測(cè)，觀察菌含量,直到發(fā)酵罐中發(fā)酵液中的最終培養(yǎng)物（包含 菌和芽孢）生物量為10scfu/mL以上、芽孢含量大于或等于95%時(shí),立即將發(fā)酵液出罐，進(jìn) 行分裝5獲得SZ-3微生物制劑；發(fā)酵罐中的發(fā)酵時(shí)間為36~48小時(shí)。 根據(jù)本發(fā)明的微生物制劑,其特征在于，所述的NBP培養(yǎng)液的配方為：牛肉膏3。0g，蛋 白胨U). Og,酵母浸膏5. Og,葡萄糖5. 0g，NaC:丨5. 0g，水!OOOmU pH6. 8~7. 2 ;所述的發(fā)酵培 養(yǎng)液的配方以重量百分比計(jì)為：玉米粉2. 0%,豆餅粉1. 5 %,淀粉0. 5 %,酵母浸膏0. 2%, NaClS. 0%, MgSO4 * 7H200. 10%,余量為水，pH6. 8 ~7. 0。 根據(jù)本發(fā)明的微生物制劑,其特征在于,所述的NBP培養(yǎng)液如下配制；稱取+肉膏、蛋 白胨、酵母浸膏、葡萄糖、NaCl放入1000 mL水中，充分混勻后將pH調(diào)整至6. 8~7, 2, 1000 snL 角瓶中裝量為300就培養(yǎng)液，用雙層封口膜封好:三角瓶口，121?濕熱滅菌30分鐘,冷卻 后備用。 所述的發(fā)酵培養(yǎng)液如下配制：在科子罐中加入所需的水，按比例加入玉米粉、豆餅粉、 淀粉、酵母浸膏、NaCl、MgSO^ 7Η20,充分?jǐn)嚢?，將發(fā)酵培養(yǎng)液pH調(diào)整到6. 8~7. 0,密封加 料孔，用尚溫蒸汽滅 2小時(shí)，冷卻后?即接種。 根據(jù)本發(fā)明的的微生物制劑，其特征在于，在種子罐或發(fā)酵罐的發(fā)酵中，當(dāng)出現(xiàn)較多 泡沫時(shí),加入消泡劑,所述的消泡劑為有機(jī)硅,加入量以種子罐或發(fā)酵罐中的泡沫不溢出為 準(zhǔn)；發(fā)酵罐發(fā)酵完成后，在發(fā)酵罐中加入占罐中液體總體積萬分之二的苯甲酸防腐劑，攪拌 均勻，再出罐進(jìn)行分裝。 本發(fā)明還涉及微生物制劑，含有甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌SZ-81的全培養(yǎng)液培養(yǎng)物和甲基 營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌SZ-81孢子,其可通過以T制備方法制備得到： (丄）將甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌SZ-81的試管種接種于用1000 mL三角瓶裝的300mL NBP培 養(yǎng)液中，在180r'/min,30°C下培養(yǎng)36小時(shí),獲得發(fā)酵菌液； (2) 將發(fā)酵菌液在以種子罐體積10%接種于種子罐中的發(fā)酵培養(yǎng)液中發(fā)酵培養(yǎng),溶氧 量為15~18%,攪拌速度200rpm,科子罐的溫度28~32Γ，接種發(fā)酵菌液4小時(shí)后,每隔 2小時(shí)對(duì)種子罐中的發(fā)酵液進(jìn)行發(fā)酵質(zhì)量檢測(cè),直到發(fā)酵液菌體生長(zhǎng)比較飽滿即將出現(xiàn)芽 孢時(shí)，獲得發(fā)酵菌種，種子罐中的發(fā)酵時(shí)間為14~18小時(shí)： (3) 將種子罐中發(fā)酵菌種的10%接種于發(fā)酵罐中的NBP培養(yǎng)液中發(fā)酵培養(yǎng),溶氧量為 15~18%,攪拌速度200rpm,發(fā)酵罐的溫度28~32?,接科發(fā)酵菌種4小時(shí)后，每隔2小 時(shí)對(duì)發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵質(zhì)量檢測(cè)，觀察菌含量，直到發(fā)酵罐中發(fā)酵液中的最終培養(yǎng)物（包含 菌和.