br>[0029] 本發(fā)明的藥物組合物還包括藥學上可接受的載體，其中該載體可為賦形劑、稀釋 劑、增稠劑、填充劑、結(jié)合劑、崩解劑、潤滑劑、油脂或非油脂的基劑、表面活性劑、懸浮劑、膠 凝劑、輔助劑、防腐劑、抗氧化劑、穩(wěn)定劑、著色劑或香料其中之一或兩者以上的混合。
[0030] 本發(fā)明的藥物組合物可用于制造治療鼻咽癌的藥劑。
[0031] 本發(fā)明的藥物組合物，其中該哺乳動物可為人類病患。
[0032] 本發(fā)明的藥物組合物可例如以口服、注射、涂抹或貼片其中之一方式給予至該人 類病患體內(nèi)。
[0033] 本發(fā)明的藥物組合物還可與其他治療鼻咽癌的藥物聯(lián)用，多種藥物聯(lián)合使用可以 大大提到治療的成功率。
[0034] 在本發(fā)明的上下文中，"LMNB2基因"包括LMNB2基因以及LMNB2基因的任何功能 等同物的多核苷酸。LMNB2基因包括與目前國際公共核酸序列數(shù)據(jù)庫GeneBank中LMNB2基 因（NC_000019. 10)DNA序列具有70%以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列；
[0035] 優(yōu)選地，LMNB2基因的編碼序列包括以下任一一種DNA分子：
[0036] (1)序列表中SEQIDNO. 1所示的DNA序列；
[0037] (2)在嚴格條件下與1)限定的DNA序列雜交且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列；
[0038] (3)與⑴或（2)限定的DNA序列具有70%、優(yōu)選地，90%以上同源性，且編碼相 同功能蛋白質(zhì)的DNA分子。
[0039] 在本發(fā)明的具體實施方案中，所述LMNB2基因的編碼序列是SEQIDNO. 1所示的 DNA序列。
[0040] 在本發(fā)明的上下文中，LMNB2基因表達產(chǎn)物包括LMNB2蛋白以及LMNB2蛋白的部 分肽。所述LMNB2蛋白的部分肽含有與鼻咽癌相關(guān)的功能域。
[0041] "LMNB2蛋白"包括LMNB2蛋白以及LMNB2蛋白的任何功能等同物。所述功能等同 物包括LMNB2蛋白保守性變異蛋白質(zhì)、或其活性片段，或其活性衍生物，等位變異體、天然 突變體、誘導突變體、在高或低的嚴緊條件下能與LMNB2的DNA雜交的DNA所編碼的蛋白 質(zhì)。
[0042] 優(yōu)選地，LMNB2蛋白是具有下列氨基酸序列的蛋白質(zhì)：
[0043] (1)由序列表中SEQIDN0. 2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0044] (2)將SEQIDN0. 2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或 缺失和/或添加且與SEQIDN0. 2所示的氨基酸序列具有相同功能的由SEQIDN0. 2所示 的氨基酸序列衍生的蛋白質(zhì)。取代、缺失或者添加的氨基酸的個數(shù)通常為1-50個，較佳地 1-30個，更佳地1-20個，最佳地1-10個。
[0045] (3)與SEQIDN0. 2所示的氨基酸序列具有至少80%同源性（又稱為序列同一 性），更優(yōu)選地，與SEQIDN0. 2所示的氨基酸序列至少約90%至95%的同源性，常為96%、 97 %、98 %、99 %同源性的氨基酸序列構(gòu)成的多肽。
[0046] 在本發(fā)明的具體實施方案中，所述LMNB2蛋白是具有SEQIDN0. 2所示的氨基酸 序列的蛋白質(zhì)。
[0047] 通常，已知的是，一個蛋白質(zhì)中一個或多個氨基酸的修飾不會影響蛋白質(zhì)的功能。 本領(lǐng)域技術(shù)人員會認可改變單個氨基酸或小百分比的氨基酸或?qū)Π被嵝蛄械膫€別添加、 缺失、插入、替換是保守修飾，其中蛋白質(zhì)的改變產(chǎn)生具有相似功能的蛋白質(zhì)。提供功能相 似的氨基酸的保守替換表是本領(lǐng)域公知的。
[0048] 通過添加一個氨基酸或多個氨基酸殘基修飾的蛋白質(zhì)的例子是LMNB2蛋白的融 合蛋白。對于與LMNB2蛋白融合的肽或者蛋白質(zhì)沒有限制，只要所得的融合蛋白保留LMNB2 蛋白的生物學活性即可。
[0049] 本發(fā)明的LMNB2蛋白也包括對SEQIDN0. 2所示的氨基酸序列的非保守修飾，只 要經(jīng)過修飾的蛋白質(zhì)仍然能夠保留LMNB2蛋白的生物學活性即可。在此類修飾蛋白質(zhì)中突 變的氨基酸數(shù)目通常是10個或者更少，例如6個或者更少，例如3個或者更少。
[0050] 在本發(fā)明的上下文中，"診斷鼻咽癌"既包括判斷受試者是否已經(jīng)患有鼻咽癌、也 包括判斷受試者是否存在患有鼻咽癌的風險。
[0051] 在本發(fā)明的上下文中，"治療鼻咽癌"從疾病的狀態(tài)變化來分，可以包括疾病的緩 解、疾病的完全治愈。
[0052] 本發(fā)明的優(yōu)點和有益效果：
