本發(fā)明的一些實施例中,本發(fā)明的保衛(wèi)細胞特異性的或保衛(wèi)細胞優(yōu)先的轉錄調(diào) 節(jié)多核苷酸可以被用于表達尤其是用于在保衛(wèi)細胞中特異性表達的性狀。
[0121] 對于在保衛(wèi)細胞中表達,設想很多性狀都會是有用的??梢詮募膊】剐曰颢@得 待連接至本發(fā)明的一個轉錄調(diào)節(jié)多核苷酸的開放閱讀框,這些疾病抗性基因例如是細菌疾 病抗性基因、真菌疾病抗性基因、病毒疾病抗性基因、線蟲疾病抗性中心、營養(yǎng)利用基因、可 篩選標記基因、影響植物農(nóng)藝學特征(即產(chǎn)量、站立能力(抗倒伏性)、等)的基因、或環(huán)境 的或脅迫的抗性基因,即脅迫耐受性或抗性(如示例為對干旱、熱、寒冷、冷凍、濕度過大、 鹽脅迫、或氧化脅迫的抗性或耐受性)、增加的產(chǎn)量、食物含量和組成、物理外觀、干倒、站 立能力、繁殖力、等。在一些實施例中,感興趣的基因可以包括但不限于修飾的或未修飾的 ABA受體。ABA受體使本領域已知的,并且包括但不限于PYR/PYL/RCAR蛋白家族(參見帕 克(Park)等人,《科學》(Science) 324:1068-1071 (2009);克萊恩(Kline)等人,《植物生理 學》(PlantPhysiol) 154:479-482(2010);美國專利申請公開號 20100216643)。
[0122] "抗性"是指由于藥劑給予、病原體感染、或暴露于脅迫,展現(xiàn)出基本上沒有表型改 變的植物。"耐受性"是指雖然由于感染,植物會展現(xiàn)出一些表型改變,但是它不具有大幅降 低的繁殖能力或大幅改變的代謝。
[0123] 因此,對于表達包括改變代謝途徑、賦予疾病抗性、等的那些的多種多樣的基因而 言,保衛(wèi)細胞優(yōu)先的或保衛(wèi)細胞特異性的轉錄調(diào)節(jié)多核苷酸是有用的。
[0124] 對于修飾植物的表型,本發(fā)明的轉錄調(diào)節(jié)多核苷酸是有用的。會希望轉基因植物 的表型方面的不同改變(即修飾植物的脂肪酸構成、改變植物的氨基酸含量、改變植物的 病原體防御機制、等)??梢酝ㄟ^提供植物中異源產(chǎn)物的表達或內(nèi)源產(chǎn)物的增加表達來實現(xiàn) 這些結果。可替代地,可以通過提供植物中一種或多種內(nèi)源產(chǎn)物,特別是酶或輔因子的表達 的減少,來實現(xiàn)這些結果。因此,這些改變還會導致有益的植物表型。通常,在此描述的轉 錄調(diào)節(jié)多核苷酸可以被用于表達可操作地連接至所述轉錄調(diào)節(jié)多核苷酸序列的核酸區(qū)段, 例如像開放閱讀框或其一部分、反義序列、編碼雙鏈RNA序列的序列、或轉基因。
[0125] 因此,在一些實施例中,本發(fā)明提供了一種在植物的保衛(wèi)細胞中表達感興趣的多 核苷酸的方法,該方法包括將與該感興趣的多核苷酸可操作地連接的本發(fā)明的重組多核苷 酸和/或將包括與該感興趣的多核苷酸可操作地連接的本發(fā)明重組多核苷酸的本發(fā)明表 達盒引入植物細胞,使植物細胞再生為用本發(fā)明的所述重組多核苷酸或表達盒穩(wěn)定地轉化 的植物,其中在所述經(jīng)穩(wěn)定地轉化的植物的保衛(wèi)細胞中表達感興趣的多核苷酸。在本發(fā)明 的一些實施例中,該感興趣的多核苷酸的表達是保衛(wèi)細胞特異性的或保衛(wèi)細胞優(yōu)先的。
[0126] 在一些實施例中,本發(fā)明的轉錄調(diào)節(jié)多核苷酸可以用于賦予反義構建體、RNAi、等 的保衛(wèi)細胞特異性的或保衛(wèi)細胞優(yōu)先的表達。
