德茲（Niedz)等人（1995)《植物細胞報告》（PlantCellR印orts) 14:403-406)。本領域 技術(shù)人員能夠選擇用于在本發(fā)明的表達盒中使用的適合的可篩選標記。
[0093] 在一些實施例中，在此描述的重組多核苷酸可以被用于連接載體。術(shù)語"載體"是 指用于將一種核酸（或多種核酸）轉(zhuǎn)移、遞送或引入到細胞中的組合物。載體包括一種含 有有待被轉(zhuǎn)移、遞送或引入的一個或多個核苷酸序列的核酸分子。用于在植物和其他有機 體的轉(zhuǎn)化中使用的載體在本領域是熟知的。一般類別的載體的非限制性實例包括但不限于 病毒載體、質(zhì)粒載體、噬菌體載體、噬菌粒載體、黏粒載體、福斯質(zhì)粒載體、噬菌體、人工染色 體、或農(nóng)桿菌二元載體，這些載體是處于雙鏈或單鏈的線性的或環(huán)形的形式，可以是或可以 不是自身可傳播的或可移動的。如在此定義的載體可以通過整合進細胞基因組轉(zhuǎn)化原核的 或真核的宿主，或在染色體外存在（例如具有一個復制起點的自主復制質(zhì)粒）。另外包括的 是穿梭載體，穿梭載體一詞是指DNA運載體，該DNA運載體自然地或經(jīng)設計能夠在兩個不同 的宿主有機體中復制，這些宿主有機體可以是選自：放線菌以及相關(guān)的物種、細菌和真核生 物（例如，高等植物、哺乳動物、酵母或真菌細胞）。在一些代表性實施例中，該載體中的核 酸是在適當?shù)膯幼踊蚱渌{(diào)節(jié)元件的控制之下、或與其可操作地相連接的，用于在一種 宿主細胞中（如，一種微生物例如細菌的、或植物的細胞中）進行轉(zhuǎn)錄。該載體可以是一種 雙功能的表達載體，它在多種宿主中發(fā)揮作用。在基因組DNA的情況下，這可以包含它所擁 有的啟動子或其他調(diào)節(jié)元件；而在cDNA的情況下，這可以是處于適當?shù)膯幼踊蚱渌恼{(diào) 控元件的控制之下，用于在該宿主細胞中表達。
[0094] 載體的非限制性實例是源自根癌農(nóng)桿菌二元載體pBIN19的質(zhì)粒pBIlOl，允許使 用葡萄糖醛酸酶（GUS)表達信號來合并及測試啟動子（杰弗遜（Jefferson)等人， 1987,《歐洲分子生物學學會雜志》（EMBOJ)，6:3901-3907)。該載體的大小是12. 2kb。 它具有低拷貝RK2復制起點并且在細菌和植物這二者中賦予卡那霉素抗性。存在根據(jù) 本發(fā)明可以使用的本領域普通技術(shù)人員已知的多個其他表達載體。載體的另外的非限 制性實例包括：RK2(貝文（Bevan)，《核酸研究》（Nucl.AcidsRes.) (1984));用于與農(nóng) 桿菌一起使用的二元載體PCIB200和pCIB2001，例如在W0 95133818(實例35)(還參 見EP0332104,實例19)披露了它們的構(gòu)建；二元載體pCIBlO,它包含編碼卡那霉素抗 性以用于選擇的一個基因；廣泛宿主范圍的質(zhì)粒PRK252,由羅斯坦（Rothstein)等人 (《基因》（Gene)53:153-161 (1987))描述了它的構(gòu)建。格里策特（Gritzret)(《基因》 (Gene) 25:179-188 (1983))描述了已經(jīng)并入潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶的基因而構(gòu)建的pCIBlO的 不同衍生物。這些衍生物使得能夠僅針對潮霉素來選擇轉(zhuǎn)基因植物細胞（PCIB743)，或針對 潮霉素和卡那霉素來進行選擇（pCIB715、pCIB717)。
