小刀在育苗杯內(nèi)插2~3刀，深度約8cm左右；再將試管苗浸泡到裝有接 種專用復(fù)合病原菌的盆中，液面要淹過育苗杯杯口 2cm左右，浸泡時間約5min。
[0088] 香蕉種苗傷根接種后，即刻脫掉育苗杯，種植到試驗小區(qū)內(nèi)，每個小區(qū)種植約15 株，株距2m。種植后24h左右再淋足定根水。
[0089] 香蕉種苗種植后15天、45天、90天分別接種一次。接種方法是：用小鋤頭在離香 蕉球莖約20-30cm處打3個小穴，每個小穴淋150ml接種專用復(fù)合病原菌，再覆蓋泥土。接 種后24h內(nèi)禁止淋水，以便病原菌定殖。
[0090] 6)結(jié)果與分析：
[0091 ] 表1不同品種田間發(fā)病率調(diào)查表
[0093] 據(jù)查資料，巴西蕉、廣粉1號為香蕉枯萎病感病品種，東蕉1號為中抗品種，抗枯5 號、海貢、東莞中把大蕉、粉雜1號為高抗品種。
[0094] 從表1中對照來看，巴西蕉發(fā)病率為68. 3%，抗病水平表現(xiàn)為耐病，與品種本身的 抗病性（感病品種）有所不同；東蕉1號發(fā)病率為26. 8%，抗病水平表現(xiàn)為抗病，與品種本 身的抗病性（中抗品種）有所不同?？箍?號、海貢、東莞中把大蕉、廣粉1號、粉雜1號5 個品種的發(fā)病率分別為3. 5%、2. 6%、2. 2%、91. 7%、3. 4%，抗病水平分別表現(xiàn)為高抗、高 抗、高抗、感病、高抗，與品種本身的抗病性表現(xiàn)一致。說明對照與大田生產(chǎn)比較一致，但與 品種本身的抗病性略有差異。
[0095] 從香蕉枯萎病復(fù)合病原菌處理來看，巴西蕉、廣粉1號的發(fā)病率分別為95. 4%和 98. 6%，抗病水平表現(xiàn)為感病，與品種本身的抗病性（感病品種）表現(xiàn)一致。東蕉1號的 發(fā)病率分別為45. 1%，抗病水平表現(xiàn)為中抗，與品種本身的抗病性（中抗品種）表現(xiàn)一致。 抗枯5號、海貢、東莞中把大蕉、粉雜1號4個品種的發(fā)病率分別為6. 4%、7. 8%、6. 5%、 8. 6%，抗病水平表現(xiàn)為高抗，與品種本身的抗病性（高抗品種）表現(xiàn)一致。說明通過香蕉 枯萎病復(fù)合病原菌處理，可以比較準確的鑒定品種的抗病性，從而篩選出抗（耐）香蕉枯萎 病品種。
[0096] 表2不同品種田間發(fā)病時間調(diào)查表
[0098] 從表2可以看出，對于感病品種巴西蕉和廣粉1號、中抗品種東蕉1號而言，通過 接種香蕉枯萎病復(fù)合病原菌處理后，發(fā)病時間分別縮短75. 8天、32. 3天、44. 5天，縮短時間 比較明顯。對于抗病品種抗枯5號、海貢、東莞中把大蕉、粉雜1號而言，通過接種香蕉枯萎 病復(fù)合病原菌處理后，發(fā)病時間分別縮短20. 4天、17. 2天、11. 9天、24. 9天，有所縮短。說 明通過香蕉枯萎病復(fù)合病原菌處理，縮短了香蕉品種抗病性鑒定的時間，對感病和中抗品 種效果更明顯。
【主權(quán)項】
1. 一種香蕉枯萎病復(fù)合病原菌，其特征在于，由液體病原菌菌液和固體病原菌菌塊組 成，每1L所述液體病原菌菌液中混合80~120g所述固體病原菌菌塊。2. 如權(quán)利要求1中所述香蕉枯萎病復(fù)合病原菌，其特征在于，所述液體病原菌菌液由 香蕉枯萎病菌塊接種于馬鈴薯-乳糖培養(yǎng)液中制得；所述固體病原菌菌塊由香蕉枯萎病病 原菌母液接種至麥粒培養(yǎng)基中制得。3. 如權(quán)利要求2中所述香蕉枯萎病復(fù)合病原菌，其特征在于，所述液體病原菌菌液為 濃度為106cfu/mL的香蕉枯萎病4號生理小種病原菌菌液和1號生理小種病原菌菌液混 合物，所述香蕉枯萎病4號生理小種病原菌菌液和1號生理小種病原菌菌液之間的體積比 3 ~5 : 1〇4. 如權(quán)利要求2中所述香蕉枯萎病復(fù)合病原菌，其特征在于，所述固體病原菌菌塊為 香蕉枯萎病4號生理小種固體病原菌菌塊和1號生理小種固體病原菌菌塊的混合物，所述 香蕉枯萎病4號生理小種固體病原菌菌塊和1號生理小種固體病原菌菌塊之間的重量比 3 ~5 : 1〇5. 如權(quán)利要求1-4中任意一項所述香蕉枯萎病復(fù)合病原菌的制備方法，其特征在于， 具體為： (1) 病原菌母液的培養(yǎng)：將香蕉枯萎病4號生理小種和1號生理小種菌塊分別接種于 馬鈴薯-乳糖培養(yǎng)液中，22°C~28°C下培養(yǎng)5~7天后，分別制得香蕉枯萎病4號生理小種 的病原菌母液和香蕉枯萎病1號生理小種的病原菌母液； (2) 液體病原菌菌液制備： A. 