[0127] 在其他實施例中,調(diào)節(jié)保衛(wèi)細胞功能(例如氣孔打開和關閉)的一種方法,該方法 包括將與感興趣的多核苷酸(它的表達調(diào)節(jié)保衛(wèi)細胞功能)可操作地連接的本發(fā)明的重組 多核苷酸和/或將包括與所述感興趣的多核苷酸可操作地連接的本發(fā)明重組多核苷酸的 本發(fā)明表達盒引入植物細胞,將植物細胞再生為用本發(fā)明的所述重組多核苷酸穩(wěn)定地轉化 的植物,其中在所述穩(wěn)定地轉化的植物的保衛(wèi)細胞中表達該感興趣的多核苷酸,由此如與 并不包括本發(fā)明的一個重組多核苷酸或表達盒(即并未用它們進行轉化)的植物相比,來 調(diào)節(jié)經(jīng)穩(wěn)定地轉化的植物的保衛(wèi)細胞的功能。
[0128] 在本發(fā)明的一些實施例中,該感興趣的多核苷酸的表達是保衛(wèi)細胞特異性的或保 衛(wèi)細胞優(yōu)先的。在代表性實施例中,該感興趣的多核苷酸序列是修飾的或未修飾的ABA受 體。
[0129] 在另外的實施例中,提供了改進植物對水分虧缺的反應和植物水分利用效率的一 種方法,該方法包括將與感興趣的多核苷酸(它的表達可以改進植物對水分虧缺的反應和 植物水分利用效率)可操作地連接的本發(fā)明的重組多核苷酸和/或將包括所述感興趣的 多核苷酸可操作地連接的本發(fā)明重組多核苷酸的本發(fā)明表達盒引入植物細胞,將植物細胞 再生為用本發(fā)明的所述重組多核苷酸穩(wěn)定地轉化的植物,其中在所述穩(wěn)定地轉化的植物的 保衛(wèi)細胞中表達該感興趣的多核苷酸,由此如與并不包括本發(fā)明的重組多核苷酸或表達盒 (即并未用它們進行轉化)的植物相比,在經(jīng)穩(wěn)定地轉化的植物中改進植物對水分虧缺的 反應和植物水分利用效率。在代表性實施例中,該感興趣的多核苷酸序列是修飾的或未修 飾的ABA受體。
[0130] 仍在另外的實施例中,提供了調(diào)節(jié)光同化作用速率的一種方法,該方法包括將與 感興趣的多核苷酸(它的表達可以調(diào)節(jié)光同化作用速率)可操作地連接的本發(fā)明的重組多 核苷酸和/或將包括與所述感興趣的多核苷酸可操作地連接的本發(fā)明重組多核苷酸的本 發(fā)明表達盒引入植物細胞,將植物細胞再生為用本發(fā)明的所述重組多核苷酸穩(wěn)定地轉化的 植物,其中在所述穩(wěn)定地轉化的植物的保衛(wèi)細胞中表達感興趣的多核苷酸,由此如與并不 包括本發(fā)明的重組多核苷酸或表達盒(即并未用它們進行轉化)的植物相比,在經(jīng)穩(wěn)定地 轉化的植物中調(diào)節(jié)光同化作用速率。在代表性實施例中,該感興趣的多核苷酸序列是修飾 的或未修飾的ABA受體。
[0131] 在另外的實施例中,調(diào)節(jié)植物蒸騰作用速率的一種方法,該方法包括將與感興趣 的多核苷酸(它的表達可以調(diào)節(jié)植物蒸騰作用速率)可操作地連接的本發(fā)明的重組多核 苷酸和/或將包括與所述感興趣的多核苷酸可操作地連接的本發(fā)明重組多核苷酸的本發(fā) 明表達盒引入植物細胞,將植物細胞再生為用本發(fā)明的所述重組多核苷酸穩(wěn)定地轉化的植 物,其中在所述穩(wěn)定地轉化的植物的保衛(wèi)細胞中表達感興趣的多核苷酸,由此如與并不包 括本發(fā)明的重組多核苷酸或表達盒(即并未用它們進行轉化)的植物相比,在經(jīng)穩(wěn)定地轉 化的植物中調(diào)節(jié)蒸騰作用速率。在代表性實施例中,該感興趣的多核苷酸序列是修飾的或 未修飾的ABA受體。
[0132] 在本發(fā)明的另外的實施例中,提供了產(chǎn)生具有調(diào)節(jié)的保衛(wèi)細胞功能的植物的一種 方法,該方法包括將與感興趣的多核苷酸(它的表達可以調(diào)節(jié)保衛(wèi)細胞功能)可操作地連 接的本發(fā)明的重組多核苷酸和/或將包括與所述感興趣的多核苷酸可操作地連接的本發(fā) 明重組多核苷酸的本發(fā)明表達盒引入植物細胞,將植物細胞再生為用本發(fā)明的所述重組多 核苷酸穩(wěn)定地轉化的植物,由此如與并不包括本發(fā)明的重組多核苷酸或表達盒(即并未用 它們進行轉化)的植物相比,產(chǎn)生具有調(diào)節(jié)的保衛(wèi)細胞功能的經(jīng)穩(wěn)定地轉化的植物。