[0095]因此，可獲得多種轉(zhuǎn)化載體用于植物轉(zhuǎn)化，并且可以將本發(fā)明的重組多核苷酸和 表達盒用于與任何這類載體進行連接。載體的選擇將取決于優(yōu)選的轉(zhuǎn)化技術(shù)以及用于轉(zhuǎn) 化的目標種類。因此，在另外的實施例中，本發(fā)明的重組多核苷酸可以包含在重組載體 中。載體的大小可以取決于該載體是否包含一個或多個表達盒（例如，用于分子堆疊）而 顯著變化。因此，載體大小的范圍可以是從約3kb至約125kb。因此，在一些實施例中，載 體的大小是約 3kb、4kb、5kb、6kb、7kb、8kb、9kb、10kb、llkb、12kb、13kb、14kb、15kb、16kb、 17kb、18kb、19kb、20kb、2lkb、22kb、23kb、24kb、25kb、26kb、27kb、28kb、29kb、30kb、3lkb、 32kb、33kb、34kb、35kb、36kb、37kb、38kb、39kb、40kb、4lkb、42kb、43kb、44kb、45kb、46kb、 47kb、48kb、49kb、50kb、55kb、60kb、65kb、70kb、75kb、80kb、85kb、90kb、95kb、1OOkb、105kb、 110kb、115kb、120kb、125kb或其中的任意范圍。在一些實施例中，載體大小可以是約3kb至 約122kb、約3kb至約50kb、或約3kb至約10kb。
[0096]因此，在本發(fā)明的另外的實施例中，提供了產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因細胞（例如植物的或細菌 的細胞）的方法，所述方法包括將本發(fā)明的一個重組多核苷酸和/或表達盒引入細胞。在 另外的方面，本發(fā)明提供了產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因的植物細胞、植物、和/或植物部分的方法，該方法 包括將本發(fā)明的一個重組多核苷酸和/或表達盒引入所述植物細胞、植物或植物部分，由 此產(chǎn)生包含所述重組多核苷酸或所述表達盒的轉(zhuǎn)基因的植物細胞、植物或植物部分。在一 些實施例中，包含本發(fā)明的一個重組多核苷酸和/或表達盒的轉(zhuǎn)基因植物細胞可以被再生 為在其基因組中包含本發(fā)明的所述重組多核苷酸和/或所述表達盒的轉(zhuǎn)基因的植物或植 物部分。在其他實施例中，其中當該重組多核苷酸可操作地連接至感興趣的一個多核苷酸 時，用所述重組核苷酸轉(zhuǎn)化的植物在這一轉(zhuǎn)化的植物的保衛(wèi)細胞中特異性地或優(yōu)先地表達 可操作地連接的多核苷酸。
[0097] 在代表性實施例中，提供了產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因的植物或植物部分的方法，所述方法包括 將本發(fā)明的一個表達盒引入植物細胞，所述表達盒包括可操作地連接至一個感興趣的多核 苷酸的本發(fā)明的一個重組多核苷酸；從所述植物細胞再生植物或植物部分。在一些實施例 中，以保衛(wèi)細胞優(yōu)先的或保衛(wèi)細胞特異性的方式，在所述轉(zhuǎn)基因的植物或植物部分中表達 感興趣的多核苷酸。
[0098] 本發(fā)明的另外的方面提供了轉(zhuǎn)化的植物的或細菌的細胞與包含轉(zhuǎn)化的植物細胞 的經(jīng)轉(zhuǎn)化的植物和/或植物部分，其中這些經(jīng)轉(zhuǎn)化的植物細胞與轉(zhuǎn)化的植物和/或植物部 分包括本發(fā)明的一個或多個重組多核苷酸（例如SEQIDNO: 1、SEQIDN0:10-28或它們的 任何組合）。
[0099]在一些具體實施例中，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的一個或多個重組多核苷酸的轉(zhuǎn) 基因植物細胞和/或從所述轉(zhuǎn)基因植物細胞再生的轉(zhuǎn)基因植物或植物部分。因此，在本發(fā) 明的一些實施例中，提供了這樣一種轉(zhuǎn)基因植物，該轉(zhuǎn)基因植物具有感興趣的一個多核苷 酸的保衛(wèi)細胞特異性的或保衛(wèi)細胞優(yōu)先的表達，所述轉(zhuǎn)基因植物是從包含可操作地連接至 所述感興趣多核苷酸的本發(fā)明的至少一種重組多核苷酸的轉(zhuǎn)基因植物細胞再生。
[0100] 在實踐本發(fā)明時，可以采用任何植物（或植物的分類，例如分為屬或更高的類 別-目），包括被子植物，裸子植物，單子葉植物，雙子葉植物，C3、C4、CAM植物，微藻，和/或 大型藻。
