小時(shí)； 第三步壁材與益生菌混合溶液的制備：將IOg的海藻酸鈉、Ig的明膠和5g的凹土懸浮 至IOL的菌懸液中，混合均勾； 第四步微膠囊固化成型：將上述壁材與益生菌的混合溶液緩慢滴加入離子強(qiáng)度為 0. 05mol/L、pH6磷酸鹽緩沖液配制的濃度為5g/L的CaCl2*，于25°C固化成型20分鐘，獲 得粒徑大小為500 μ m大小的微膠囊粒子； 第五步真空冷凍干燥法獲得益生菌微膠囊制劑：真空冷凍干燥法條件為：上述微膠囊 粒子于-45°C預(yù)凍2小時(shí)，迅速移入冷凍干燥機(jī)冷凍干燥21小時(shí)，使微囊制劑含水量< 2%， 檢測活菌劑中活菌數(shù)為l〇1(lCFU/g。
[0021] 實(shí)施例3 :依以下步驟制備益生菌微膠囊制劑 第一步凹土的純化：將凹土采用電導(dǎo)率低于5 μ s/cm的去離子水浸泡22h，攪拌器以 1200rpm轉(zhuǎn)速攪拌22h，靜置分層，取中間層凹土懸液，以其15%的量繼續(xù)加入上述去離子 水，同樣操作，重復(fù)2次，于115°C烘干，研磨，過篩，取200目至140目細(xì)土備用； 第二步益生菌菌懸液的制備：將嗜酸乳桿菌培養(yǎng)至對數(shù)生長期后期，收集菌體，采用無 菌生理鹽水洗滌去培養(yǎng)基，將菌體懸浮于pH為2~9的磷酸鹽緩沖體系中，并將濃度調(diào)節(jié)至 109~10 1(lCFU/ml備用；嗜酸乳桿菌培養(yǎng)條件是：培養(yǎng)基為蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g， 檸檬酸氫二銨 2g，葡萄糖 20g，吐溫-80 lml，CH3COONaCH2O 5g，K2HP04*3H20 2g，MgSO4WH2O 0· 58g，MnS04*H20 (λ 25g，蒸餾水 1000ml，調(diào) ρΗ6· 2-6. 4 ;37°C靜置培養(yǎng) 20 小時(shí)； 第三步壁材與益生菌混合溶液的制備：將15g的海藻酸鈉、5g的明膠和IOg的凹土懸 浮至IOL的菌懸液中，混合均勻； 第四步微膠囊固化成型：將上述壁材與益生菌的混合溶液緩慢滴加入離子強(qiáng)度為〇. 10 mol/L、pH7磷酸鹽緩沖液配制的濃度為10g/L的CaCl2*，于30°C固化成型30分鐘，獲得 粒徑大小為1000 μ m大小的微膠囊粒子； 第五步真空冷凍干燥法獲得益生菌微膠囊制劑：真空冷凍干燥法條件為：上述微膠囊 粒子于-50°C預(yù)凍3小時(shí)，迅速移入冷凍干燥機(jī)冷凍干燥22小時(shí)，使微囊制劑含水量< 2%， 檢測活菌劑中活菌數(shù)為l〇nCFU/g。
[0022] 實(shí)施例4 :依以下步驟制備益生菌微膠囊制劑 第一步凹土的純化：將凹土采用電導(dǎo)率低于5 μ s/cm的去離子水浸泡23h，攪拌器以 1300rpm轉(zhuǎn)速攪拌23h，靜置分層，取中間層凹土懸液，以其20%的量繼續(xù)加入上述去離子 水，同樣操作，重復(fù)3次，于120°C烘干，研磨，過篩，取200目至140目細(xì)土備用； 第二步益生菌菌懸液的制備：將嗜熱鏈球菌培養(yǎng)至對數(shù)生長期后期，收集菌體，采用 無菌生理鹽水洗滌去培養(yǎng)基，將菌體懸浮于pH為5的磷酸鹽緩沖體系中，并將濃度調(diào)節(jié)至 101(lCFU/ml備用；嗜熱鏈球菌培養(yǎng)條件是：培養(yǎng)基同嗜酸乳桿菌；40°C靜置培養(yǎng)20小時(shí)； 第三步壁材與益生菌混合溶液的制備：將20g的海藻酸鈉、20g的明膠和15g的凹土懸 浮至IOL的菌懸液中，混合均勻； 第四步微膠囊固化成型：將上述壁材與益生菌的混合溶液緩慢滴加入離子強(qiáng)度為 0. 5mol/L、pH8磷酸鹽緩沖液配制的濃度為15g/L的CaCl2*，于35°C固化成型40分鐘，獲 得粒徑大小為1500 μ m大小的微膠囊粒子； 第五步真空冷凍干燥法獲得益生菌微膠囊制劑：真空冷凍干燥法條件為：上述微膠囊 粒子于-55°C預(yù)凍3小時(shí)，迅速移入冷凍干燥機(jī)冷凍干燥23小時(shí)，使微囊制劑含水量< 2%， 檢測活菌劑中活菌數(shù)為l〇12CFU/g。