芽孢）生物量為lOVfu/n1 上以上、芽孢含量大于或等于95%時(shí)，立即將發(fā)酵液出罐,進(jìn) 行分裝，獲得SZ-81微生物制劑；發(fā)酵罐中的發(fā)酵時(shí)間為36~48小時(shí)。 根據(jù)本發(fā)明的含有SZ-8!的微生物制劑，其特征在于,所述的NBP培養(yǎng)液的配方為：牛 肉膏 3. Og，蛋白胨 10.0 g，酵母浸膏 5. Og，葡萄糖 5. 0g，NaCI5. Og，水 1000mL，pH6. 8 ~7. 2 ; 所述的發(fā)酵培養(yǎng)液的配方以重量百分比計(jì)為：玉米粉2。0 %，豆餅粉1. 5 淀粉0. 5 酵 母浸膏 0, 2 %, NaC18, 0 %, MgSO4 ? 7H200. 10 %，余量為水，pH6. 8 ~7. 0。 根據(jù)本發(fā)明的所述的微生物制劑,其特征在于，所述的NBP培養(yǎng)液是這樣配制的：稱取 牛肉膏，蛋白胨、酵母浸膏,葡萄糖、NaCl放入1000 mL水中，充分混勻后將pH調(diào)整至6. 8~ 7。2, 1000 mL _三角瓶中裝量為300mL培養(yǎng)液，用雙層封口膜封好H角瓶口，121?濕熱滅菌30 分鐘，冷卻后備用； 所述的發(fā)酵培養(yǎng)液是這樣配制的；在種子罐中加入所需的水，按比例加入玉米粉、豆餅 粉,淀粉、酵母浸膏、NaCKMgSO4 ?ΥΙΟ,充分?jǐn)嚢?將發(fā)酵培養(yǎng)液pH調(diào)整到6. 8~7. 0,密封 加料孔,用高溫蒸汽滅菌2小捋，冷卻后立即接種。 根據(jù)本發(fā)明所述的微生物制劑,其特征在于，在種子罐或發(fā)酵罐的發(fā)酵過程中，當(dāng)出現(xiàn) 較多泡沫捋,加入消泡劑，所述的消泡劑為有機(jī)硅，加入量以種子罐或發(fā)酵罐中的泡沫不溢 出為準(zhǔn):發(fā)酵罐發(fā)酵完成，在發(fā)酵罐中加入占罐中液體M體積萬分之-的本甲酸防腐·?H)， 攪拌均勻，再出罐進(jìn)行分裝。 本發(fā)明還涉及微生物制劑，含有甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌SZ-3和SZ-81的全培養(yǎng)液培養(yǎng) 物和？基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌SZ-3和SZ-8i的孢子,其可通過將上述SZ-3微生物制劑和上述 SZ--81微生物制劑混合制備得到，二者的體積比為各占總體積的50%?；蛘咄ㄟ^以下制備 刀法制備得到： (1) 將甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌SZ-3的試管種和甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌SZ-81的試管種分別 接種于用1000 mL三角瓶裝的300mL NBP培養(yǎng)液中，在！80r/min,30rT培養(yǎng)36小時(shí),獲得 發(fā)酵菌液； (2) 將SZ-3發(fā)酵菌液和SZ-81發(fā)酵菌液以各占總體積的50 %混合均勻后，在以種 子罐體積10%接種于種子罐中的發(fā)酵培養(yǎng)液中發(fā)酵培養(yǎng),溶氧量為15~18%,攪拌速度 200rpm,種子罐的溫度28~32°C ,接種發(fā)酵菌液4小時(shí)后，每隔2小捋對(duì)種子罐中的發(fā)酵液 進(jìn)行發(fā)酵旗量檢測(cè)，直到發(fā)酵液菌體生長(zhǎng)比較飽滿即將出現(xiàn)芽孢時(shí)，獲得發(fā)酵菌種，種子罐 中的發(fā)酵時(shí)間為14~18小時(shí)； (3) 將種子罐中發(fā)酵菌種的10%接種于發(fā)酵罐中的NBP培養(yǎng)液中發(fā)酵培養(yǎng),溶氧量為 