用于預(yù)測(cè)或監(jiān)控c-Met抑制劑效力的生物標(biāo)志物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本文提供了通過(guò)分析一種或多種生物標(biāo)志物來(lái)預(yù)測(cè)和/或監(jiān)控c-Met抑制劑效力 的方法；用于預(yù)測(cè)和/或監(jiān)控c-Met抑制劑效力的組合物，包括檢測(cè)生物標(biāo)志物的物質(zhì)；用 于選擇適于應(yīng)用c-Met抑制劑的受試者的組合物，包括檢測(cè)生物標(biāo)志物的物質(zhì)；用一種或 多種生物標(biāo)志物來(lái)預(yù)測(cè)和/或監(jiān)控c-Met抑制劑效力的方法；用一種或多種生物標(biāo)志物選 擇適于應(yīng)用c-Met抑制劑的受試者的方法；和預(yù)防和/或治療癌癥的方法，包括向選擇的受 試者施用c-Met抑制劑。
[0002] 相關(guān)技術(shù)的描述
[0003] 生物標(biāo)志物通常指經(jīng)過(guò)測(cè)量的特性（例如，天然存在的蛋白），其可用作外部因素 (例如，損傷）在生物體內(nèi)引起的一些變化的指示?，F(xiàn)已有活躍的研究將生物標(biāo)志物應(yīng)用于 診斷多種疾病，比如癌癥、中風(fēng)、癡呆等，以及預(yù)測(cè)或監(jiān)控一些試劑的治療作用。與藥物研發(fā) 有關(guān)的生物標(biāo)志物包括藥效標(biāo)志物（ro標(biāo)志物）和預(yù)測(cè)性標(biāo)志物，前者指示藥物是否在體 內(nèi)是功能上有效的，后者在用藥前指示對(duì)具體藥物最可能的應(yīng)答。這樣的標(biāo)志物的使用有 助于建立藥物的臨床策略。例如，可將經(jīng)設(shè)計(jì)以指示對(duì)于藥物作用的靈敏度或抗性的預(yù)測(cè) 性標(biāo)志物應(yīng)用于患者的選擇以允許更有效的藥物治療，且可利用藥效標(biāo)志物來(lái)監(jiān)控單獨(dú)的 患者中的藥物活性，將它們綜合可導(dǎo)致確立有效的治療策略。并且，即使在沒(méi)有預(yù)測(cè)性標(biāo)志 物的情況下，藥效標(biāo)志物允許對(duì)藥物的反應(yīng)進(jìn)行早期監(jiān)控，從而允許在早期階段鑒別藥物 有效組和藥物無(wú)效組。從而，可開(kāi)發(fā)更有效和成功的藥物療法。此外，當(dāng)應(yīng)用于以濃度函數(shù) 監(jiān)控藥物應(yīng)答時(shí)，藥效標(biāo)志物可以作為計(jì)算該藥物適宜劑量的指標(biāo)。
[0004] 目前為止，癌癥是幾大致死原因之一。雖然醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展帶來(lái)了癌癥治療的顯 著進(jìn)步，但在過(guò)去的二十多年里，所有癌癥的5年存活率僅提高了 10%。這是因?yàn)?，癌癥的 特性，比如快速生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等，使其難以在適宜的時(shí)間進(jìn)行診斷和治療。對(duì)能提供癌癥療法 效力信息的適宜生物標(biāo)志物的鑒定可極大地影響在最佳時(shí)間提供最適宜的癌癥治療的能 力。例如，患有肺癌的患者在癌癥分類、基因型和蛋白分泌方面可彼此各不相同，從而必須 利用不同且合適的治療劑進(jìn)行治療。對(duì)于用特定藥物進(jìn)行的化療，對(duì)應(yīng)的生物標(biāo)志物（若 存在）將減少錯(cuò)誤試驗(yàn)的次數(shù)而增加成功的可能性。在這方面，非常重要的是開(kāi)發(fā)用于預(yù) 測(cè)和監(jiān)控抗癌治療劑效力的生物標(biāo)志物。適當(dāng)?shù)纳飿?biāo)志物若成功開(kāi)發(fā)，可對(duì)抗癌藥物的 應(yīng)用和價(jià)值以及利用其進(jìn)行治療的成功率產(chǎn)生巨大貢獻(xiàn)。
