膚，能夠由主要組織相容性復(fù)合體（MHC)分子結(jié)合，呈遞 在細(xì)胞表面被T細(xì)胞受體燈CR)結(jié)合，激活T細(xì)胞，包括T輔助細(xì)胞表位等。
[0061] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"低免疫原性蛋白"是指單獨(dú)免疫動(dòng)物不能引起足夠的免疫反應(yīng) 的蛋白。
[0062] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"分子表面氨基酸殘基區(qū)"或"表面氨基酸殘基區(qū)"是指位于蛋白 分子表面的氨基酸殘基組成的區(qū)域，優(yōu)選地，所述"分子表面氨基酸殘基區(qū)"包括loop區(qū)、beta-tum區(qū)、N末端或C末端。
[0063] 代表性的載體蛋白
[0064] 1.白喉毒素及其跨膜結(jié)構(gòu)域
[0065] 白喉毒素（di地theriatoxin,DT)是感染了beta瞻菌體的白喉棒狀桿菌 (Corynebacteriumdi地theriae)產(chǎn)生的外毒素，存在于臨床使用的百白破疫苗成份中。安 全性得到多年臨床使用的驗(yàn)證，罕見嚴(yán)重不良反應(yīng)，目前尚無(wú)由白喉成份引起過敏反應(yīng)的 報(bào)道。
[0066] 白喉毒素分子由535個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成，空間上相對(duì)獨(dú)立的催化結(jié)構(gòu)域 (1-193AAS)、跨膜結(jié)構(gòu)域（205-378AAS)和受體結(jié)合域（386-535AAS)組成；跨膜結(jié)構(gòu)域和受 體結(jié)合域本身無(wú)毒性，其功能是通過細(xì)胞表面受體結(jié)合，將催化結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。
[0067] 白喉毒素氨基酸序列（P00588,DTX_C0RB巧如下所示：
[0068]GADDVVDSSKSFVMENFSSY服TKPGYVDSIQKGIQKPKSGTQGNYDDDWKGFYSTDNKY
[0069]DAAGYSVDNENPLSGKAGGVVKVTYPGLTKVLALKVDNAETIKKELGLSL TE化MEQVGT邸FIKRFGDGASRWLSLPFAEGSSSVEYINNWEQAKALSV化EINFETRGKRG孤AMYE YMAQACAGNRVRRSVGS化SCINLDWDVIRDKTKTKIE化KEHGPIKNKMSESPNKTVSEEKAKQ化邸F HQTALEHP化SELKTVTGTNPVFAGANYAAWAVNVAQVIDSETADNLEKTTAALSILPGIGSVMGIADGA VHHNTEEIVAQSIALSSLMVAQAIPLVGELVDIGFAAYNFVESIINLFQVVHNSYNRPAYSPG冊(cè)TQPFL HDGYAVSWNTV抓SIIRTGFQGESGHDIKITAENTPLPIAGV1XPTIPGKLDVNKSKTHISVNGRKIRMR CRAIDGDVTFCRPKSPVYVGNGVHA化HVAFHRSSS邸IHS肥ISSDSIG化GYQKTVDHTKVNSKLSLF 陽(yáng)IKS
[0070](SEQIDNo. :3)
[0071] 白喉毒素分子中的存在5個(gè)T-輔助細(xì)胞表位可被高達(dá)80%W上的人MHCclass II識(shí)別。白喉毒素跨膜結(jié)構(gòu)域值TT)主要由a螺旋元件構(gòu)成核必骨架，螺旋元件之間由靈 活性的環(huán)區(qū)連接。
[0072]DTT氨基酸序列（1F0L.pdb;202 - 378)如下所示：
[0073] 202INLDWDVI畑KTKTKIESLKE服PIKNKMSESPNKTV沈EKAKQYLEEFHQTALEHP化S
[0074] 26沈LKTVTGTNPVFAGANYAAWAVNVAQVIDSETADNLEKTTAALS比PGIGSVMGIADGAV [00巧]322HHNTEEIVAQSIALSSLMVAQAIPLVGELVDIGFAAYNFVESIINLFQVVHNSYNRP
[0076] (SEQIDNo. :4)