[0101] 因此，可以與本發(fā)明的一個轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)多核苷酸一起使用的植物的一些非限制 性實例可以包括蔬菜作物，包括洋薊、球莖甘藍、芝麻菜、韭蔥、蘆筍、萵苣（例如，結(jié)球萵 苣、葉萵苣、長葉萵苣）、小白菜（bokchoy)、黃肉芋、瓜類（例如，甜瓜、西瓜、克倫肖瓜 (crenshaw)、白蘭瓜、羅馬甜瓜）、甘藍類作物（例如，球芽甘藍、卷心菜、花椰菜、西蘭花、羽 衣甘藍、無頭甘藍、大白菜、小白菜）、刺菜薊、胡蘿卜、洋白菜（napa)、秋葵、洋蔥、芹菜、歐 芹、鷹嘴豆、歐洲防風草、菊苣、胡椒、馬鈴薯、萌蘆（例如，西萌蘆、黃瓜、小西萌蘆、倭瓜、南 瓜）、蘿卜、干球洋蔥、蕪菁甘藍、紫茄子（也稱為茄子）、婆羅門參、苣菜、青蔥、苦苣、大蒜、 菠菜、綠洋蔥、倭瓜、綠葉菜類（greens)、甜菜（例如糖甜菜、熱帶糖甜菜和飼料甜菜）、甘 薯、唐萵苣、山葵、番茄、蕪菁、木薯、以及香辛料；水果和/或蔓生作物，例如蘋果、杏、櫻桃、 油桃、桃、梨、李子、西梅、櫻桃、榲槨、杏仁、栗子、榛子、山核桃、開心、果、胡桃、柑橘、藍莓、博 伊增莓（boysenberry)、小紅莓、穗醋栗、羅甘莓、樹莓、草莓、黑莓、葡萄、鱷梨、香蕉、獼猴 桃、柿子、石榴、菠蘿、熱帶水果、梨果、瓜、芒果、木瓜、以及荔枝；大田作物植物，例如三葉 草、苜蓿、月見草、白芒花、玉米/玉蜀黍（飼料玉米、甜玉米、爆米花）、小米、啤酒花、卡諾 拉（canola) /油菜、荷荷芭、花生、稻、紅花、小粒谷類作物（稻、大麥、燕麥、黑麥、小麥等）、 高粱、煙草、木棉、豆科植物（豆類、小扁豆、豌豆、大豆）、含油植物（油菜、芥菜、罌粟、橄欖、 向日葵、紅花、椰子、蓖麻油植物、可可豆、落花生）、擬南芥屬、纖維植物（棉花、亞麻、大麻、 黃麻）、樟科（肉桂、莰酮）、或一種植物例如咖啡、甘蔗、茶、以及天然橡膠植物；和/或花 壇植物，例如開花植物、仙人掌、肉質(zhì)植物和/或觀賞植物（例如蘭花、康乃馨、玫瑰），以及 樹例如森林（闊葉樹和常綠樹，例如針葉樹）、果樹、觀賞樹、以及結(jié)堅果的樹（nut-bearing tree)、以及灌木和其他苗木。在本發(fā)明的實踐中有用的其他植物包括多年生的禾本科植 物，例如蘆竹屬、柳枝稷、草原草（prairiegrasses)、印度草（Indiangrass)、大須芒草（Big bluestemgrass)、芒屬、等。認識到可以使用多種植物的混合物。
[0102] 如在此使用，術(shù)語"植物部分"包括但不限于，胚、花粉、胚珠、種子、葉、花、枝、果 實、果仁、穗、穗軸、果殼、莖桿、根、根尖、花藥、植物細胞（包括在植物和/或植物的部分中 完整的植物細胞）、植物原生質(zhì)體、植物組織、植物細胞組織培養(yǎng)物、植物愈傷組織、植物團 (plantclumps)、以及類似物。此外，如在此使用的，"植物細胞"是指該植物的一種結(jié)構(gòu) 和生理單元，該單元包含一個細胞壁并且還可以是指原生質(zhì)體。本發(fā)明的植物細胞可以處 于一種分離的單細胞形式中，或者可以是一種培養(yǎng)的細胞，或者可以是較高級的組織單位 (例如像，植物組織或植物器官）的一部分。"原生質(zhì)體"是一種分離的植物細胞，沒有細胞 壁或僅具有部分細胞壁。因此，在本發(fā)明的一些實施例中，包含本發(fā)明的核酸分子和/或核 苷酸序列的轉(zhuǎn)基因細胞是任何植物或植物部分的細胞，包括但不限于，根細胞、葉細胞、組 織培養(yǎng)物細胞、種子細胞、花細胞、果實細胞、花粉細胞、以及類似物。
[0103] 在一些具體實施例中，本發(fā)明提供了從本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物中產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因種 子，其中該轉(zhuǎn)基因種子包含本發(fā)明的重組多核苷酸和/或表達盒。