[0023] 實(shí)施例5 :依以下步驟制備益生菌微膠囊制劑 第一步凹土的純化：將凹土采用電導(dǎo)率低于5 μ s/cm的去離子水浸泡24h，攪拌器以 HOOrpm轉(zhuǎn)速攪拌24h，靜置分層，取中間層凹土懸液，以其5%的量繼續(xù)加入上述去離子水， 同樣操作，重復(fù)2次，于105°C烘干，研磨，過篩，取200目至140目細(xì)土備用； 第二步益生菌菌懸液的制備：將保加利亞乳桿菌培養(yǎng)至對數(shù)生長期后期，收集菌體，采 用無菌生理鹽水洗滌去培養(yǎng)基，將菌體懸浮于pH為6的磷酸鹽緩沖體系中，并將濃度調(diào)節(jié) 至IO9CFUAiI備用；保加利亞乳桿菌培養(yǎng)條件是：培養(yǎng)基同嗜酸乳桿菌；37°C靜置培養(yǎng)20小 時(shí)； 第三步壁材與益生菌混合溶液的制備：將25g的海藻酸鈉、20g的明膠和20g的凹土懸 浮至IOL的菌懸液中，混合均勻； 第四步微膠囊固化成型：將上述壁材與益生菌的混合溶液緩慢滴加入離子強(qiáng)度為 lmol/L、pH5磷酸鹽緩沖液配制的濃度為20g/L的CaCl2*，于40°C固化成型50分鐘，獲得 粒徑大小為2000 μ m大小的微膠囊粒子； 第五步真空冷凍干燥法獲得益生菌微膠囊制劑：真空冷凍干燥法條件為：上述微膠囊 粒子于-60°C預(yù)凍2小時(shí)，迅速移入冷凍干燥機(jī)冷凍干燥24小時(shí)，使微囊制劑含水量< 2%， 檢測活菌劑中活菌數(shù)為l〇9CFU/g。
[0024] 實(shí)施例6 :依以下步驟制備益生菌微膠囊制劑 第一步凹土的純化：將凹土采用電導(dǎo)率低于5 μ s/cm的去離子水浸泡25h，攪拌器以 1500rpm轉(zhuǎn)速攪拌25h，靜置分層，取中間層凹土懸液，以其10%的量繼續(xù)加入上述去離子 水，同樣操作，重復(fù)3次，于110°C烘干，研磨，過篩，取200目至140目細(xì)土備用； 第二步益生菌菌懸液的制備：將鼠李糖乳桿菌培養(yǎng)至對數(shù)生長期后期，收集菌體，采用 無菌生理鹽水洗滌去培養(yǎng)基，將菌體懸浮于pH為7的磷酸鹽緩沖體系中，并將濃度調(diào)節(jié)至 101(lCFU/ml備用；鼠李糖乳桿菌培養(yǎng)條件是：培養(yǎng)基同嗜酸乳桿菌；37°C靜置培養(yǎng)20小時(shí)； 第三步壁材與益生菌混合溶液的制備：將30g的海藻酸鈉、25g的明膠和25g的凹土懸 浮至IOL的菌懸液中，混合均勻； 第四步微膠囊固化成型：將上述壁材與益生菌的混合溶液緩慢滴加入離子強(qiáng)度為 I. 5mol/L、pH6磷酸鹽緩沖液配制的濃度為25g/L的CaCl2*，于20°C固化成型60分鐘，獲 得粒徑大小為100 μ m大小的微膠囊粒子； 第五步真空冷凍干燥法獲得益生菌微膠囊制劑：真空冷凍干燥法條件為：上述微膠囊 粒子于-65°C預(yù)凍3小時(shí)，迅速移入冷凍干燥機(jī)冷凍干燥25小時(shí)，使微囊制劑含水量< 2%， 檢測活菌劑中活菌數(shù)為l〇1(lCFU/g。
[0025] 實(shí)施例7 :依以下步驟制備益生菌微膠囊制劑 第一步凹土的純化：將凹土采用電導(dǎo)率低于5 μ s/cm的去離子水浸泡26h，攪拌器以 1000 rpm轉(zhuǎn)速攪拌26h，靜置分層，取中間層凹土懸液，以其15%的量繼續(xù)加入上述去離子 水，同樣操作，重復(fù)2次，于115°C烘干，研磨，過篩，取200目至140目細(xì)土備用； 第二步益生菌菌懸液的制備：將糞鏈球菌培養(yǎng)至對數(shù)生長期后期，收集菌體，采用無 菌生理鹽水洗滌去培養(yǎng)基，將菌體懸浮于pH為8的磷酸鹽緩沖體系中，并將濃度調(diào)節(jié)至 IO9CFUAiI備用；糞鏈球菌培養(yǎng)條件是：培養(yǎng)基為蛋白胨2g，牛肉膏2g，乳糖2g，蒸餾水 1000ml，pH6. 8 ;37°C振蕩培養(yǎng)6h，搖床轉(zhuǎn)速為IOOrpm ; 第三步壁材與益生菌混合溶液的制備：將40g的海藻酸鈉、40g的明膠和30g的凹土懸 浮至IOL的菌懸液中，混合均勻； 第四步微膠囊固化成型：將上述壁材與益生菌的混合溶液緩慢滴加入離子強(qiáng)度為 2mol/L、pH7磷酸鹽緩沖液配制的濃度為35g/L的CaCl2*，于30°C固化成型70分鐘，獲得 粒徑大小為500 μ m大小的微膠囊粒子； 第五步真空冷凍干燥法獲得益生菌微膠囊制劑：真空冷凍干燥法條件為：上述微膠囊 粒子于-70°C預(yù)凍2小時(shí)，迅速移入冷凍干燥機(jī)冷凍干燥26小時(shí)，使微囊制劑含水量< 2%， 檢測活菌劑中活菌數(shù)為l〇nCFU/g。
[0026] 實(shí)施例8 :依以下步驟制備益生菌微膠囊制劑 第一步凹土的純化：將凹土采用電導(dǎo)率低于5 μ s/cm的去離子水浸泡27h，攪拌器以 1250rpm轉(zhuǎn)速攪拌27h，靜置分層，取中間層凹土懸液，以其12. 5%的量繼續(xù)加入上述去離子 水，同樣操作，重復(fù)3次，于115°