變體具有一條具有與CL結(jié)構(gòu)域串聯(lián)連接的VL結(jié)構(gòu)域的多肽 鏈（VL1-L1-VL2-L2-CL)和第二條具有與CH1結(jié)構(gòu)域以相反方向串聯(lián)連接的互補(bǔ)VH結(jié) 構(gòu)域的多肽鏈（VH2-L3-VH1-L4-CH1)，其中所述多肽鏈形成交叉的輕鏈-重鏈對(duì)。在一 些實(shí)施方案中，所述第二多肽可進(jìn)一步與Fc結(jié)構(gòu)域連接（VH2-L3-VH1-L4-CH1-FC)。在 某些實(shí)施方案中，接頭L3至少是接頭L1長(zhǎng)度的兩倍并且/或者接頭L4至少是接頭L2 長(zhǎng)度的兩倍。舉例來(lái)說(shuō)，L1和L2在長(zhǎng)度上可以是1-3個(gè)氨基酸殘基，L3在長(zhǎng)度上可以 是2至6個(gè)氨基酸殘基，且L4在長(zhǎng)度上可以是4至7個(gè)氨基酸殘基。合適的接頭的實(shí) 例包括單甘氨酸（Gly)殘基；雙甘氨酸肽（Gly-Gly);三肽（Gly-Gly-Gly);具有四個(gè)甘 氨酸殘基的肽（Gly-Gly-Gly-Gly);具有五個(gè)甘氨酸殘基的肽（Gly-Gly-Gly-Gly-Gly); 具有六個(gè)甘氨酸殘基的肽（Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly);具有七個(gè)甘氨酸殘基的肽 (Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly);具有八個(gè)甘氨酸殘基的肽（Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly -Gly-Gly)?？墒褂冒被釟埢钠渌M合如肽Gly-Gly-Gly-Gly-Ser和肽Gly-Gly-Gly-G ly-Ser_Gly-Gly-Gly-Gly-Ser〇
[0105]在一些實(shí)施方案中，結(jié)合多肽包括免疫粘附素分子，其包含與抗體恒定區(qū) 融合的非抗體結(jié)合區(qū)（例如，受體、配體或細(xì)胞粘附分子）（參見(jiàn)，例如，Ashkenazi 等，Methods, 19958 (2)，104 - 115,其在本文以其全文通過(guò)提述并入）。
[0106] 在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合多肽包括免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域。合適的免疫球蛋白 樣結(jié)構(gòu)域包括但不限于纖連蛋白結(jié)構(gòu)域（參見(jiàn)，舉例來(lái)說(shuō)，Koide等）（2007)，Meth〇dsMol.Biol. 352 :95 - 109,其在本文通過(guò)提述以其全文并入）、DARPin(參見(jiàn)，舉例來(lái)說(shuō)，Stumpp等 (2008)DrugDiscov.Today13(15 - 16) :695 - 701，其在本文通過(guò)提述以其全文并入）、蛋 白A的Z結(jié)構(gòu)域（參見(jiàn)，Nygren等（2008)FEBSJ.275(ll) :2668 - 76,其在本文通過(guò)提述以 其全文并入）、Lipocalins(參見(jiàn)，舉例來(lái)說(shuō)，Skerra等（2008)FEBSJ.275(ll) :2677 - 83， 其在本文通過(guò)提述以其全文并入）、Affi1ins(參見(jiàn)，舉例來(lái)說(shuō)，Ebersbach等（2007)J.Mol. Biol. 372(1) :172 - 85,其在本文通過(guò)提述以其全文并入）、Affitins(參見(jiàn)，舉例來(lái)說(shuō)， Krehenbrink等（2008).J.Mol.Biol.383(5) :1058 - 68,其在本文通過(guò)提述以其全文并 入）、Avimers(參見(jiàn)，舉例來(lái)說(shuō)Silverman等（2005)Nat.Biotechno1. 