[0077] 本發(fā)明的研究表明，白喉毒素跨膜結(jié)構(gòu)與來(lái)自祀蛋白的膚段整合后，不會(huì)或基本 上不會(huì)影響各自的折疊。在重組蛋白中，DTT作為蛋白骨架，祀蛋白膚段移植到DTT上后， 可W誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生針對(duì)所述祀蛋白的免疫反應(yīng)。因此DTT是一種非常合適的蛋白骨架。
[0078]2.霍亂毒素B亞單位（CTB)
[0079] 霍亂毒素（choleratoxin)是霍亂弧菌分泌的外毒素（84kDa)，由A、B亞基組成， 為AB5型?；魜y毒素B亞單位（CTB)是霍亂毒素?zé)o毒的部分，具有良好的免疫原性，經(jīng)人體 試驗(yàn)證明是疫苗的有效成分。CTB能與大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞表面存在的神經(jīng)節(jié)巧脂GM1特 異性結(jié)合，刺激機(jī)體產(chǎn)生粘膜IgA,加強(qiáng)抗原性誘導(dǎo)粘膜免疫反應(yīng)。CTB已用于新型口服霍 亂疫苗、佐劑及蛋白質(zhì)載體。
[0080]CTB無(wú)毒，由2段a螺旋元件和6段beta-片構(gòu)成核必骨架，結(jié)構(gòu)元件之間由靈活 性的環(huán)區(qū)連接。五個(gè)B亞W長(zhǎng)a螺旋元件相對(duì)平行向內(nèi)組裝，形成五角星形狀。每個(gè)亞基 都可獨(dú)立結(jié)合細(xì)胞膜上的神經(jīng)結(jié)巧脂（GM1)受體。
[0081]CTB氨基酸序列（3CHB.pdb;1 - 103)如下所示：
[0082] 1TPQN口DLCAEYHNTQIYllNDKIFSYTESLAGKREMAIITFKNGAIFQVEVPGS卵IDS
[0083] 60QKKAIERMDIIRIAYLTEAKVEKLCVWNNKTPHAIAAISMAN(SEQIDNO. : 5)
[0084] 3.沙口氏菌鞭毛蛋白（Flic)
[0085] 沙口氏菌鞭毛蛋白FliC(Phase1-Cflagellin)是鞭毛的絲狀體成份，與多種動(dòng) 物細(xì)胞受體TLR5結(jié)合，激發(fā)動(dòng)物的先天性免疫系統(tǒng)應(yīng)答，促使未成熟DC細(xì)胞表面表達(dá)CD80 和CD86,分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子，在先天性免疫反應(yīng)和特異性特異性免疫反應(yīng)中發(fā) 揮較強(qiáng)的免疫佐劑作用，其作為免疫佐劑成份已在多個(gè)病原體疫苗制劑中獲得應(yīng)用。
[0086]Flic由494個(gè)氨基酸組成，晶體結(jié)構(gòu)顯示，此蛋白回折使其N端與C端靠挽形成 狀如大寫的希臘字母gamma"r"。
[0087]FliCQucu.pdb;1 - 494)的氨基酸序列如下所示：
[0088]AQVINTNSLS化TQNNLNKSQSALGTAI邸LSSGLRINSA邸DAAGQAIANRFTANIKGL
[0089]TQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELAVQSANSTNSQSDLDSIQAEITQRLN
[0090]EIDRVSGQTQFNGVKVLAQDNTLTIQVGANDGETIDIDLKQINSQTLGLDTLNVQQKYKV
[0091]SDTAATVTGYADTTIALDNSTFKASATGLGGTDQKIDGDLKFDDTTGKYYAKVTVTGGTG
[0092]邸GYYEVSVDKTNGEVTLAGGATS化TGGLPATATEDVKNVQVANADLTEAKAALTAAGV
[0093]TGTASVVKMSYTDNNGKTIDGGLAVKVGDDYYSATQNKDGSISINTTKYTADDGTSKTAL
[0094]NKLGGADGKTEVVSIGGKTYAASKAEGHNFKAQPDLAEAAATTTENPLQKIDAALAQVDT
[0095]LRSDLGAVQNRFNSA口NLGNTVNNLTSARSRI邸SDYATEVSNMSRAQILQQAGTSVLA
[0096]QANQVPQN化化LR(SEQIDNO. :6)
[0097] 4.肺炎球菌溶血素（Ply)
[0098] 肺炎球菌溶血素（Pneumolysin，Ply)是肺炎鏈球菌的主要蛋白質(zhì)抗原，存在于細(xì) 胞質(zhì)內(nèi)，通過自溶作用而釋出，因此疫苗可W通過口服或吸入途徑進(jìn)行粘膜免疫，是一種 的理想疫苗載體候選蛋白。