[0133] 仍在另外的實施例中,本發(fā)明提供了通過提供的本發(fā)明的這些方法,由此產(chǎn)生的 植物和植物部分,其中轉化的植物和/或植物部分包括本發(fā)明的一種或多種重組多核苷酸 (例如SEQIDNO: 1、SEQIDN0:10-28)和/或包括本發(fā)明的所述一種或多種重組多核苷 酸(例如SEQIDNO: 1、SEQIDN0:10-28)的本發(fā)明的表達盒。在其他實施例中,本發(fā)明進 一步提供了從本發(fā)明的植物中產(chǎn)生的種子,其中該種子在其基因組中包含本發(fā)明的重組多 核苷酸和/或表達盒。
[0134]本發(fā)明還針對通過使包含本發(fā)明的多核苷酸的第一親本植物與第二親本植物雜 交,來產(chǎn)生新植物的方法。另外,本發(fā)明可以用于品種發(fā)育過程,用來在繁育種群或雜交中 衍生子代。另外,第一和第二親本植物這二者都可以是或源自包含本發(fā)明的多核苷酸的植 物。取決于繁殖模式、性狀、種質(zhì)的條件,可以選擇多種繁育方法。因此,使用包含本發(fā)明的 多核苷酸的植物的任何此類方法都是本發(fā)明的一部分:自交、回交、輪回選擇、混合選擇等。
[0135]本發(fā)明進一步提供了包括本發(fā)明的多種植物的作物、或其子代,其中所述子代是 轉基因植物,一起栽種在農(nóng)田中。在一些實施例中,本發(fā)明提供了從本發(fā)明的植物或植物部 分生產(chǎn)的產(chǎn)品。
[0136]本發(fā)明的另外的方面包括從本發(fā)明的這些轉基因植物和/或其部分或作物中產(chǎn) 生的收獲產(chǎn)物以及從所述收獲產(chǎn)物中產(chǎn)生的加工產(chǎn)物。收獲產(chǎn)物可以是全株植物或任何植 物部分,如在此描述的,其中所述收獲產(chǎn)物包含本發(fā)明的一個重組核酸分子/構建體。因 此,在一些實施例中,收獲的產(chǎn)物的非限制性實例包括種子、果實、花或其部分(例如,花 藥、柱頭等)、葉、莖等。在其他實施例中,加工產(chǎn)物包括但不限于由收獲的本發(fā)明的種子產(chǎn) 生的細粉、粗粉、油、淀粉、谷物等,其中所述種子包含發(fā)明的重組核酸分子/核苷酸序列。
[0137]術語"調(diào)節(jié)"(modulate、modulates、modulated或modulation)是指在指定活性 方面(例如調(diào)節(jié)的蛋白生產(chǎn))的增強(例如增加)或抑制(例如降低)。
[0138] 如在此使用,術語"增加"(increase、increasing、increased),"增強"(enhance、 enhanced、enhancing和enhancement)(以及它們的語法變化)描述了在植物、植物部分或 植物細胞中,例如在對水分虧缺的反應和/或植物水分利用效率方面的提高,和/或在光同 化作用速率、等方面的提高。可以通過如與適當對照(例如缺乏所述重組多核苷酸或所述 表達盒(即并未用它們進行轉化)的相同植物、植物部分或植物細胞)相比,比較例如用與 感興趣的多核苷酸(當它表達時增加植物對水分虧缺的反應、水分利用效率和/或光同化 作用速率)可操作地連接的本發(fā)明的重組多核苷酸或表達盒轉化的植物、植物部分、或植 物細胞中的增加,觀察到這一增加。因此,如在此使用,術語"增加" (increase、increasing、 increased),"增強"(enhance、enhanced、enhancing和enhancement)(以及它們的語法 變化)和類似術語指示如與對照相比,至少約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、 85%、90%、95%、100%、150%、200%、300%、400%、500% 或更多、或其中的任何范圍的提 尚。
