TTATGTCGT-BHQ13'。
[0034] 優(yōu)選的，所述G238C檢測反應(yīng)液、G238G檢測反應(yīng)液、G460A檢測反應(yīng)液、G460G檢 測反應(yīng)液、A719G檢測反應(yīng)液和A719A檢測反應(yīng)液內(nèi)均含有用于內(nèi)標(biāo)片段擴增的上下游引 物和用于檢測內(nèi)標(biāo)的探針，其中，所述上下游引物和所述探針的堿基序列分別為：
[0035] 上游引物：5 ' -TGCTTGTGAGACAAAGGTGTCTCT-3 ' ；
[0036] 下游引物：5 ' -TGGTTTTTCTGTACCTCAGTATCCG-3 ' ；
[0037] 探針：5' -HEX-CTATGGATGGTACAAGAACTTCACTTGACATTG-BHQ1-3' ；
[0038] 所述內(nèi)標(biāo)片段的堿基序列為：5' -GCACGGAAGACATATGCTTGTGAGACAAAGGTGTCTCTGAA ACTATGGATGGTACAAGAACTTCACTTGACATTGAAGAGTACTCGGATACTGAGGTACAGAAAAACCAAGTACTAAC TCTGG-3'。
[0039] 優(yōu)選的，所述G238C檢測反應(yīng)液、G238G檢測反應(yīng)液、G460A檢測反應(yīng)液、G460G檢 測反應(yīng)液、A719G檢測反應(yīng)液和A719A檢測反應(yīng)液內(nèi)均含有10 X PCR反應(yīng)緩沖液和脫氧核糖 核苷三磷酸，其中，所述10XPCR反應(yīng)緩沖液包括：200mmol/L的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽 溶液、30mmol/L的氯化鎂溶液、500mmol/L的氯化鉀溶液、體積百分比為0. 2%的曲拉通溶 液和體積百分比為10%的甲酰胺溶液；所述脫氧核糖核苷三磷酸包括：dATP、dCTP、dGTP、 dUTP 或 dTTP。
[0040] 優(yōu)選的，所述TPMT基因多態(tài)性檢測試劑盒中還包括酶混合液，所述酶混合液中包 括耐熱DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶。
[0041] 優(yōu)選的，所述ΤΡΜΤ基因多態(tài)性檢測試劑盒還包括ΤΡΜΤ陽性對照和ΤΡΜΤ陰性對 照。
[0042] 本發(fā)明的實施例提供的技術(shù)方案可以包括以下有益效果：
[0043] 一種ΤΡΜΤ基因多態(tài)性檢測試劑盒，所述ΤΡΜΤ基因多態(tài)性檢測試劑盒包括PCR反 應(yīng)液，其中，所述PCR反應(yīng)液包括G238C檢測反應(yīng)液、G238G檢測反應(yīng)液、G460A檢測反應(yīng)液、 G460G檢測反應(yīng)液、A719G檢測反應(yīng)液和Α719Α檢測反應(yīng)液；本發(fā)明設(shè)計了 G238C檢測反應(yīng) 液、G238G檢測反應(yīng)液、G460A檢測反應(yīng)液、G460G檢測反應(yīng)液、A719G檢測反應(yīng)液和Α719Α檢 測反應(yīng)液6種PCR反應(yīng)液，可同時檢測出ΤΡΜΤ*2、ΤΡΜΤ*3Β和TPMT*3C三種基因突變類型。 同時，本ΤΡΜΤ基因多態(tài)性檢測試劑盒還增加了內(nèi)標(biāo)，利用內(nèi)標(biāo)監(jiān)控DNA提取和PCR反應(yīng)過 程，監(jiān)控反應(yīng)體系是否有效，防止樣本檢測假陰性。本試劑盒操作快速、方法簡便、檢測靈敏 度高、檢測范圍寬，應(yīng)用該試劑盒，可以對臨床血液樣本中的ΤΡΜΤ基因多態(tài)性進行快速檢 測。
[0044] 應(yīng)當(dāng)理解的是，以上的一般描述和后文的細(xì)節(jié)描述僅是示例性和解釋性的，并不 能限制本發(fā)明。
【附圖說明】
[0045] 圖1是本發(fā)明實施例中提供的G238位點檢測結(jié)果為野生型時G238G反應(yīng)液檢測 擴增曲線圖；
[0046] 圖2是本發(fā)明實施例中提供的G238位點檢測結(jié)果為野生型時G238C反應(yīng)液檢測 擴增曲線圖；
[0047] 圖3是本發(fā)明實施例中提供的G238位點檢測結(jié)果為突變型純合子時G238G反應(yīng) 液檢測擴增曲線圖；
[0048] 圖4是本發(fā)明實施例中提供的G238位點檢測結(jié)果為突變型純合子時G238C反應(yīng) 液檢測擴增曲線圖；