[0099]Ply由471個(gè)氨基酸組成，分子量53kDa，含4個(gè)結(jié)構(gòu)功能域，氨基酸序列 (P0C2J9,TACY_STRPN)如下所示：
[0100]MANKAVND巧LAMNYDKKKLLT冊(cè)GESIENRFI邸GNQ。DEFVV。服KR化STNTSDI
[0101]SVTATNDS化YPGALLVVDEIILENNP化LAVDRAPMTYSIDLPGLASSDSFLQVEDPSN
[0102] SSVRGAVNDLLAKW冊(cè)DYGQVNNVPARMQY邸ITA服MEQLKVKFGSD巧KTGNSUHDF
[0103]NSVHSGEKQIQIVNFKQIYYTVSVDAVKNPGDVFQDTVTV邸LKQRGISAERPLVYISSV
[0104]AYGRQVYLKLETTSKSDEVEAAFEAUKGVKVAPQTEWKQIU)NTEVKAVILGGDPSSGA
[0105]RVVTGKVDMV邸LI犯GSRFTADHPGLPISYTTS化畑NVVATFQNSTDYVETKVTAYRN
[0106]GD化LD服GAYVAQYYITWNELSYD冊(cè)GKE化TPKAWDRNGQDLTAHFTTSIPLKGNVRN
[0107]LSVKIRECTGLAWEWWRTVY邸TDLPLV服RTISIWG1TLYPQVEDKVEND(SEQIDNO. : 7)
[0108] 5.百日咳毒素（pertussistoxin,PTX)
[0109] 百日咳毒素（pertussistoxin,PlX)是由百日咳桿菌產(chǎn)生的毒力因子，能引 起百日咳眾多的臨床癥狀，是主要的免疫原，也是各種無(wú)細(xì)胞百日咳疫苗（Acelluar pertussisvaccine,APV)唯一所共有的成分。PTX是由6個(gè)亞單位（S1-S5)構(gòu)成的A-B型 毒素，其中S1亞單位是主要的功能性A亞基，具有多種毒性。B亞基是由S2-S4和S3-S4二 聚體組成，功能是結(jié)合于真核細(xì)胞表面受體，是本發(fā)明疫苗設(shè)計(jì)的優(yōu)選載體蛋白。
[0110] PTXB各亞基的氨基酸序列如下所示。
[011UPTXBS1 (P04977,T0X1_B0RP巧
[0112]DDPPATVYRYDSRP陽(yáng)DVFQNGFTAWGNNDNVLDHLTGRSCQVGSSNSAFVSTSSSRRYT。"引EVYLEHRMQEAVEAERAGRGTGHFIGYIYEVRADNNFYGAASSYFEYVDTYGDNAGRILA
[0114]GALATYQSEYLAHRRIPPENIRRVTRVYHNG口GETTTTEYSNARYVSQQTRANPNPYTS
[0115]RRSVASIVGTLVRMAPVIGACMARQAESSEAMAAWSERAGEAMVLVYYESIAYSF(SEQID NO. :8)
[0116]PTXBS2 (P04978,T0X2-B0RP巧
[0117]STPGIVIPPQEQ口卵GGPYGRCANKTRALTVAELRGSGDL犯化RHVTRGWSIFALYDG
[0118]TYLGGEYGGVI邸GTPGGAFDLKTTFCIMTTRNTGQPATDHYYSNVTATR化SSTNS化C
[0119]AVFVRSGQPVIGACTSPYDGKYWSMl^S化RKMLYUYVAGISVRVHVS邸EQYYDYEDAT
[0120] 陽(yáng)TYALTGISICNPGSSLC(SEQIDNO. : 9)
[012" PTXBS3 (P04979,T0X3_B0RP巧
[0122] VAPGIVIPPKALFTQQGGAYGRCPNGTRALTVAELRGNAELQITLRQ口PGWSIYGLYDG
[0123]TYLGQAYGGIIKDAPPGAGFlYRETFCITTlYKTGQPAADHYYSKVTATRLLASTNS化C
[0124]AVFV畑GQSVIGACASPYEGRY畑MYDALR化LYMIYMSGLAVRVHVS邸EQYYDYEDAT [01巧]FQTYALTGISLCNPAASIC(SEQIDNO. : 10)
[0126]PTXBS4 (P0A3R5,T0X4_B0RP巧：
[0127]DVPYVLVKTNMVVTSVAMKPYEVTPTRMLVCGIAAKLGAAASSPDAHVPFCFGKDLKRPG
[0128]SSPMEVMLRAVFMQQRPLRMFLGPKQLT陽(yáng)GKPALELIRMVECSGKQDCP(SEQIDNO. : 11)
[0129]PTXBS5 (P0498