[0005] c-Met是肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF)受體。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF)作為多功能細(xì)胞因 子發(fā)揮作用，其結(jié)合c-Met受體的胞外結(jié)構(gòu)域以調(diào)節(jié)各種正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中的細(xì)胞分 裂、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和形態(tài)發(fā)生。c-Met受體是具有酪氨酸激酶活性的膜受體。c-Met是原癌基因， 編碼代表性的受體酪氨酸激酶。其間或參與負(fù)責(zé)癌癥發(fā)展的多種機(jī)制，比如癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移、 遷移、血管發(fā)生和癌細(xì)胞侵入等，而與受體HGF無(wú)關(guān)，因此作為抗癌治療的靶標(biāo)而受到密切 關(guān)注。因此已開(kāi)發(fā)了靶向的治療，比如針對(duì)c-Met的抗體。
[0006] 用研發(fā)的c-Met靶向藥物進(jìn)行的治療可能能更有效地治療癌癥，若存在能夠預(yù)測(cè) 和監(jiān)控藥物療效以選擇適宜于該藥物治療的患者并監(jiān)控患者對(duì)所述藥物的應(yīng)答的生物標(biāo) 志物，則成功的可能性更大。因此，生物標(biāo)志物的應(yīng)用可用于建立有效的治療策略。
[0007] 發(fā)明簡(jiǎn)述
[0008] -個(gè)實(shí)施方案提供了生物標(biāo)志物，其用于預(yù)測(cè)和/或監(jiān)控c-Met抑制劑的治療 作用或用于選擇適于應(yīng)用c-Met抑制劑的受試者，其中所述生物標(biāo)志物包括選自由IL-8、 b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和編碼這些蛋白的核酸組成的組的至少一種。
[0009] 另一實(shí)施方案提供了生物標(biāo)志物的用途，所述生物標(biāo)志物用于預(yù)測(cè)和/或監(jiān)控 c-Met抑制劑的治療作用或用于選擇適于應(yīng)用c-Met抑制劑的受試者，其中所述生物標(biāo)志 物包括選自由IL-8、b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和編碼這些蛋白的核酸組成的組的至少一 種。
[0010] 另一實(shí)施方案提供了組合物和試劑盒，所述組合物和試劑盒用于預(yù)測(cè)和/或監(jiān)控 c-Met抑制劑效力或用于選擇適于應(yīng)用c-Met抑制劑的受試者，所述組合物和試劑盒包括 與選自由IL-8、b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和編碼這些蛋白的核酸組成的組的至少一種相互 作用的物質(zhì)。
[0011] 另一實(shí)施方案提供了物質(zhì)，所述物質(zhì)與選自由IL-8、b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和 編碼這些蛋白的核酸組成的組的至少一種相互作用，以用于預(yù)測(cè)和/或監(jiān)控c-Met抑制劑 效力或用于選擇適于應(yīng)用c-Met抑制劑的受試者。
[0012] 另一實(shí)施方案提供了物質(zhì)的用途，所述物質(zhì)與選自由IL-8、b-IG-H3、MIF、KRAS/ BRAF和編碼這些蛋白的核酸組成的組的至少一種相互作用，所述用途為用于預(yù)測(cè)和/或監(jiān) 控c-Met抑制劑效力或用于選擇適于應(yīng)用c-Met抑制劑的受試者。