15~18%,攪拌速度200rpm,發(fā)酵罐的溫度28~32 °C，接種發(fā)酵菌種4小時(shí)后，每隔2小 時(shí)對(duì)發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵質(zhì)量檢測(cè)，觀察菌含量,直到發(fā)酵罐中發(fā)酵液中的最終培養(yǎng)物（包含 菌和芽孢）生物量為IO9CfuZmL以上、芽孢含量大于或等于95%時(shí),立即將發(fā)酵液出罐，進(jìn) 行分裝,獲得SZ-3和SZ-81微生物制劑；發(fā)酵罐中的發(fā)酵時(shí)間為36~48小時(shí)。 上述NBP培養(yǎng)液的配方為：年肉膏3. Og,蛋白胨10.0 g,酵母浸膏5. Og,葡萄糖5. Og, NaC〖5. Og,水1000 mUρΗ6. 8~7, 2t,其制備方法為：稱取牛肉膏、蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖、 NaCl放入1000 mL水中，充分混勻后將pH調(diào)整至6. 8~7, 2, 1000 mL :三角瓶中裝量為300biL 培養(yǎng)液,用雙層封□膜封好三角瓶口，m ?濕熱滅菌30分鐘，冷卻后備?。 上述發(fā)酵培養(yǎng)液的配方以重量百分比計(jì)為：玉米粉2. 0%,豆餅粉1. 5%，淀粉0. 5%， 酵母浸雷0· 2%，NaC18. 0%，MgSO4 * 7.h200, 10%，宋童為水，ρ?].6· 8~7. 0。制備力法刃：在 種子罐中加入所需的水，按比例加入玉米粉、豆饋粉、淀粉、酵母浸膏、NaCI、MgSO4 * 7Η20，充 分撥拌，將發(fā)酵培養(yǎng)液pH調(diào)整到6. 8~7. 0,密封加料孔，用高溫蒸汽滅菌2小時(shí)，冷卻后立 即接種。 在種子罐或發(fā)酵罐的發(fā)酵中，當(dāng)出現(xiàn)較多泡沫時(shí),可以加入消泡劑，所述的消泡劑為有 機(jī)硅，加入量以種子罐或發(fā)酵罐中的泡沫不溢出為準(zhǔn)；發(fā)酵罐發(fā)酵完成后,在發(fā)酵罐中加入 占罐中液體總體積萬分之二的苯甲酸防腐劑，攪拌均勻，再出罐進(jìn)行分裝。 通過上述發(fā)酵工藝得到的發(fā)酵液即為一種微生物殺菌劑。本發(fā)明的微生物制劑可以以 稀釋液的形式在人參真菌病害發(fā)病初期均勻地施加到土壤中,微生物制劑與水的稀釋體積 比為1:200。另外,稀釋液中還可以添加助劑有機(jī)娃，有機(jī)硅與稀釋液的體積比為1:5000。 含有甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌SZ…81的全培養(yǎng)液培養(yǎng)物和甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌SZ-81 的孢子的微生物制劑如上所述的應(yīng)用，其特征在于，所述真菌為腐皮鐮孢菌（Fusarium. solani)、人參鏈格孢菌（Alternaria panax)和人參核盤菌（Sclerotinia schinseng)中 的一種或多種。 本發(fā)明的含有甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌SZ--3和SZ-~8i的全培養(yǎng)液培養(yǎng)物和甲基營(yíng)養(yǎng)型芽 孢桿菌SZ-3和SZ-81的孢子的微生物制劑在防治人參真菌病害中的應(yīng)用。優(yōu)選地，可以 同時(shí)防治引起人參的根腐病的腐皮鐮孢菌（F. solani)、引起人參黑斑病的人參鏈格孢菌 (A. panax)、引起人參菌核病的人參核盤菌（S. schinseng)、引起人參疫病的惡疫霉菌（Ph. cactorum)和引起人參銹腐病的毀滅柱孢菌（C. destructans)中的一種或多種，具有廣譜 性,Ji表現(xiàn)出比單一微生物制劑更好的防治效果。 