淋巴細(xì)胞，用PX458空載體（pSpCas9（BB）），同時(shí)也轉(zhuǎn)染人T淋巴細(xì)胞作為對(duì)照；
4.4將步驟（3）中轉(zhuǎn)染24小時(shí)后的細(xì)胞收集，流式分選出GFP標(biāo)記的細(xì)胞，提取DNA，PCR擴(kuò)增PD-1靶位點(diǎn)區(qū)域，T7E1酶切鑒定靶位點(diǎn)的突變效率，篩選得到敲除效率較高的靶位點(diǎn)。