23 (12) : 1556 - 61，其 在本文通過(guò)提述以其全文并入）、Fynomers(參見(jiàn)，舉例來(lái)說(shuō)，Grabulovski等（2007)JBiol Chem282(5) :3196 - 3204,其在本文通過(guò)提述以其全文并入）和Kunitz結(jié)構(gòu)域肽（參見(jiàn)， 舉例來(lái)說(shuō)，Nixon等（2006)CurrOpinDrugDiscovDevel9(2) :261_8,其在本文通過(guò)提 述以其全文并入）。
[0107]III.N-連接聚糖
[0108] 在一些實(shí)施方案中，本文公開(kāi)的結(jié)合多肽的Fc結(jié)構(gòu)域在根據(jù)EU編號(hào)的298位 (N298)的工程化精氨酸處是糖基化的。N-連接聚糖通常通過(guò)糖基酰胺連接基連接至 N298側(cè)鏈的氮基團(tuán)。但也可采用其它合適的本領(lǐng)域認(rèn)可的連接基。
[0109] 任何類(lèi)型的天然存在或合成的（即，非天然的）N-連接聚糖可連接至N114。舉例 來(lái)說(shuō)，聚糖可以是天然聚糖或工程化的包含非天然連接基的聚糖。在某些實(shí)施方案中，聚糖 包含可被氧化（例如，通過(guò)高碘酸鹽處理）的糖來(lái)產(chǎn)生適于與效應(yīng)物部分（例如，活性醛基 團(tuán)）偶聯(lián)的基團(tuán)。合適的可被氧化的糖包括但不限于半乳糖和唾液酸（例如，N-乙酰神經(jīng) 氨酸）。在一些實(shí)施方案中，所述聚糖是雙觸角聚糖。在一些實(shí)施方案中，聚糖是天然存在 的哺乳動(dòng)物糖形。
[0110] 糖基化可通過(guò)本領(lǐng)域任何已知的方式實(shí)現(xiàn)。在一些實(shí)施方案中，所述糖基化通過(guò) 在能夠進(jìn)行N-連接糖基化的細(xì)胞中表達(dá)結(jié)合多肽獲得。可采用任何天然或工程化的細(xì)胞 (例如，原核或真核）。大體上，采用哺乳動(dòng)物細(xì)胞來(lái)影響糖基化。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中產(chǎn)生的 聚糖通常指復(fù)合N-聚糖（參見(jiàn)，例如，DrickamerK,TaylorME(2006)。Introductionto Glycobiology，第2版，其在本文以其全文通過(guò)提述并入）。這些復(fù)合N-聚糖具有通常具有 二至六條外部支鏈，所述外部支鏈具有與內(nèi)部核心結(jié)構(gòu)Man3GlcNAc2連接的唾液酸唾液酰 乳糖胺（sialyllactosamine)序列。復(fù)合N-聚糖至少具有一條支鏈，且優(yōu)選地具有至少兩 個(gè)交替的GlcNAc和半乳糖（Gal)殘基來(lái)終止寡糖，例如，舉例來(lái)說(shuō)：NeuNAc-;NeuAca2, 6 GalNAcal-;NeuAca2,3Gal0 1，3GalNAcal-;和NeuAca2,3/6Gal0 1，4GlcNAc M.;此外，硫酸酯可存在于半乳糖、GalNAc和GlcNAc殘基上，而磷酸酯可存在于甘露糖殘 基上。NeuAc可以是0-乙?；幕蛴蒒euGl(N-羥乙酰神經(jīng)氨酸）取代。復(fù)合N-聚糖還可 以具有將GlcNAc和核心巖藻糖（Fuc) -分為二的鏈內(nèi)取代。
[0111] 除此之外或可替換地，糖基化可在體外通過(guò)酶的方式實(shí)現(xiàn)或修飾。舉例來(lái)說(shuō)，可采 用一種或多種糖基轉(zhuǎn)移酶來(lái)將特定的糖殘基添加至N298,且可采用一種或多種糖苷酶來(lái)從 N-連接聚糖去除不需要的糖。這些酶方法為本領(lǐng)域已知（參見(jiàn)，例如，W0/2007/005786,其 在本文以其全文通過(guò)提述并入）。
[0112]IV?免疫效應(yīng)物功能和Fc修飾