[0139]如在此使用,術語"減少"(reduce、reduced、reducing,、reduction),"縮 小"(diminish),"抑制"(suppress)、和"降低"(decrease)(以及它們的語法變化)例如 描述了如與如在此描述的對照相比,在植物、植物細胞和/或植物部分中,光同化作用速率 和或蒸騰作用速率方面的降低。如在此使用,術語"減少"(reduce、reduced、reducing,、 reduction),"縮小"(diminish),"抑制"(suppress)、和"降低"(decrease)和類似術語是 指如與對照(例如缺乏所述重組多核苷酸或所述表達盒(即并未用它們進行轉化)的相同 植物、植物部分或植物細胞)相比,至少約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、 15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、 90 %、95 %、100 %或更多、或其中的任何范圍的降低。
[0140]如在此使用,術語"改進"(improve、improved、improving、和improvement)(以及 它們的語法變化)描述了例如,如與并未用本發(fā)明的所述重組多核苷酸或所述表達盒轉化 的相同植物(即對照)相比,已經(jīng)用與感興趣的多核苷酸(當它表達時調(diào)節(jié)植物對水分虧 缺的反應和/或水分利用效率)可操作地連接的本發(fā)明的重組多核苷酸和/或表達盒轉化 的植物在例如對水分虧缺的反應和/或水分利用效率方面的改變。取決于希望的結果,相 對于對照,"改進"可以是增加或降低。
[0141] 在此引用的所有的公開、專利申請、專利以及其他參考文件對于引用中提及的有 關句子和/或段落的傳授內(nèi)容通過引用以其全文結合在此。
[0142] 現(xiàn)在將參考以下實例描述本發(fā)明。應了解,這些實例并不旨在將權利要求書的范 圍限于本發(fā)明,而是旨在成為某些實施例的示例。技術人員想到的所例舉的方法中的任何 變型旨在屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)。
[0143] 實例
[0144] 除非另外指明,出于本發(fā)明的目的進行重組DNA步驟,例如像限制性內(nèi)切核酸酶 處理、瓊脂糖凝膠電泳、DNA片段的純化、將核酸轉移至硝酸纖維素和尼龍膜上、連接DNA片 段、轉化大腸桿菌細胞、使細菌生長、繁殖噬菌體和DNA序列分析,這些都是如薩姆布魯克 (Sambrook)(《分子克隆實驗指南》(MolecularCloning:ALaboratoryManual)(第二版,冷 泉港實驗室出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress),普萊恩維尤(Plainview), 紐約(1989))所述進行的。遵循桑格(Sanger)的方法(桑格(Sanger),《美國國家科學院 院刊》(PNAS) :74 (12) 5463-5467 (1977)),使用ABI激光熒光DNA測序儀來進行DNA分子的 測序。
[0145] 實例L材料和一般方法
[0146] (A)針對以下鑒定保衛(wèi)細胞特異性的或優(yōu)先的轉錄調(diào)節(jié)多核苷酸:
[0147] (1)鑒定擬南芥AtlG22960mRNA
[0148] 進行序列皇積(sequencepile-up)來限定AtlG22960的mRNA。將這一序列用 于不同數(shù)據(jù)庫的BLASTN查詢,用來在兩個方向上延伸轉錄物。此外,鑒定轉錄起始和終止 密碼子,用來說明基因的開放閱讀框。通過若干同源cDNA的組裝,限定了保衛(wèi)細胞基因 (AtlG22960)的全長mRNA。
