養(yǎng)基中，然后放入25°C培養(yǎng)室中培養(yǎng)10天，待病原菌菌絲布滿整個(gè)培養(yǎng)基 后，備用。按照以上培養(yǎng)方法，分別培養(yǎng)4號(hào)生理小種和1號(hào)生理小種固體菌塊。
[0042] 其次，制備固體病原菌菌塊。將培養(yǎng)的4號(hào)生理小種和1號(hào)生理小種固體菌塊按 重量比4 : 1的比例混合均勻，得到固體病原菌菌塊。
[0043] 5)復(fù)合病原菌的制備
[0044] 在IL液體病原菌菌液中添加 100g搗碎的固體病原菌菌塊，混合均勻即得接種專 用復(fù)合病原菌。配制的接種專用復(fù)合病原菌最好在兩天內(nèi)使用，效果比較好。
[0045] 實(shí)施例2
[0046] 香蕉枯萎病復(fù)合病原菌的制備：
[0047] 1)培養(yǎng)基配制
[0048] 馬鈴薯-乳糖培養(yǎng)液：稱取去皮馬鈴薯塊100g，加水1200ml煮沸15min左右至 馬鈴薯塊能被玻璃棒搗碎為止，用雙層紗布過濾取汁，加水至1000ml，稱取15g乳糖加入馬 鈴薯過濾夜中，攪拌均勻，裝入三角瓶中，放入高壓滅菌鍋內(nèi)在121°C和98kpa下高溫滅菌 15min〇
[0049] 麥粒培養(yǎng)基：將適量麥粒用水浸泡4h，撈起后將水瀝干，然后取約70g麥粒，裝 入體積為150ml的培養(yǎng)瓶中，蓋好瓶蓋，放入高壓滅菌鍋內(nèi)在121°C和98kpa下高溫滅菌 15min〇
[0050] 2)病原菌母液的培養(yǎng)
[0051] 將香蕉枯萎病4號(hào)生理小種和1號(hào)生理小種菌塊分別接種于滅菌后的馬鈴薯-乳 糖培養(yǎng)液中，每300ml培養(yǎng)液接入3塊直徑約I. 5cm的菌餅，在溫度為22°C、轉(zhuǎn)速為150r/ min搖床上振蕩培養(yǎng)5天后，備用。
[0052] 3)液體病原菌菌液制備
[0053] 首先，培養(yǎng)病原菌菌液。配制7L和70L馬鈴薯一乳糖培養(yǎng)液，分別裝入10L-100L 微生物發(fā)酵設(shè)備的IOL和100L發(fā)酵罐中，然后在121°C下高溫滅菌30min。待培養(yǎng)液冷卻 后，向IOL小發(fā)酵罐中接種500ml病原菌母液，25°C培養(yǎng)7天后，將小發(fā)酵罐中的菌液抽到 100L大發(fā)酵罐中進(jìn)行接種，25°C培養(yǎng)8天，當(dāng)菌液的濃度達(dá)到10 scfU/mL后，將菌液從發(fā)酵 罐抽出放到25L塑料壺中備用。按照以上培養(yǎng)方法，分別培養(yǎng)香蕉枯萎病4號(hào)生理小種和 1號(hào)生理小種病原菌菌液。
[0054] 其次，制備液體病原菌菌液。將經(jīng)10L-100L微生物發(fā)酵設(shè)備培養(yǎng)的香蕉枯萎病4 號(hào)生理小種和1號(hào)生理小種菌液分別稀釋到10 6cfu/mL濃度，然后將稀釋后的兩者菌液按 體積比3 : 1的比例混合均勻，得到液體病原菌菌液。
[0055] 4)固體病原菌菌塊制備
[0056] 首先，培養(yǎng)病原菌菌塊。用消毒過的移液搶取3ml香蕉枯萎病病原菌母液，接種至 消毒后的麥粒培養(yǎng)基中，然后放入22°C培養(yǎng)室中培養(yǎng)8天，待病原菌菌絲布滿整個(gè)培養(yǎng)基 后，備用。按照以上培養(yǎng)方法，分別培養(yǎng)4號(hào)生理小種和1號(hào)生理小種固體菌塊。