[0113]在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的結(jié)合多肽可包含抗體恒定區(qū)（例如，IgG恒定區(qū)，例 如，人IgG恒定區(qū)，例如，人IgGl或IgG4恒定區(qū)），其介導(dǎo)一種或多種效應(yīng)物功能。舉例來(lái) 說(shuō)，補(bǔ)體的C1組分與抗體恒定區(qū)的結(jié)合可激活補(bǔ)體系統(tǒng)。補(bǔ)體的激活在調(diào)理作用和細(xì)胞病 原體的裂解中至關(guān)重要。補(bǔ)體的激活還刺激炎癥應(yīng)答且可參與自身免疫性變態(tài)反應(yīng)。此外， 抗體經(jīng)由Fc區(qū)與在多種細(xì)胞上的受體結(jié)合，其中抗體Fc區(qū)上的Fc受體結(jié)合位點(diǎn)與細(xì)胞上 的Fc受體（FcR)結(jié)合。存在多種特異性針對(duì)不同種類(lèi)抗體的Fc受體，所述不同種類(lèi)的抗體 包括IgG(y受體）、IgE(e受體）、IgA(a受體）和IgM(y受體）?？贵w與細(xì)胞表面的Fc 受體的結(jié)合可觸發(fā)許多重要且多樣的生物應(yīng)答包括對(duì)抗體包被微粒的吞噬和破壞、免疫復(fù) 合體的清除、殺傷細(xì)胞對(duì)抗體包被靶細(xì)胞的裂解（稱(chēng)為抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性， 或ADCC)、炎癥介導(dǎo)物的釋放、胎盤(pán)轉(zhuǎn)移和對(duì)免疫球蛋白生產(chǎn)的控制。在優(yōu)選的實(shí)施方案中， 本發(fā)明的結(jié)合多肽（例如，抗體或其抗原結(jié)合片段）與Fc-Y受體結(jié)合。在可選的實(shí)施方 案中，本發(fā)明的結(jié)合多肽可包含恒定區(qū)，其缺乏一種或多種效應(yīng)物功能（例如，ADCC活性） 且/或不能與Fey受體結(jié)合。
[0114]本發(fā)明的某些實(shí)施方案包括如下抗體，在所述抗體中一個(gè)或多個(gè)恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域中 的至少一個(gè)氨基酸被缺失或以其他方式發(fā)生改變進(jìn)而提供了理想的生化特性，如降低或增 強(qiáng)的效應(yīng)物功能、非共價(jià)二聚化的能力、增加的定位于腫瘤位點(diǎn)的能力、降低的血清半衰期 或當(dāng)與具有大致相同的免疫原性的完整的、未改變的抗體相比增加的血清半衰期。舉例來(lái) 說(shuō)，本文所述的某些用于診斷和治療方法的抗體是結(jié)構(gòu)域缺失的抗體，其包括與免疫球蛋 白重鏈相似的多肽鏈，但缺乏一個(gè)或多個(gè)重鏈結(jié)構(gòu)域的至少一部分。舉例來(lái)說(shuō)，在某些抗體 中，修飾的抗體的恒定區(qū)的一個(gè)完整結(jié)構(gòu)域?qū)⒈蝗笔Вe例來(lái)說(shuō)，全部或部分CH2結(jié)構(gòu)域?qū)?被缺失。
[0115]在某些其它實(shí)施方案中，結(jié)合多肽包括源自不同抗體同種型的恒定區(qū)（例如，來(lái) 自?xún)煞N或更多種人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4的恒定區(qū)）。在其它實(shí)施方案中，結(jié)合多肽包括 嵌合鉸鏈（即，包含源自不同抗體同種型的鉸鏈結(jié)構(gòu)域的鉸鏈部分的鉸鏈，例如，來(lái)自IgG4 分子的上部鉸鏈結(jié)構(gòu)域和IgGl的中部鉸鏈結(jié)構(gòu)域）。在一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合多肽包括來(lái) 自人IgG4分子的Fc區(qū)或其部分以及在分子的核心鉸鏈區(qū)的Ser228Pro突變（Eu編號(hào)）。