[0149] (2)保衛(wèi)細胞轉錄調(diào)節(jié)多核苷酸的構建
[0150] 將來自以上比對的基因組序列數(shù)據(jù)用于構建新穎的保衛(wèi)細胞表達盒。SEQID NO: 1表示用于植物保衛(wèi)細胞轉錄的最小轉錄調(diào)節(jié)核酸。SEQIDNO: 10-16表示最小轉錄調(diào) 節(jié)核酸加內(nèi)含子。SEQIDN0:17、18、19、20、21、22、23表示進一步包括內(nèi)含子和來自擬南 芥屬AtlG22960的外顯子的部分序列的最小轉錄調(diào)節(jié)核酸。SEQIDN0:24表示包括內(nèi)含 子、來自擬南芥屬AtlG22960的外顯子的部分序列、煙草花葉病毒翻譯增強子和Kozak序 列的最小轉錄調(diào)節(jié)核酸。SEQIDN0:25和SEQIDN0:27表示包括內(nèi)含子、來自擬南芥屬 AtlG22960的外顯子的部分序列、和Kozak序列的最小轉錄調(diào)節(jié)核酸。SEQIDN0:26表示 進一步包括Kozak序列的最小轉錄調(diào)節(jié)核酸。
[0151] 如以上所述,基于cDNA/gDNA比對進行核酸取代,以便去除任何翻譯起始密碼子 并且以便在關鍵位置在工程化的翻譯起始密碼子上游插入翻譯終止密碼子。特異性核酸取 代包括用脫氧腺嘌呤(A)取代脫氧胞嘧啶(C),例如在SEQIDNO: 1的位置765和位置770。 可替代地,在此也可以使用dCTP和dATP。
[0152] 實例2?載體構建
[0153] 這些表達盒進一步包括編碼受體基因0 _葡萄糖醛酸酶(⑶S)的感興趣的多核苷 酸和轉錄終止子序列(SEQIDN0:30)。
[0154] 代表本發(fā)明的表達盒可以由連接至感興趣多核苷酸的轉錄調(diào)節(jié)多核苷酸和終止 子組成。通過用適當限制性內(nèi)切核酸酶位點置于這些組分側翼來制備表達盒,以便協(xié)助使 用標準重組DNA方法來進行構建。例如,可以在5'末端上將限制性內(nèi)切核酸酶位點Xhol和 SanDI以及在3'末端上將Ncol置于啟動子側翼,可以在5'末端上將Ncol和在3'末端上 將SacI置于感興趣的基因的側翼,并且可以在5'末端上將SacI和在3'末端上將RsrII/ Xmal置于終止子的側翼。可以將啟動子和終止子合成為單個DNA產(chǎn)物并且將它們插入適當 的細菌載體(例如pBlueScript?),以便在大腸桿菌中繁殖??梢詫⒏信d趣的多核苷酸作 為NcoI/SacI片段插入進啟動子和末端之間。可以用適當SanDI或RsrII位點,將完整表 達盒作為SanDI或RsrII片段移動至適當?shù)霓r(nóng)桿菌二元載體。
[0155] 實例3.轉基因玉蜀黍植物的產(chǎn)生
[0156] 將融合至植物受體基因葡萄糖醛酸酶(⑶S)的包括保衛(wèi)細胞表達盒(包 括本發(fā)明的保衛(wèi)細胞特異性的或優(yōu)先的轉錄調(diào)節(jié)核酸(例如EQIDNO: 1和/或SEQID NO: 10-28)的表達盒)的農(nóng)桿菌二元載體轉化進玉蜀黍。
[0157] 未成熟的玉蜀黍胚的轉化基本上如在內(nèi)格羅托(Negrotto)等人,2000,《植物細 胞報告》(PlantCellR印orts) 19:798-803(2000)中所說明進行??梢詫⒛抢锩枋龅牟煌?的培養(yǎng)基組分替換掉。