[0013] 還提供了預(yù)測(cè)和/或監(jiān)控c-Met抑制劑效力或選擇適于應(yīng)用c-Met抑制劑的受試 者的方法，包括在生物樣品中測(cè)量選自由IL-8、b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和編碼這些蛋白 的核酸組成的組的至少一種的存在（存在/不存在）、水平和/或突變。
[0014] 另一實(shí)施方案提供了抑制c-Met或預(yù)防和/或治療癌癥的方法，該方法包括將 c-Met抑制劑施用于通過(guò)本文方法選出的適于應(yīng)用c-Met抑制劑的受試者。
[0015] 另一實(shí)施方案提供了 c-Met抑制劑或包括c-Met抑制劑的藥物組合物，用于在受 試者中抑制c-Met和/或治療癌癥，其中所述受試者相較于其中c-Met抑制劑無(wú)效的參照 樣品具有高水平的IL-8或編碼IL-8的核酸；在施用c-Met抑制劑之后（相較于施用之前 的水平）顯示了降低的水平的IL-8、b-IG-H3、MIF和/或編碼其的核酸；和/或具有KRAS、 BRAF和/或編碼其的核酸的突變。
[0016]另一實(shí)施方案提供了 c-Met抑制劑或包括c-Met抑制劑的藥物組合物的用途，用 于在受試者中抑制c-Met和/或治療癌癥，其中所述受試者相較于其中c-Met抑制劑無(wú)效 的參照樣品具有高水平的IL-8或編碼IL-8的核酸；在施用c-Met抑制劑之后（相較于施 用之前的水平）顯示了降低的水平的IL-8、bIG-H3、MIF和/或編碼其的核酸；和/或具有 KRAS、BRAF和/或編碼其的核酸的突變。
【附圖說(shuō)明】
[0017]圖1A、1B、1C、1D和1E顯示抗c-Met抗體的抗癌活性，是在移植了 Lovo細(xì)胞（圖 1A)、HT29 細(xì)胞（圖 IB)、EBC-1 細(xì)胞（圖 1C)、Hs746T 細(xì)胞（圖 1D)和 MKN45 細(xì)胞（圖 1E) 的小鼠模型中，因抗c-Met抗體處理導(dǎo)致的腫瘤尺寸變化。
[0018] 圖2是移植了癌細(xì)胞的小鼠模型中IL_8水平的圖，顯不了 IL_8水平和對(duì)于抗 c-Met抗體的反應(yīng)性之間的關(guān)系。
[0019] 圖3的多個(gè)圖顯示，在移植了人癌細(xì)胞的小鼠模型中，反應(yīng)者組和無(wú)反應(yīng)者組應(yīng) 答不同劑量的抗c-Met抗體所致的IL-8血清水平變化。
[0020] 圖4顯示，在移植了患者來(lái)源的腫瘤組織的小鼠模型中，對(duì)照（載體（PBS)處理） 血清樣品中的IL-8水平。
[0021] 圖5是，在移植了患者來(lái)源的腫瘤組織的小鼠模型中，抗c-Met抗體處理組和未處 理組（對(duì)照PBS處理）的血清樣品中的IL-8水平，顯示了抗c-Met抗體處理之后，抗c-Met 抗體的抗癌效力和IL-8水平的變化之間的關(guān)系。
[0022] 圖6是顯示，在移植了典型的癌細(xì)胞系（EBC-1)的小鼠模型中，抗c-Met抗體處理 之后腫瘤尺寸的變化。
[0023] 圖7是顯示，在移植了典型的癌細(xì)胞系（Hs746T)的小鼠模型中，抗c-Met抗體處 理之后腫瘤尺寸的變化。
[0024] 圖8是顯示，在移植了典型的癌細(xì)胞系（EBC-1)的小鼠模型中，抗c-Met抗體處理 之后IL-8水平隨時(shí)間的變化。
[0025] 圖9是顯示，在移植了典型的癌細(xì)胞系（Hs746T)的小鼠模型中，抗c-Met抗體處 理之后IL-8水平隨時(shí)間的變化。
[0026] 圖10是顯示，在移植了 U87MG的小鼠模型中，抗c-Met抗體處理之后腫瘤尺寸的 變化。
[0027] 圖11顯示了用蛋白陣列盒進(jìn)行化學(xué)發(fā)光免疫分析所測(cè)量的，U87MG細(xì)胞中蛋白表 達(dá)模式的變化。
[0028] 圖12是顯示，在抗c-Met抗體處理之后，在來(lái)自移植了不同癌細(xì)胞的小鼠模型的 血清中bIG_H3水平的變化。
[0029] 圖13是顯示，在抗c-Met抗體處理之后，在來(lái)自移植了患者來(lái)源腫瘤組織的小鼠 模型的血清中bIG-H3水平的變化。
[0030] 圖14是顯示，在抗C-Met抗體處理之后，在來(lái)自移植了患者來(lái)源腫瘤組織的小鼠 模型的癌組織裂解物中bIG-H3水平的變化。