[0053] 本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)了LMNB2基因表達與鼻咽癌相關(guān)，通過檢測受試者鼻咽上皮組織 中LMNB2的表達，可以判斷受試者是否患有鼻咽癌、或者判斷受試者是否存在患有鼻咽癌 的風險，從而指導臨床醫(yī)師給受試者提供預(yù)防方案或者治療方案。
[0054] 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了一種新的分子標記物-LMNB2基因，相比傳統(tǒng)的檢測手段，基因診斷 更及時、更特異、更靈敏，能夠?qū)崿F(xiàn)鼻咽癌的早期診斷，從而降低鼻咽癌的死亡率。
【附圖說明】
[0055] 圖1顯示利用基因芯片檢測LMNB2基因在鼻咽上皮組織中的表達情況；
[0056] 圖2顯示利用Western blot檢測LMNB2蛋白在鼻咽上皮組織中的表達情況；
[0057] 圖3顯示利用QPCR檢測siRNA對LMNB2基因的干擾效率；
[0058] 圖4顯示利用Western blot檢測siRNA對LMNB2蛋白表達的影響；
[0059] 圖5顯示抑制LMNB2蛋白功能對鼻咽癌細胞增殖的影響。
[0060] 具體的實施方式
[0061] 下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明。以下實施例僅用于說明本 發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條 件，例如Sambrook等人，分子克隆：實驗室手冊（NewYork:ColdSpringHarborLaboratory Press，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0062] 實施例1LMNB2基因的差異表達
[0063] 1、研究對象：
[0064] 經(jīng)確診為鼻咽癌的患者40例，經(jīng)確診為鼻咽癌慢性炎癥的患者40例（充當正常 鼻咽上皮組織對照），分別利用顯微切割技術(shù)獲取鼻咽癌組織和正常鼻咽上皮組織。
[0065] 2、鼻咽癌組織和正常鼻咽上皮組織的RNA的獲取
[0066] 使用Trizol-步法提取鼻咽癌組織和正常鼻咽上皮組織的總RNA，通過Nanodrop ND-1000讀取260nm和280nm處的吸光度值（A)測定RNA溶液的純度。經(jīng)1 %甲醛變性瓊 脂糖凝膠電泳，紫外透射光下觀察，檢測RNA的完整性。
[0067] 3、基因芯片雜交及掃描
[0068] 總RNA經(jīng)線性化擴增后，cy3-UTP標記，熒光標記后的cRNAs采用RNEASYMiniKit 純化，用Amhion的RNAFragmentationReagents對標記好的cRNAs進行片段化處理。采 用美國Agilent公司的人全基因表達譜芯片（4x44K基因），在芯片雜交爐中65°C雜交17h， 然后洗脫、染色，最后用AgilentDNAMicroarrayScanner掃描儀掃描。
[0069] 4、芯片數(shù)據(jù)處理與分析
[0070] 雜交后的芯片經(jīng)芯片掃描儀讀取數(shù)據(jù)點后，將數(shù)據(jù)導入分析軟件，對于兩組比值 的自然對數(shù)絕對值大于2. 0或小于0. 5的基因作為差異表達基因。
[0071] 5、統(tǒng)計學處理
[0072] 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，組間差異比較采用單因素方差分析法， P〈0. 05差異有顯著性意義。
[0073] 6、結(jié)果
[0074]結(jié)果顯示（如圖1所示），與正常組織相比，鼻咽癌組織中LMNB2基因的mRNA水平 顯著增加，差異具有統(tǒng)計學意義（P〈〇. 05)。
[0075] 實施例2LMNB2蛋白的差異表達
[0076] 1、研究對象同實施例1。
[0077] 2、提取組織總蛋白
[0078]按照EpiQuik組織/細胞總蛋白提取試劑盒的說明書進行蛋白提取的操作。
[0079] 3、Western blot檢測
[0080] 將提取的蛋白定量進行SDS-PAGE電泳，之后進行轉(zhuǎn)膜、封閉、一抗孵育、二抗孵 育、顯色。
[0081] 4、統(tǒng)計學處理
[0082] 將蛋白條帶的灰度值使用ImageJ軟件進行分析，以β-actin為內(nèi)參，將LMNB2 蛋白條帶的灰度值進行歸一化處理。結(jié)果數(shù)據(jù)都是以平均值土標準差的方式來表示，采用 SPSS13. 0統(tǒng)計軟件來進行統(tǒng)計分析的，兩者之間的差異采用t檢驗，認為當P〈0. 05時具有 統(tǒng)計學意義。
[0083] 5、結(jié)果
[0084] 結(jié)果如圖2所示，與正常組織相比，鼻咽癌組織中LMNB2蛋白的表達水平顯著增 加，差異具有統(tǒng)計學意義（P〈〇.05)。
[0085] 實施例3抑制LMNB2基因表達
[0086] 1、siRNA設(shè)計合成
[0087]針對LMNB2 的siRNA序列：
[0100] 2、鼻咽癌細胞的培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染
[0101] 將人類鼻咽癌細胞株H0NE-1培養(yǎng)于添加10 %胎牛血清、100μg/ml鏈霉素和100 單位/ml(un