[0158] 使包含該植物轉化質(zhì)粒的農(nóng)桿菌菌株LBA4404(Invitrogen)在YEP(酵母提取 物(58/1)、蛋白胨(1(^/1)、似(:1(58/1)、158/1瓊脂,口116.8)固體培養(yǎng)基上、在28°(:生 長2至4天。將大約0. 8X109個農(nóng)桿菌懸浮于補充有100yM乙酰丁香酮(As)的LS-inf 培養(yǎng)基中(LSAs培養(yǎng)基)(內(nèi)格羅托(Negrotto)等人,《植物細胞報告》(PlantCell R?。?9:798-803(2000))。在這個培養(yǎng)基中對細菌預誘導30至60分鐘。
[0159] 將來自玉蜀黍系A188或其他適合的玉蜀黍基因型的未成熟胚從8至12天大的 穗中切除放到液體LS-inf+100yMAs(LSAs)中。將胚渦流攪拌5秒并用新鮮的感染培養(yǎng) 基漂洗一次。除去感染培養(yǎng)基并然后添加農(nóng)桿菌溶液,并將胚渦流攪拌30秒并允許其與 細菌一起沉降5分鐘。然后將這些胚盾片向上地轉移到LSA培養(yǎng)基中,并且在暗處培養(yǎng)兩 到三天。隨后,將每佩特里細菌培養(yǎng)皿20和25之間的胚轉移至補充有頭孢噻肟(250mg/ 1)以及硝酸銀(1.6mg/l)(內(nèi)格羅托(Negrotto)等人,《植物細胞報告》(PlantCell R?。?9:798-803(2000))的LSDc培養(yǎng)基中并在黑暗中在28°C下培養(yǎng)10天。
[0160] 將產(chǎn)生胚胎發(fā)生的愈傷組織的未成熟胚轉移至LSD1M0. 5S培養(yǎng)基(具有0. 5mg/ 1 2,4-D代替麥草畏的LSDc,10g/l甘露糖、5g/l蔗糖,并且沒有硝酸銀)中。在大約3周 采用的傳代培養(yǎng)的步驟在這種培養(yǎng)基上對培養(yǎng)物進行選擇,持續(xù)大約6周。將殘存的愈 傷組織或者轉移到LSD1M0.5S培養(yǎng)基中以大量生產(chǎn)或轉移到Regl培養(yǎng)基(如內(nèi)格羅 托(Negrotto)等人,《植物細胞報告》(PlantCellR印)19:798-803(2000)中所描述的) 中。在光照中(16小時光照/8小時黑暗控制)進行培養(yǎng)之后,然后將綠色組織轉移至沒有 生長調(diào)節(jié)劑的Reg2培養(yǎng)基(如內(nèi)格羅托(Negrotto)等人,《植物細胞報告》(PlantCell R印)19:798-803 (2000)中所描述的),并孵育大約1至2周。將這些小植株轉移至包含Reg3 培養(yǎng)基(如內(nèi)格羅托(Negrotto)等人,(2000)中描述的)的MagentaGA-7盒(Magenta Corp公司,芝加哥111.)中并使其在光照中生長。將對PMI是PCR陽性并且對大觀霉素是 陰性的植物轉移至土壤中并使其在溫室中生長。收集選擇事件的植物樣品以用于GUS組織 化學分析。
[0161] 實例4?⑶S分析
[0162] 使用被轉化為MU(甲基傘形酮)和葡萄糖醛酸的MUG(甲基傘形基葡糖苷酸)作 為底物,來進行定量GUS分析(或酶活性分析),以便證明并且分析表達盒的轉錄調(diào)節(jié)特性。 在堿性條件下,可以如在(比斯托(Bustos) 1989)或類似文獻中描述,熒光地定量監(jiān)測這 一轉化(在365nm激發(fā),在455nm測量;分光熒光計,賽默生命科學熒光掃描(ThermoLife SciencesFluoroscan))〇
[0163] 確切地說,用于⑶S酶活性的組織化學定位的方法如下:(1)取在第21天最新完 全擴展的葉子;在R1階段的穗葉作為樣品;(2)在真空下浸透組織化學試劑持續(xù)30min, 并且重復直至組織沉沒;(3)在37°C,在黑暗中,在組織化學試劑中孵育組織48hr;(4)在 70%乙醇中褪色至少48hr,直至背景澄清;并且(5)對組織拍照。
[0164] 實例5.用于過表達和基因"敲除"實驗的載體構建
[0165] 設計用于在植物中表達感興趣的全長"候選基因"的載體,以產(chǎn)生感興趣的蛋白, 并且這些載體具有兩種一般類型,基因槍