將香蕉枯萎病4號生理小種和1號生理小種的病原菌母液分別接種到初級馬鈴 薯-乳糖培養(yǎng)液中，22°C~28°C下培養(yǎng)6~8天，得到香蕉枯萎病4號生理小種和1號生理 小種的初級培養(yǎng)物； B. 接著將初級培養(yǎng)物接種到次級馬鈴薯-乳糖培養(yǎng)液中，22°C~28°C下培養(yǎng)7-9天至 菌液濃度為108cfu/mL，分別得到香蕉枯萎病4號生理小種和1號生理小種病原菌菌液； C. 分別將所述香蕉枯萎病4號生理小種和1號生理小種病原菌菌液，稀釋至106cfu/ mL，再將稀釋后的兩者菌液按體積比3~5 : 1的比例混合均勻，得到所述液體病原菌菌 液； (3) 固體病原菌菌塊制備：香蕉枯萎病4號生理小種和1號生理小種的病原菌母液分 別接種至麥粒培養(yǎng)基中，22°C~28°C下培養(yǎng)8~12天，分別得到香蕉枯萎病4號生理小種 和1號生理小種的固體菌塊，將香蕉枯萎病4號生理小種和1號生理小種的固體菌塊按重 量比3~5 : 1的比例混合均勻，得到所述固體病原菌菌塊； (4) 復(fù)合病原菌的制備：按1L液體病原菌菌液加入80~120g固體病原菌菌塊的量， 將所述固體病原菌菌塊搗碎在所述液體病原菌菌液中，混合均勻即得所述香蕉枯萎病復(fù)合 病原菌。6. 如權(quán)利要求5中所述香蕉枯萎病復(fù)合病原菌的制備方法，其特征在于，所述初級馬 鈴薯-乳糖培養(yǎng)液和次級馬鈴薯-乳糖培養(yǎng)液為配方相同的馬鈴薯-乳糖培養(yǎng)液培養(yǎng)液。7. 如權(quán)利要求6中所述香蕉枯萎病復(fù)合病原菌的制備方法，其特征在于，所述的馬鈴 薯-乳糖培養(yǎng)液通過以下方法制得：稱取去皮馬鈴薯塊100~300g，加水800~1200ml 煮沸15~25min至馬鈴薯塊能被玻璃棒搗碎為止，用雙層紗布過濾取汁，加水至1000ml， 稱取15~25g乳糖加入馬鈴薯過濾夜中，攪拌均勻，裝入三角瓶中，放入高壓滅菌鍋內(nèi)在 121°C±2°C和98kpa±0. 2kpa下高溫滅菌15~25min;制得所述馬鈴薯-乳糖培養(yǎng)液。8. 如權(quán)利要求5中所述香蕉枯萎病復(fù)合病原菌的制備方法，其特征在于，所述的麥粒 培養(yǎng)基通過以下方法制得：將麥粒用水浸泡4~6h，瀝干，取70~80g麥粒，裝入體積為 100~150ml的培養(yǎng)瓶中，蓋好瓶蓋，放入高壓滅菌鍋內(nèi)在121°C±2°C和98kpa±0. 2kpa下 高溫滅菌15~25min;制得所述麥粒培養(yǎng)基。9. 一種香蕉枯萎病復(fù)合病原菌在抗病品種選育中的應(yīng)用，其特征在于：使用了權(quán)利要 求1-8中任意一項所述的香蕉枯萎病復(fù)合病原菌。10. -種香蕉種苗和植株接種方法，其特征在于，具體為： 首先，在香蕉枯萎病病區(qū)選擇田塊作為試驗基地； 其次，選擇7~8片生長健壯的二級試管苗作為試驗種苗，用鋒利小刀在育苗杯內(nèi)插2~3刀，深度約8cm左右，進行傷根處理， 再將試管苗浸泡到裝有權(quán)利要求1-8中任意一項所述的香蕉枯萎病復(fù)合病原菌的盆 中，浸泡時間約5min;再次，將傷根浸泡接種后的香蕉種苗種植于試驗基地，種植后24h左 右再淋足定根水； 另外，在香蕉種苗種植后15天、45天、90天分別挖穴淋菌接種一次權(quán)利要求1-8中任 意一項所述的香蕉枯萎病復(fù)合病原菌。
【專利摘要】本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)植物保護技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種香蕉枯萎病復(fù)合病原菌及其制備方法和應(yīng)用；本發(fā)明將香蕉枯萎病病原菌4號和1號生理小種菌塊分別接種于馬鈴薯-乳糖培養(yǎng)液中得到病原菌母液；將香蕉枯萎病4號和1號病原菌母液分別在馬鈴薯-乳糖培養(yǎng)液中培養(yǎng)后稀釋混合，得到液體病原菌菌液；將香蕉枯萎病4號和1號病原菌母液分別在麥粒培養(yǎng)基中培養(yǎng)出生理小種固體菌塊，再將兩者按比例混合得到固體病原菌菌塊；最后，在液體病原菌菌液中添加固體病原菌菌塊，混合均勻即得接種專用復(fù)合病原菌。本發(fā)明的復(fù)合病原菌可以準確的鑒定不同香蕉品種的抗病性，縮短香蕉品種抗病性鑒定的時間。
【IPC分類】C12R1/77, C12N1/14, A01G7/06
【公開號】CN105400708
【申請?zhí)枴緾N201510964537
【發(fā)明人】李洪波, 呂順, 劉文清, 高芳云, 莊華才, 曾莉莎, 鄭漢文, 王芳, 陶金
【申請人】東莞市香蕉蔬菜研究所
【公開日】2016年3月16日
【申請日】2015年12月18日