[0057] 其次，制備固體病原菌菌塊。將培養(yǎng)的4號(hào)生理小種和1號(hào)生理小種固體菌塊按 重量比3 : 1的比例混合均勻，得到固體病原菌菌塊。
[0058] 5)復(fù)合病原菌的制備
[0059] 在IL液體病原菌菌液中添加80g搗碎的固體病原菌菌塊，混合均勻即得接種專用 復(fù)合病原菌。配制的接種專用復(fù)合病原菌最好在兩天內(nèi)使用，效果比較好。
[0060] 實(shí)施例3
[0061] 香蕉枯萎病復(fù)合病原菌的制備：
[0062] 1)培養(yǎng)基配制
[0063] 馬鈴薯-乳糖培養(yǎng)液：稱取去皮馬鈴薯塊300g，加水800ml煮沸25min左右至馬 鈴薯塊能被玻璃棒搗碎為止，用雙層紗布過濾取汁，加水至1000ml，稱取25g乳糖加入馬 鈴薯過濾夜中，攪拌均勻，裝入三角瓶中，放入高壓滅菌鍋內(nèi)在121°C和98kpa下高溫滅菌 25min〇
[0064] 麥粒培養(yǎng)基：將適量麥粒用水浸泡6h，撈起后將水瀝干，然后取約80g麥粒，裝 入體積為100mL的培養(yǎng)瓶中，蓋好瓶蓋，放入高壓滅菌鍋內(nèi)在121°C和98kpa下高溫滅菌 25min〇
[0065] 2)病原菌母液的培養(yǎng)
[0066] 將香蕉枯萎病4號(hào)生理小種和1號(hào)生理小種菌塊分別接種于滅菌后的馬鈴薯-乳 糖培養(yǎng)液中，每300ml培養(yǎng)液接入3塊直徑約I. 5cm的菌餅，在溫度為28°C、轉(zhuǎn)速為150r/ min搖床上振蕩培養(yǎng)7天后，備用。
[0067] 3)液體病原菌菌液制備
[0068] 首先，培養(yǎng)病原菌菌液。配制7L和70L馬鈴薯一乳糖培養(yǎng)液，分別裝入10L-100L 微生物發(fā)酵設(shè)備的IOL和100L發(fā)酵罐中，然后在121°C下高溫滅菌30min。待培養(yǎng)液冷卻 后，向IOL小發(fā)酵罐中接種500ml病原菌母液，25°C培養(yǎng)7天后，將小發(fā)酵罐中的菌液抽到 100L大發(fā)酵罐中進(jìn)行接種，25°C培養(yǎng)8天左右，當(dāng)菌液的濃度達(dá)到10 scfu/mL后，將菌液從 發(fā)酵罐抽出放到25L塑料壺中備用。按照以上培養(yǎng)方法，分別培養(yǎng)香蕉枯萎病4號(hào)生理小 種和1號(hào)生理小種病原菌菌液。
[0069] 其次，制備液體病原菌菌液。將經(jīng)10L-100L微生物發(fā)酵設(shè)備培養(yǎng)的香蕉枯萎病4 號(hào)生理小種和1號(hào)生理小種菌液分別稀釋到10 6cfu/mL濃度，然后將稀釋后的兩者菌液按 體積比5 : 1的比例混合均勻，得到液體病原菌菌液。
[0070] 4)固體病原菌菌塊制備
[0071] 首先，培養(yǎng)病原菌菌塊。用消毒過的移液搶取3ml香蕉枯萎病病原菌母液，接種至 消毒后的麥粒培養(yǎng)基中，然后放入28°C培養(yǎng)室中培養(yǎng)12天，待病原菌菌絲布滿整個(gè)培養(yǎng)基 后，備用。按照以上培養(yǎng)方法，分別培養(yǎng)4號(hào)生理小種和1號(hào)生理小種固體菌塊。