[0104] "植物細胞培養(yǎng)物"意指植物單元（例如像，原生質(zhì)體、細胞培養(yǎng)物細胞、植物組織 中的細胞、花粉、花粉管、胚珠、胚囊、接合子以及處于不同發(fā)育階段的胚）的培養(yǎng)物。在本 發(fā)明的一些實施例中，提供了一種轉(zhuǎn)基因組織培養(yǎng)物或轉(zhuǎn)基因植物細胞培養(yǎng)物，其中該轉(zhuǎn) 基因組織或細胞培養(yǎng)物包含本發(fā)明的核酸分子/核苷酸序列。
[0105] 如在此使用的，"植物器官"是植物的一個獨特而明顯結(jié)構(gòu)化和分化的部分，如根、 莖、葉、花蕾或胚。
[0106] 如在此使用的"植物組織"意指組織化成結(jié)構(gòu)和功能單元的一組植物細胞。包括 植物中或培養(yǎng)物中的任何植物組織。這個術(shù)語包括但不限于：全株植物、植物器官、植物種 子、組織培養(yǎng)物以及被組織化成結(jié)構(gòu)和/或功能單元的任何植物細胞群組。這個術(shù)語與以 上列出的或由該定義以其他方式涵蓋的任何具體類型的植物組織的聯(lián)合應用或單獨應用 并不旨在排除任何其他類型的植物組織。
[0107] 在多核苷酸序列（例如，本發(fā)明的重組多核苷酸和/或表達盒）的背景下的"引 入"意指以一種方式將一個多核苷酸序列呈遞給該植物、植物部分和/或植物細胞，該方式 使得該多核苷酸序列可以進入細胞內(nèi)部。在有待引入多于一個多核苷酸序列時，這些多核 苷酸序列可以作為單一的多核苷酸或核酸構(gòu)建體（例如表達盒）的一部分、或者作為分開 的多核苷酸或核酸構(gòu)建體（例如表達盒）而組裝，并且可以位于相同或不同的轉(zhuǎn)化載體上。 因此，可以在單一的轉(zhuǎn)化事件中、在分開的轉(zhuǎn)化事件中、或者例如作為育種方案的一部分， 將這些多核苷酸引入到植物細胞中。因此，如在此使用的術(shù)語"轉(zhuǎn)化"是指將異源核酸引入 一個細胞中。細胞的轉(zhuǎn)化可以是穩(wěn)定或瞬時的。因此，在一些實施例中，可以用本發(fā)明的一 個重組多核苷酸穩(wěn)定地轉(zhuǎn)化植物細胞、植物部分或植物。在其他實施例中，可以用本發(fā)明的 重組多核苷酸瞬時地轉(zhuǎn)化植物細胞、植物部分或植物?？商娲?，可以通過使包含該多核苷 酸的植物與不包含該多核苷酸的植物雜交，來將一個多核苷酸引入植物。后續(xù)代的至少一 些成員將包含本發(fā)明的多核苷酸。
[0108] 在多核苷酸背景下的"瞬時轉(zhuǎn)化"意指：多核苷酸被引入細胞中并且沒有整合到該 細胞的基因組中。
[0109] 在被引入細胞中的多核苷酸的背景下，"穩(wěn)定引入（stablyintroducing) "或"穩(wěn) 定引入的（stablyintroduced) "意指所引入的多核苷酸被穩(wěn)定地合并到該細胞的基因組 中，并且因此該細胞用該多核苷酸進行了穩(wěn)定轉(zhuǎn)化。
[0110] 如在此使用的，"穩(wěn)定轉(zhuǎn)化（Stabletransformation) "或"穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的（stably transformed)"意指一種多核苷酸被引入到細胞中并且整合到該細胞的基因組中。因此， 整合的多核苷酸能夠由其子代繼承，更具體地說，由多個連續(xù)世代的子代繼承。如在此所使 用的"基因組"還包括核和質(zhì)體基因組，并且因此包括多核苷酸到例如葉綠體基因組中的整 合。如在此使用的穩(wěn)定轉(zhuǎn)化也可以是指在染色體外（例如，作為微型染色體）維持的轉(zhuǎn)基 因。
[0111] 瞬時轉(zhuǎn)化可以通過例如酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA)或蛋白質(zhì)印跡來檢測，這些測 定可以檢測由一個或多個引入到有機體中的轉(zhuǎn)基因編碼的肽或多肽的存在。細胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn) 化可以通過例如細胞的基因組DNA與核酸序列（這些核酸序列與引入有機體（例如，植物） 中的轉(zhuǎn)基因的核苷酸序列特異性雜交）的DNA印記雜交測定來檢測。細胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)化還可 以通過例如細胞的RNA與核酸序列的RNA印跡雜交測定來檢測，這些核酸序列與引入到植 物或其他有機體中的轉(zhuǎn)基因的核苷酸序列特異性雜交。細胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)化還可以通過例如聚 合酶鏈式反應（PCR)或本領域熟知的其他擴增反應來進行檢測，這些反應采用與轉(zhuǎn)基因的 一個或多個目標序列雜交的特異性引物序列，從而導致該轉(zhuǎn)基因序列的擴增，這種擴增可 以根據(jù)標準方法進行檢測。轉(zhuǎn)化還可以通過本領域熟知的直接測序和/或雜交方案進行檢 測 。
[0112] 可以通過本領域普通技術(shù)人員已知的任何方法將本發(fā)明的一個重組多核苷酸 (例如，SEQIDN0:1、SEQIDN0:10-28、或它們的任何組合）引入細胞中。在本發(fā)明的一 些實施例中，細胞的轉(zhuǎn)化包括核轉(zhuǎn)化。在其他實施例中，細胞的轉(zhuǎn)化包括質(zhì)體轉(zhuǎn)化（例如， 葉綠體轉(zhuǎn)化）。
[0113]用于轉(zhuǎn)化植物的程序是熟知的并且在本領域內(nèi)是常規(guī)的并且普遍描述于文獻 中。用于植物轉(zhuǎn)化的方法的非限制性實例包括通過以下各項的轉(zhuǎn)化：細菌介導的核酸遞 送（例如，經(jīng)由農(nóng)桿菌）、病毒介導的核酸遞送、碳化硅或核酸須晶介導的核酸遞送、脂質(zhì) 體介導的核酸遞送、微注射、微粒轟擊、磷酸鈣介導的轉(zhuǎn)化、環(huán)糊精介導的轉(zhuǎn)化、電穿孔、 納米粒子介導的轉(zhuǎn)化、超聲處理、滲入、PEG介導的核酸吸收、以及使得核酸引入到植物 細胞中的任何其他電學的、化學的、物理的（機械的）和/或生物的機制，包括其任意組 合。對于本領域已知的不同植物轉(zhuǎn)化方法的一般指導包括今井（Miki)等人（在格里克 B.R. (Glick，B.R.)和湯普遜J.E. (Thompson，J.E.)編輯的《植物分子生物學與生物技術(shù)方 法》（MethodsinPlantMolecularBiologyandBiotechnology)中的"用于將外來DNA 引入植物中的程序（ProceduresforIntroducingForeignDNAintoPlants)"（CRC出 版公司（CRCPress,Inc.)，波卡拉頓（BocaRaton)，1993)，第67-88頁）和拉科沃奇-特 羅揚諾夫斯卡（Rakowoczy-Trojanowska)(《細胞與分子生物學快報》（Cell.Mol.Biol. Lett.)7:849-858(2002))〇
[0114] 農(nóng)桿菌介導的轉(zhuǎn)化是一種用于轉(zhuǎn)化植物、尤其是雙子葉植物的普遍使用的方法， 因為它的高轉(zhuǎn)化效率以及因為它對于許多不同物種的廣泛實用性。農(nóng)桿菌介導的轉(zhuǎn)化典型 地涉及將攜帶感興趣的外來DNA的二元載體轉(zhuǎn)移到適當?shù)霓r(nóng)桿菌菌株，這可能取決于由宿 主農(nóng)桿菌菌株或者在共同存在的Ti質(zhì)粒上或染色體地攜帶的vir基因的互補序列（烏肯 斯（Uknes)等人，（1993)《植物細胞》（PlantCell)5:159-169)。該重組二元載體向農(nóng)桿 菌中的轉(zhuǎn)移可以利用攜帶該重組二元載體的大腸桿菌、輔助大腸桿菌菌株（該輔助菌株攜 帶能夠?qū)⒃撝亟M二元載體移動到目標農(nóng)桿菌菌株中的質(zhì)粒）通過一種三親本交配程序?qū)?現(xiàn)?？商娲?，可以通過核酸轉(zhuǎn)化將該重組二元載體轉(zhuǎn)移到農(nóng)桿菌中（H6fgen和威爾米策 (Willmitzer) (1988)《核酸研究》（NucleicAcidsRes.) 