[0116]在某些實(shí)施方案中，可使用本領(lǐng)域已知的技術(shù)來(lái)突變Fc部分以增加或降低效應(yīng) 物功能。舉例來(lái)說(shuō)，恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域的缺失或失活（通過(guò)點(diǎn)突變或其它方式）可降低循環(huán)中的 經(jīng)修飾抗體的Fc受體結(jié)合，進(jìn)而增加腫瘤定位。在其它情況中，與本發(fā)明一致的恒定區(qū)修 飾可能緩和補(bǔ)體結(jié)合并因此降低血清半衰期和偶聯(lián)的細(xì)胞毒素的非特異結(jié)合。而對(duì)恒定區(qū) 進(jìn)行的其它修飾可用于修飾二硫鍵或寡糖部分，其由于增加了抗原特異性和柔性而使定位 得以提高?？梢院苋菀椎厥褂霉拿庖邔W(xué)技術(shù)且無(wú)須過(guò)度實(shí)驗(yàn)就可測(cè)量和量化所述修飾 產(chǎn)生的生理學(xué)概貌、生物利用度以及其它生化效果，如腫瘤定位、生物分布和血清半衰期。
[0117] 在某些實(shí)施方案中，在本發(fā)明的抗體中采用的Fc結(jié)構(gòu)域是Fc變體。本文使用的 術(shù)語(yǔ)"Fc變體"指相對(duì)于所述Fc結(jié)構(gòu)域所來(lái)源的野生型Fc結(jié)構(gòu)域而言具有至少一個(gè)氨基 酸取代的Fc結(jié)構(gòu)域。舉例來(lái)說(shuō)，其中所述Fc結(jié)構(gòu)域源自人IgGl抗體，所述人IgGlFc結(jié) 構(gòu)域的Fc變體相對(duì)于所述Fc結(jié)構(gòu)域包含至少一個(gè)氨基酸取代。
[0118]Fc變體的氨基酸取代可位于Fc結(jié)構(gòu)域內(nèi)的任何位點(diǎn)（S卩，任何EU慣例下的氨基 酸位點(diǎn)）。在一個(gè)實(shí)施方案中，F(xiàn)c變體包括在位于鉸鏈結(jié)構(gòu)域或其部分中的氨基酸位點(diǎn)處 的取代。在另一實(shí)施方案中，F(xiàn)c變體包括在位于CH2結(jié)構(gòu)域或其部分的氨基酸位點(diǎn)處的取 代。在另一實(shí)施方案中，F(xiàn)c變體包括在位于CH3結(jié)構(gòu)域或其部分的氨基酸位點(diǎn)處的取代。 在另一實(shí)施方案中，F(xiàn)c變體包括在位于CH4結(jié)構(gòu)域或其部分的氨基酸位點(diǎn)處的取代。
[0119] 本發(fā)明的結(jié)合多肽可采用任何本領(lǐng)域認(rèn)可的已知可在效應(yīng)物功能和/或FcR結(jié) 合方面賦予改進(jìn)的（例如，降低或增強(qiáng)）Fc變體。所述Fc變體可包括，舉例來(lái)說(shuō)，國(guó)際 PCT公開(kāi)W088/07089A1、W096/14339A1、W098/05787A1、W098/23289A1、W099/51642A1、 W099/58572A1、W000/09560A2、W000/32767A1、W000/42072A2、W002/44215A2、 W002/060919A2, W003/074569A2, W004/016750A2, W004/029207A2, W004/035752A2, W004/063351A2, W004/074455A2, W004/099249A2, W005/040217A2, W005/070963AU W005/077981A2, W005/092925A2, W005/123780A2, W006/019447AU W006/047350A2 和W006/085967A2或U.S. Pat.Nos.5, 648, 260 ;5, 739, 277 ;5, 834, 250 ;5, 869, 046 ; 6, 096, 871；6, 121, 022；6, 194, 551；6, 242, 195；6, 277, 375；6, 528, 624；6, 538, 124； 6, 737, 056 ;6, 821，505 ;6, 998, 253 ;和7, 083, 784中公開(kāi)的任何一種氨