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核酸精制設(shè)備的制造方法_2

文檔序號:9702864閱讀:來源:國知局
被底部402封閉。
[0077]容器組裝體1是進(jìn)行如下處理的容器:即在吸附容器100內(nèi)使核酸與未圖示的磁性粒子結(jié)合,并在磁性粒子在清洗容器200內(nèi)移動期間對核酸進(jìn)行精制,從而在溶出容器300內(nèi)進(jìn)行使核酸溶出至未圖示的溶出液液滴中的前處理;在反應(yīng)容器400內(nèi)相對于含有核酸的溶出液的液滴進(jìn)行聚合酶反應(yīng)的熱循環(huán)處理。
[0078]容器組裝體1的材質(zhì)并不特別限定,例如可以是玻璃、高分子、金屬等。若容器組裝體1的材質(zhì)選擇玻璃、高分子等在可見光中具有透明性的材質(zhì),則能夠從容器組裝體1的外部觀察內(nèi)部(空洞內(nèi)),因此更加優(yōu)選。另外,若容器組裝體1的材質(zhì)選擇磁力可透過的物質(zhì)、非磁性體,則在使未圖示的磁性粒子通過容器組裝體1的情況下等,因從容器組裝體1的外部施加磁力而使進(jìn)行上述情況變得容易,因此優(yōu)選。容器組裝體1的材質(zhì)例如可以是聚丙烯樹脂。
[0079]吸附容器100具有在內(nèi)部收納未圖示的吸附液的圓筒狀的注射器部120、插入注射器部120的內(nèi)部的可動式的按壓件亦即柱塞部130、以及固定于柱塞部130的一方的端部的蓋110。吸附容器100通過使蓋110相對于注射器部120移動而使柱塞部130在注射器部120的內(nèi)表面滑動,從而能夠?qū)⑹占{于注射器部120內(nèi)的未圖示的吸附液向清洗容器200擠出。此外,稍后對吸附液進(jìn)行敘述。
[0080]清洗容器200可以通過將第一清洗容器?第三清洗容器210、220、230接合并組裝而得到。第一清洗容器?第三清洗容器210、220、230分別在內(nèi)部具有被未圖示的油層分隔的一個以上的清洗液層。而且,因?qū)⒌谝磺逑慈萜?第三清洗容器210、220、230接合,清洗容器200在內(nèi)部具有被未圖示的多個油層劃分的多個清洗液層。在本實(shí)施方式的清洗容器200中,對使用由第一清洗容器?第三清洗容器210、220、230構(gòu)成的三個清洗容器的例子進(jìn)行了說明,但并不局限于此,可以根據(jù)清洗液層的數(shù)量來適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行增減。此外,稍后對清洗液進(jìn)行敘述。
[0081 ] 溶出容器300接合于清洗容器200的第三清洗容器230,并能夠?qū)⑷艹鲆壕S持為液柱的形狀地收納在內(nèi)部。這里,“液柱”是指特定的液體在流路內(nèi)占據(jù)一個區(qū)域的情況下的液體。更具體而言,特定的液體的液柱是指在流路的長邊方向上實(shí)質(zhì)只有該特定的液體占據(jù)內(nèi)部的柱狀的液體,表示流路內(nèi)部的一定的空間被液體的液柱劃分出來的狀態(tài)。這里的實(shí)質(zhì)這一表達(dá)是指在液柱的周圍、即流路的內(nèi)壁也可以存在少量(例如薄膜狀)的其他物質(zhì)(液體等)。此外,稍后對溶出液進(jìn)行敘述。
[0082]核酸精制設(shè)備5包括吸附容器100、清洗容器200、以及溶出容器300。
[0083]反應(yīng)容器400是接合于溶出容器300且接受被從溶出容器300擠出的液體的容器,并且是熱循環(huán)處理時對包含檢體的溶出液的液滴進(jìn)行收納的容器。另外,反應(yīng)容器400還收納未圖示的試劑。此外,稍后對試劑進(jìn)行敘述。
[0084]2.容器組裝體的詳細(xì)構(gòu)造
[0085]接下來,使用圖5以及圖6對容器組裝體1的詳細(xì)構(gòu)造進(jìn)行說明。圖5是實(shí)施方式所涉及的容器組裝體1的圖3中的A-A剖視圖。圖6是實(shí)施方式所涉及的容器組裝體1的圖3中的C-C剖視圖。此外,實(shí)際上,容器組裝體1在填充有清洗液等內(nèi)容物的狀態(tài)下被組裝,但在圖5以及圖6中,由于是對容器組裝體1的構(gòu)造進(jìn)行說明,所以省略內(nèi)容物的記載。
[0086]2-1.吸附容器
[0087]對吸附容器100而言,從注射器部120的一方的開口端部插入有柱塞部130,而在柱塞部130的開口端部插入有蓋110。蓋110在其中央具有通氣部112,從而在對柱塞部130進(jìn)行操作時能夠利用通氣部112抑制柱塞部130的內(nèi)壓的變化。