[0031] 圖15顯示了用蛋白陣列試劑盒進(jìn)行化學(xué)發(fā)光免疫分析所測(cè)量的，在移植了患者 來(lái)源腫瘤組織的小鼠模型（LXFA623)中蛋白表達(dá)模式的變化。
[0032] 圖16是顯示，在抗c-Met抗體處理之后，在來(lái)自移植了不同癌細(xì)胞系的小鼠模型 的血清中MIF水平的變化。
[0033] 圖17是顯示，在抗c-Met抗體處理之后，在來(lái)自移植了患者來(lái)源腫瘤組織的小鼠 模型的血清中MIF水平的變化。
[0034] 圖18顯示了通過(guò)Western印跡所測(cè)量的，在移植了患者來(lái)源的癌細(xì)胞的小鼠模型 中c-Met蛋白的表達(dá)水平。
[0035] 圖19的多個(gè)圖顯示，在移植了患者來(lái)源的腫瘤組織的小鼠模型中存在或不存在 K-RAS和B-RAF突變的情況下，在抗c-Met抗體處理之后腫瘤尺寸的變化。
[0036] 圖20的多個(gè)圖顯示，抗c-Met抗體反應(yīng)者細(xì)胞系對(duì)其他c-Met抑制劑克唑替尼和 PHA665752處理的反應(yīng)性。
[0037] 圖21包含示出抗c-Met抗體無(wú)反應(yīng)者細(xì)胞系對(duì)其他c-Met抑制劑；克唑替尼和 PHA665752的處理的反應(yīng)性的圖。
[0038] 圖22的多個(gè)圖顯示，在不同c-Met抑制劑L3-lY/IgG2、克唑替尼和PHA665752處 理之后，在抗c-Met抗體反應(yīng)者細(xì)胞系的培養(yǎng)液中IL-8的相對(duì)水平（％ )。
[0039] 圖23的多個(gè)圖顯示，在不同c-Met抑制劑L3-lY/IgG2、克唑替尼和PHA665752處 理之后，在抗c-Met抗體無(wú)反應(yīng)者細(xì)胞系的培養(yǎng)液中IL-8的相對(duì)水平（％ )。
[0040] 發(fā)明詳述
[0041] 一個(gè)實(shí)施方案提供了用于預(yù)測(cè)和/或監(jiān)控c-Met抑制劑的治療作用或選擇適于應(yīng) 用c-Met抑制劑的受試者的生物標(biāo)志物，其中所述生物標(biāo)志物包括選自由IL-8、b-IG-H3、 MIF、KRAS/BRAF和編碼這些蛋白的核酸組成的組的至少一種。
[0042] 另一實(shí)施方案提供了用于預(yù)測(cè)和/或監(jiān)控c-Met抑制劑的治療作用或選擇適于 應(yīng)用c-Met抑制劑的受試者的生物標(biāo)志物的用途，其中所述生物標(biāo)志物包括選自由IL-8、 b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和編碼這些蛋白的核酸組成的組的至少一種。
[0043] 另一實(shí)施方案提供了用于預(yù)測(cè)和/或監(jiān)控c-Met抑制劑效力或選擇可應(yīng)用c-Met 抑制劑（即，將表現(xiàn)出效力）的受試者的組合物和試劑盒，所述組合物和試劑盒包括與選自 由IL-8、b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和編碼這些蛋白的核酸組成的組的至少一種相互作用的 物質(zhì)。
[0044] 另一實(shí)施方案提供了包括與選自由IL-8、b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和編碼這些蛋 白的核酸組成的組的至少一種相互作用的物質(zhì)的組合物和試劑盒，其用于預(yù)測(cè)和/或監(jiān)控 c-Met抑制劑效力或選擇適于應(yīng)用c-Met抑制劑的受試者，或用于制備用于預(yù)測(cè)和/或監(jiān)控 c-Met抑制劑效力或選擇適于應(yīng)用c-Met抑制劑的受試者的試劑（藥物組合物）。
[0045] 另一實(shí)施方案提供了與選自由IL-8、b-IG-H3、MIF、KRAS/BRAF和編碼這些蛋白的 核酸組成的組的至少一種相互作用的物質(zhì)，其用于預(yù)測(cè)和/