μM, 100 μΜ, 200μΜ的溶液；
[0103] 2)在KLK7活性緩沖液中加入式I所示化合物，在37°C作用15分鐘；
[0104] 3)加入熒光底物MCa-R-P-K-P-V-E-Nval-W-R-K(Dnp)-NH2，在 37°C下測(cè)KLK7 的活 性15分鐘，采用熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光值，根據(jù)熒光值的大小估算KLK7的活性。
[0105] 陰性對(duì)照組：在KLK7的活性緩沖液中未加入式I所示化合物，其它操作條件均與 實(shí)驗(yàn)組相同。
[0106] 根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)組和陰性對(duì)照組獲得的KLK7的活性計(jì)算式I所示化合物對(duì)KLK7的 抑制率，計(jì)算抑制率的公式為％inhibition= (1-a/b)X100%，計(jì)算結(jié)果如表1所示；其 中，a為待測(cè)樣品的酶活，b為陰性對(duì)照的酶活。
[0107] 表1為式I所示化合物在不同濃度下對(duì)KLK7活性的抑制率，根據(jù)表1所示的結(jié)果 繪制式I所示化合物的濃度與抑制率的關(guān)系圖，采用KaleidaGraph軟件進(jìn)行曲線擬合得到 式I所示化合物的濃度與抑制率的關(guān)系曲線，如圖1所示。
[0108] 由表1和圖1的結(jié)果可以看出，隨著式I所示化合物濃度的增加，對(duì)KLK7活性的 抑制率逐漸增高，式I所示化合物的濃度為200μΜ時(shí)，對(duì)KLK7活性的抑制率達(dá)到100%。
[0109] 因此，式I所示化合物對(duì)KLK7具有優(yōu)異的抑制效果，該化合物作為活性組分加入 適當(dāng)?shù)妮o料和助劑可制備成抑制KLK7活性的藥物制劑。
[0110] 表1式I所示化合物在不同濃度下對(duì)KLK7活性的抑制率
[0111]
[0112] 由上述描述可以看出，本發(fā)明提供的抑制激肽釋放酶KLK7的化合物的制備方法 簡單易行，能夠有效的抑制KLK7的活性，加入適當(dāng)?shù)妮o料和助劑可制備成抑制KLK7活性的 藥物制劑。
[0113] 所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：以上任何實(shí)施例的討論僅為示例性的，并非 旨在暗示本公開的范圍（包括權(quán)利要求）被限于這些例子；在本發(fā)明的思路下，以上實(shí)施例 或者不同實(shí)施例中的技術(shù)特征之間也可以進(jìn)行組合，步驟可以以任意順序?qū)崿F(xiàn)，并存在如 上所述的本發(fā)明的不同方面的許多其它變化，為了簡明它們沒有在細(xì)節(jié)中提供。因此，凡在 本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何省略、修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的 保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種抑制激肽釋放酶KLK7的化合物，其特征在于，具有式I所示結(jié)構(gòu)：2. -種權(quán)利要求1所述化合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟1，取式II所示化合物與鹵代丙烷在第一溶劑、第一催化劑和加熱回流條件下發(fā) 生親核取代反應(yīng)生成式III所示化合物； 步驟2,取式III所示化合物與鹵化試劑在溶劑和溫度條件下發(fā)生鹵化反應(yīng)，式III所 示化合物的鹵化產(chǎn)物在堿性條件下發(fā)生水解反應(yīng)得到式IV所示化合物； 步驟3,取式IV所示化合物與水合肼在乙醇和加熱回流條件下發(fā)生縮合反應(yīng)生成式V 所示化合物； 步驟4,取式V所示化合物和式VI所示化合物在第二溶劑、第二催化劑和加熱回流條件 下發(fā)生親核取代反應(yīng)生成式VII所示化合物； 步驟5,取式VII所示化合物與拆分劑和無機(jī)酸溶液混合，在60-100°C下攪拌1~2. 0 小時(shí)，冷卻至室溫，過濾，向?yàn)V出的固體中加堿即得式I所示化合物；3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述式VI所示化合物制備方法包括 以下步驟： (1) 取式VIII所示化合物與三苯基氯甲烷在第三溶劑、第三催化劑和室溫條件下進(jìn)行 氨基保護(hù)反應(yīng)得到式IX所示化合物，所述有機(jī)堿為三乙胺或吡啶； (2) 取式IX所示化合物與對(duì)甲基芐氯在第四溶劑、第四催化劑和加熱回流條件下發(fā)生 親核取代反應(yīng)生成式X所示化合物； (3) 取式X所示化合物在80 %醋酸水溶液中加熱回流1~3小時(shí)后加入堿性溶液反應(yīng)， 得到式XI所示化合物； (4) 取式XI所示化合物溶于第五溶劑、第五催化劑，并緩慢滴加氯乙酰氯，室溫條件下 發(fā)生氮?