[0049] 圖5是本發(fā)明實施例中提供的G238位點檢測結(jié)果為突變型雜合子時G238G反應(yīng) 液檢測擴增曲線圖；
[0050] 圖6是本發(fā)明實施例中提供的G238位點檢測結(jié)果為突變型雜合子時G238C反應(yīng) 液檢測擴增曲線圖。
【具體實施方式】
[0051] 這里將詳細(xì)地對示例性實施例進行說明，其示例表示在附圖中。下面的描述涉及 附圖時，除非另有表示，不同附圖中的相同數(shù)字表示相同或相似的要素。以下示例性實施例 中所描述的實施方式并不代表與本發(fā)明相一致的所有實施方式。相反，它們僅是與如所附 權(quán)利要求書中所詳述的、本發(fā)明的一些方面相一致的裝置的例子。
[0052] 本說明書中的各個實施例均采用遞進的方式描述，各個實施例之間相同相似的部 分互相參見即可，每個實施例重點說明的都是與其它實施例的不同之處。
[0053] 實施例一
[0054] 本發(fā)明提供一種TPMT基因多態(tài)性檢測試劑盒，其特征在于，所述TPMT基因多態(tài)性 檢測試劑盒包括PCR反應(yīng)液，其中，所述PCR反應(yīng)液包括G238C檢測反應(yīng)液、G238G檢測反應(yīng) 液、G460A檢測反應(yīng)液、G460G檢測反應(yīng)液、A719G檢測反應(yīng)液和A719A檢測反應(yīng)液，且上述 6種檢測反應(yīng)液均包括用于靶多核苷酸擴增的上下游引物和用于靶多核苷酸檢測的探針。
[0055] 進一步的，所述G238C檢測反應(yīng)液包括0· 2 ymol/L-O· 4 ymol/L用于靶多核苷酸 擴增的上下游引物和0.2μπι〇1/1-0.4μπι〇1/1用于靶多核苷酸檢測的探針，其中，所述用于 靶多核苷酸擴增的上下游引物的堿基序列為：上游引物：5' -GTAAATGTATGATTTTATGCAGGT
[0056] GTC-3 ' ；下游引物：5 ' -TCTGAGTAAGAAAGATTCTGCTCTGTAA-3 '。
[0057] 所述G238G檢測反應(yīng)液包括0· 2 ymol/L-O· 4 ymol/L用于靶多核苷酸擴增的上下 游引物和〇. 2 ymol/L-O. 4 μ mol/L用于革Ε1多核苷酸檢測的探針，其中，所述用于革Ε1多核苷 酸擴增的上下游引物的堿基序列為：上游引物：5' -GTAAATGTATGATTTTATGCAGGTCTG-3' ；下 游引物：5' -TCTGAGTAAGAAAGATTCTGCTCTGTAA-3'。
[0058] 所述G238C檢測反應(yīng)液和G238G檢測反應(yīng)液中所述用于靶多核苷酸檢測的探針的 堿基序列均為：5' FAM-ACCGGGGACACAGTGTAGTTGGTGTG-BHQ13'。密碼子為 80。
[0059] 所述G460A檢測反應(yīng)液包括0· 2 ymol/L-O· 4 ymol/L用于靶多核苷酸擴增的上下 游引物和〇. 2 ymol/L-O. 4 μ mol/L用于革Ε1多核苷酸檢測的探針，其中，所述用于革Ε1多核苷 酸擴增的上下游引物的堿基序列為：上游引物：5' -TGACATGATTTGGGATAGAGCAA-3' ；下游引 物：5' -CCTATTTCAAACTCATAGAAGTCTAAGC-3'。
[0060] 所述G460G檢測反應(yīng)液包括0· 2 ymol/L-O. 4 ymol/L用于靶多核苷酸擴增的上下 游引物和〇. 2 ymol/L-O. 4 μ mol/L用于革E1多核苷酸檢測的探針，其中，所述用于革E1多核苷 酸擴增的上下游引物的堿基序列為：上游引物：5' -TGACATGATTTGGGATAGAGCAG-3' ；下游引 物：5' -CCTATTTCAAACTCATAGAAGTCTAAGC-3'。
[0061 ] 所述G460A檢測反應(yīng)液和G460G檢測反應(yīng)液中所述用于靶多核苷酸檢測的探針的 堿基序列均為：5' FAM-TAGTTGCCATCAATCCAGGTGATCGC-BHQ13'。密碼子為 154。
[0062] 所述A719G檢測反應(yīng)液包括0· 2 ymol/L-O. 4 ymol/L用于靶多核苷酸擴增的上下 游引物和〇. 2 ymol/L-O. 4 μ mol/L用于革E1多核苷酸檢測的探針，其中，所述用于革E1多核苷 酸擴增的上下游引物的堿基序列為：上游引物：5' -TGTCTCATTTACTTTTCTGTAAGGACAC-3';下 游引物：5' -GTTGTCTTGAGAAGGTTGATGCTT-3'。
[0063] 所述A719A檢測反應(yīng)液包括0· 2 ymol/L-O. 4 ymol/L用于靶多核苷酸擴增的上下 游引物和〇. 2