[0072] 其次，制備固體病原菌菌塊。將培養(yǎng)的4號(hào)生理小種和1號(hào)生理小種固體菌塊按 重量比5 : 1的比例混合均勻，得到固體病原菌菌塊。
[0073] 5)復(fù)合病原菌的制備
[0074] 在IL液體病原菌菌液中添加120g搗碎的固體病原菌菌塊，混合均勻即得接種專 用復(fù)合病原菌。配制的接種專用復(fù)合病原菌最好在兩天內(nèi)使用，效果比較好。
[0075] 上述實(shí)施例，只是本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并非用來限制本發(fā)明實(shí)施范圍，故凡以本 發(fā)明權(quán)利要求所述的特征及原理所做的等效變化或修飾，均應(yīng)包括在本發(fā)明權(quán)利要求范圍 之內(nèi)。
[0076] 復(fù)合病原菌致病性鑒定試驗(yàn)：
[0077] 1)香蕉品種：
[0078] 包括巴西蕉（AAA)、東蕉1號(hào)（AAA)、抗枯5號(hào)（AAA)、海貢（AA)、東競中把大蕉 (ABB)、廣粉1號(hào)（ABB)、粉雜1號(hào)（ABB)共7個(gè)品種，材料來源于東莞市香蕉蔬菜研究所建 立的香蕉種質(zhì)資源圃。
[0079] 2)試驗(yàn)基地的選擇：
[0080] 在香蕉枯萎病病區(qū)選擇田塊作為試驗(yàn)基地。試驗(yàn)基地要求地勢較高，地面比較平 整，排灌方便，雨期不會(huì)水浸，交通便利。經(jīng)過調(diào)查走訪，選擇在東莞市洪梅鎮(zhèn)農(nóng)科站內(nèi)建立 試驗(yàn)基地，試驗(yàn)基地占地面積約16668平方米，交通方便，排灌通暢，前作為巴西蕉，發(fā)病率 在50%左右。
[0081] 3)試驗(yàn)方法：
[0082] 試驗(yàn)設(shè)置兩個(gè)處理，即對(duì)照和復(fù)合病原菌處理。對(duì)照是將香蕉品種直接種植在試 驗(yàn)基地進(jìn)行抗病性鑒定；復(fù)合病原菌處理是將香蕉種苗接種復(fù)合病原菌后種植在試驗(yàn)基 地，再接種復(fù)合病原菌進(jìn)行抗病性鑒定。
[0083] 4)調(diào)查方法：
[0084] 種植后，經(jīng)常到田間觀察和調(diào)查植株生長情況和發(fā)病情況，做好相關(guān)記錄。發(fā)病 率指采收時(shí)發(fā)病株數(shù)與種植總株數(shù)的比值，發(fā)病時(shí)間指從種植到開始發(fā)病的天數(shù)。參照資 料，以發(fā)病率作為抗病水平評(píng)價(jià)依據(jù)，將香蕉品種分為高抗、抗病、中抗、耐病、感病等五個(gè) 類型。發(fā)病率< 10. 〇%，高抗；發(fā)病率10. 〇%~30. 0%，抗??；發(fā)病率30. 0%~50. 0%，中 抗；發(fā)病率50. 0%~70. 0%，耐病；發(fā)病率多70. 0%，感病。
[0085] 5)致病性鑒定：
[0086] 香蕉種苗的選擇。選擇7~8片葉、生長健壯的二級(jí)試管苗作為試驗(yàn)種苗。試驗(yàn)品 種包括巴西蕉、抗枯5號(hào)、海貢、東莞中把大蕉、廣粉1號(hào)、粉雜1號(hào)，東蕉1號(hào)等不同品種。
[0087] 香蕉種苗的傷根浸泡接種。種苗接種前先控水1~2天，使育苗杯里的土壤比較 干爽；然后用鋒利