；磻?yīng)得到式VI所示化合物，反應(yīng)時(shí)間1~3小時(shí)；4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物的制備方法，其特征在于，取式III所示化合物和二 苯醚加熱至120~140°C，在光照下通入氯氣，繼續(xù)加熱至160~170°C發(fā)生鹵化反應(yīng)，通完 氯氣后冷卻至100~110°C，加入磷酸鋅和碳酸鈉水溶液在加熱回流條件下發(fā)生水解反應(yīng) 得式IV所示化合物；所述式III所示化合物、氯氣、磷酸鋅、水、氫氧化鈉的摩爾比為1. 0 : 2. 1 ~2. 5 :0· 001 ~0· 003 :1· 4 ~1. 8 :0· 3 ~0· 8。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物的制備方法，其特征在于，所述式II所示化合物、 1-氯丙烷、第一催化劑的摩爾比為1. 0 :1. 1~1. 5 :1. 0~1. 2 ; 所述式IV所示化合物、水合肼的摩爾比為1. 0 :1. 5~2. 0 ; 所述式V所示化合物、式VI所示化合物、第二催化劑的摩爾比為1. 0:1. 0~1. 4:1. 0~ 2. 0 ； 所述式VII所示化合物與拆分劑的摩爾比為1 : 1. 0~1. 2。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物的制備方法，其特征在于，所述式VIII所示化合物、三 苯基氯甲烷、第三催化劑的摩爾比為1. 0 :1. 1~1. 5 :1. 2~2. 3 ; 所述式IX所示化合物、對(duì)甲基芐氯，第四催化劑的摩爾比為1. 〇 :1. 1~1. 5 :1. 0~ 2. 0 ； 所述式X所示化合物、醋酸的摩爾比為1 :8~11. 0 ; 所述式XI所示化合物、氯乙酰氯、第五催化劑的摩爾比為1 :1. 〇~1. 3 :1. 2~2. 3。7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物的制備方法，其特征在于，所述拆分劑為右旋二苯甲 酰酒石酸（D-DBTA)，反應(yīng)溫度為60~100°C，反應(yīng)時(shí)間為1~3小時(shí)；所述無機(jī)酸為鹽酸、 硫酸、硝酸或磷酸。8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物的制備方法，其特征在于，所述親核取代反應(yīng)加熱回 流溫度為60~140°C，反應(yīng)時(shí)間1~4小時(shí)； 所述縮合反應(yīng)的加熱回流溫度為78~100°C，反應(yīng)時(shí)間6~12小時(shí)； 所述氨基保護(hù)反應(yīng)的溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間1~5小時(shí)； 所述氮?；磻?yīng)的溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間1~5小時(shí)。9. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物的制備方法，其特征在于，所述第一溶劑、第二溶劑、 第三溶劑、第四溶劑和第五溶劑分別獨(dú)立地任意選自甲苯、N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃、 乙腈、二氧六環(huán)、氯仿、乙醚中的任意一種或一種以上； 所述第一催化劑、第二催化劑、第三催化劑、第四催化劑和第五催化劑分別獨(dú)立地任意 選自無機(jī)堿或有機(jī)堿，所述無機(jī)堿為碳酸鉀、碳酸鈉、氫氧化鈉、碳酸銫或氫氧化鉀，所述有 機(jī)喊為二乙胺或吡啶。10. -種權(quán)利要求1所述的抑制激肽釋放酶KLK7的用途，其特征在于，式I所示化合物 在抑制激肽釋放酶KLK7活性的藥物的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抑制激肽釋放酶KLK7的化合物、制備方法和用途，該化合物的制備方法包括以下步驟：式II所示化合物與鹵代丙烷發(fā)生親核取代反應(yīng)生成式III所示化合物；式III所示化合物與鹵化試劑發(fā)生鹵化反應(yīng)，鹵化產(chǎn)物在堿性條件下發(fā)生水解反應(yīng)得到式IV所示化合物；式IV所示化合物與水合肼發(fā)生縮合反應(yīng)生成式V所示化合物；式V所示化合物和式VI所示化合物發(fā)生親核取代反應(yīng)生成式VII所示化合物；式VII所示化合物與拆分劑和無機(jī)酸溶液混合，在60-100℃下攪拌1～2.0小時(shí)，冷卻至室溫，過濾，向?yàn)V出的固體中加堿即得抑制激肽釋放酶KLK7的化合物、制備方法和用途，即式I所示化合物。本發(fā)明提供的化合物對(duì)KLK7活性抑制效果明顯，可作為制備抑制KLK7活性的藥物的活性組分。
【IPC分類】A61P29/00, A61P17/00, C07D487/04
【公開號(hào)】CN105330665
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510744242
【發(fā)明人】王芳宇, 譚瀟, 王德平, 嚴(yán)加林, 何麗芳, 周冬升, 李玉林
【申請(qǐng)人】衡陽師范學(xué)院
【公開日】2016年2月17日
【申請(qǐng)日】2015年11月4日