根據(jù)本發(fā)明，在人參真菌病害發(fā)病初期，將所述微生物制劑的稀釋液均勻地施加到土 壤中，所述的稀釋液中微生物制劑與水的稀釋體積比為i : 200。 根據(jù)本發(fā)明，其特征在于,所述的稀釋液中還添加了助劑有機(jī)娃,所述助劑有機(jī)硅與稀 釋液的體積比為1:5000。 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：保藏號(hào)為CGMCC No, 8275和CGMCC No. 8276的甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿 菌SZ-3和SZ-81均對(duì)分別由腐皮鐮孢菌（F, solani)、人參鏈格孢菌（A, panax)、人參核盤 菌（S. ginseng)、惡疫霉菌（Ph. cactorum)和毀滅柱孢菌（C. destructans)弓丨起的人參的根 腐病、黑斑病、菌核病、疫病和銹腐病均具有良好的防治效果，并且對(duì)人參具有促生長(zhǎng)作用， 無毒無致病性,對(duì)人畜安全,不污染環(huán)境。特別是，SZ-3和SZ-81的混合微生物制劑表現(xiàn)出 比單一微生物制劑更好的防治效果。本發(fā)明的生防菌劑稀釋后直接施加到土壤中對(duì)楦物進(jìn) 行灌根處理即可發(fā)揮其殺菌作用，能顯著改善人參根際環(huán)境中微生物群落的合理結(jié)構(gòu)，形 成一個(gè)生物多樣化的人參根際土壤微生態(tài)環(huán)境,從而有效地、持久地控制人參真菌性病害 的流行。 【附圖說明】 圖1:本發(fā)明的甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌SZ-3菌株對(duì)人參核盤菌（Sclerotinia schinseng)菌絲的生長(zhǎng)平板抑制作用。 圖2 :本發(fā)明的甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌SZ-81菌株對(duì)毀滅柱孢菌（Cylindrocarpon destructan s)菌絲的生長(zhǎng)平板抑制作羯。 圖3 :本發(fā)明的甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌SZ-81菌株對(duì)惡疫霉菌（Phytophthora cactoruin) 菌絲的生長(zhǎng)平板抑制作用。 圖4 ;本發(fā)明的甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌SZ-3菌株對(duì)腐皮鐮孢菌（Fusarium solani)菌絲 的生長(zhǎng)平板抑制作用。 圖5 :本發(fā)明的甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌SZ-81菌株對(duì)人參鏈格孢菌（Alternaria panax) 菌絲的生長(zhǎng)平板抑制作用。 圖6 :本發(fā)明的甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌SZ-3菌株對(duì)人參鏈格孢菌(Alternaria panax)菌 絲的生長(zhǎng)平板抑制作用。 圖7 ；：混合發(fā)酵液對(duì)腐皮鐮孢菌引起的人參根腐病的防治效果。 圖8 :混合發(fā)酵液對(duì)惡疫霉菌引起的人參疫病病的防治效果。 圖9 :混合發(fā)酵液對(duì)人參孩盤菌引起的人參菌核病的防治效果。 圖10 :混合發(fā)酵液對(duì)毀滅柱孢菌弓丨起的人參銹腐病的防治效果。 圖11 :混合發(fā)酵液對(duì)人參鏈格孢菌引起的人參黑斑病的防治效果。 圖12 :SZ-3對(duì)人參的促生長(zhǎng)