16:9877) ;Weigel&Glazebrook， (2006)使用電穿孔的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化（TransformationofAgrobacteriumUsing Electroporation)，《冷泉港實驗方案》（ColdSpringHarbProtoc)，doi:10. 1101/pdb. prot4665 ;以及Weigel&Glazebrook, (2006)使用凍融方法的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化（Transformation ofAgrobacteriumUsingtheFreeze-ThawMethod)，《冷泉港實驗方案》（ColdSpring HarbProtoc) ；2006；doi：10.1101/pdb.prot4666)
[0115] 通過重組農(nóng)桿菌進行的植物轉(zhuǎn)化通常涉及該農(nóng)桿菌與來自該植物的外植體的共 培養(yǎng)，并且遵循本領域熟知的方法。在攜帶位于這些二元質(zhì)粒T-DNA邊界之間的抗生素或 除草劑抗性標記的選擇培養(yǎng)基上對轉(zhuǎn)化的組織進行再生。
[0116] 另一種用于轉(zhuǎn)化植物、植物部分和/或植物細胞的方法涉及在植物組織和細 胞上推進惰性或生物活性的粒子。參見，例如，美國專利號4, 945, 050 ;5, 036, 006以及 5, 100, 792。通常，這種方法涉及在有效于穿透該細胞的外表面并提供在其內(nèi)部中的合并的 條件下在植物細胞處推進惰性或生物活性的粒子。當使用惰性粒子時，可以通過用含有感 興趣的核酸的載體包被這些粒子而將該載體引入該細胞中?？商娲?，一個或多個細胞可 以被該載體圍繞使得該載體通過該粒子的激發(fā)而被帶入該細胞中。也可以將生物活性粒子 (例如，干燥的酵母細胞、干燥的細菌或噬菌體，各自含有一個或多個試圖被引入的核酸） 推進到植物組織中。
[0117] 因此，在本發(fā)明的具體實施例中，植物細胞可以通過本領域內(nèi)已知的或如在此描 述的任何方法進行轉(zhuǎn)化，并且可以使用多種已知技術(shù)中的任一種從這些轉(zhuǎn)化的細胞再生完 整的植物。在以下文獻中描述了由植物細胞、植物組織培養(yǎng)物和/或培養(yǎng)的原生質(zhì)體進行 的植物再生：例如，埃文斯（Evans)等人（《植物細胞培養(yǎng)物手冊》(HandbookofPlantCell Cultures)，第1卷，麥克米蘭出版公司，紐約（1983));以及瓦西爾I.R.(VasilI.R.)(編 輯）（《植物的細胞培養(yǎng)和體細胞遺傳學》（CellCultureandSomaticCellGeneticsof Plants)，學術(shù)出版社，奧蘭多（Orlando)，第I卷（1984)和第II卷（1986))。選擇轉(zhuǎn)化的 轉(zhuǎn)基因植物、植物細胞和/或植物組織培養(yǎng)物的方法在本領域中是常規(guī)的，并且可以用于 在此提供的本發(fā)明的方法中。
[0118] 同樣地，工程化到以上所述的本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因種子和植物、植物部分和/或植物 細胞中的遺傳特性可以通過有性生殖或營養(yǎng)生長來傳遞，并且因此可以在子代植物中維持 并傳代。通常，維持和傳代利用了被開發(fā)以適合特定目的（如收獲、播種或耕作）的已知農(nóng) 業(yè)方法。
[0119]因此，可以按本領域熟知的任何數(shù)目的方法將一種核苷酸序列引入到該植物、植 物部分和/或植物細胞中。本發(fā)明的這些方法并不取決于用于將一種或多種多核苷酸引入 到植物中的具體方法，僅取決于它們可以獲準進入該植物的至少一個細胞內(nèi)部。在有待引 入多于一個多核苷酸序列的情況下，它們可以作為單一核酸構(gòu)建體的部分、或者作為分開 的核酸構(gòu)建體而進行組裝，并且可以位于相同或不同的核酸構(gòu)建體上。因此，可以在單一的 轉(zhuǎn)化事件中、在分開的轉(zhuǎn)化事件中、或者例如作為育種方案的一部分在植物中，將這些核苷 酸序列引入到感興趣的細胞中。
[0120] 在