[0088]柱塞部130是在注射器部120的內(nèi)周面進(jìn)行滑動的近似圓筒狀的按壓件,具有供蓋110插入的開口端部、從與該開口端部對置的底部沿注射器部120的長邊方向延伸的棒狀部132、以及棒狀部132的前端的前端部134。棒狀部132從柱塞部130的底部的中央突出,在棒狀部132的周圍形成有貫通孔,從而柱塞部130內(nèi)與注射器部內(nèi)120連通。
[0089]注射器部120構(gòu)成容器組裝體1的流路2的一部分,具有收納柱塞部130的大徑部、內(nèi)徑比該大徑部小的小徑部、內(nèi)徑從大徑部向小徑部縮徑的縮徑部、位于該小徑部的前端的吸附插入部122、以及覆蓋吸附插入部122的周圍的圓筒狀的吸附蓋部126。成為容器組裝體1的流路2的一部分的大徑部、小徑部以及吸附插入部122為大致圓筒狀。
[0090]在提供給操作者時,柱塞部130的前端部134將注射器部120的小徑部密封而將大徑部和縮徑部與小徑部分隔,從而形成兩個區(qū)域。
[0091]注射器部120的吸附插入部122插入清洗容器200中的第一清洗容器210的一方的開口端部亦即第一接受部214內(nèi)而與之嵌合,由此將注射器部120與第一清洗容器210接合。吸附插入部122的外周面與第一接受部214的內(nèi)周面緊貼,從而防止內(nèi)容物亦即液體向外部泄漏。
[0092]2-2.清洗容器
[0093]清洗容器200構(gòu)成容器組裝體1的流路2的一部分,是由第一清洗容器?第三清洗容器210、220、230構(gòu)成的組裝體。第一清洗容器?第三清洗容器210、220、230的基本構(gòu)造相同,因此,對第一清洗容器210的構(gòu)造進(jìn)行說明,而省略對第二、第三清洗容器220、230的說明。
[0094]第一清洗容器210是沿容器組裝體1的長邊方向延伸的近似圓筒狀,具有形成于一方的開口端部的第一插入部212、形成于另一方的開口端部的第一接受部214、以及覆蓋第一插入部212的周圍的圓筒狀的第一蓋部216。
[0095]第一插入部212的外徑與第二接受部224的內(nèi)徑大致相同。另外,第一接受部214的內(nèi)徑與吸附插入部122的外徑也大致相同。
[0096]將第一清洗容器210的第一插入部212插入第二清洗容器220的第二接受部224而與之嵌合,由此,第一插入部212的外周與第二接受部224的內(nèi)周緊貼而密封,并且將第一清洗容器210與第二清洗容器220接合。同樣地,將第一清洗容器?第三清洗容器210、220,230連結(jié)而形成清洗容器200。這里“密封”是指封閉為至少使收納于容器等的液體或氣體不會泄漏至外部,也可以包括對液體或氣體從外部向內(nèi)部侵入進(jìn)行封閉的情況。
[0097]2-3.溶出容器
[0098]溶出容器300是沿容器組裝體1的長邊方向延伸的近似圓筒狀,其構(gòu)成容器組裝體1的流路2的一部分。溶出容器300具有形成于一方的開口端部的溶出插入部302、以及形成于另一方的開口端部的溶出接受部304。
[0099]溶出接受部304的內(nèi)徑與第三清洗容器230的第三插入部232的外徑大致相同。將第三插入部232插入溶出接受部304而與之嵌合,由此第三插入部232的外周與溶出接受部304的內(nèi)周緊貼而密封,并且將第三清洗容器230與溶出容器300接合。
[0100]2-4.反應(yīng)容器
[0101]反應(yīng)容器400是沿容器組裝體1的長邊方向延伸的大致圓筒狀,其構(gòu)成容器組裝體1的流路2的一部分。反應(yīng)容器400具有形成于開口端部的反應(yīng)接受部404、形成于另一方的封閉的端部的底部402、以及覆蓋反應(yīng)接受部404的存儲部406。
[0102]反應(yīng)接受部404的內(nèi)徑與溶出容器300的溶出插入部302的外徑大致相同。將溶出插入部302插入反應(yīng)接受部404而與之嵌合,由此將溶出容器300與反應(yīng)容器400接合。
[0103]在反應(yīng)接受部404的周圍設(shè)置具有規(guī)定的空間的存儲部406。存儲部406具有能夠?qū)σ蛑?30的移動而從反應(yīng)容器400溢出的液體進(jìn)行收納的容積。
[0104]3.容器組裝體的內(nèi)容物以及容器組裝體的操作
[0105]接下來,使用圖7(a)對容器組裝體1的內(nèi)容物進(jìn)行說明,使用圖7以及圖8對容器組裝體1的操作進(jìn)行說明。圖7是對實(shí)施方式所涉及的容器組裝體1的操作進(jìn)行說明的示意圖。圖8是對實(shí)施方式所涉及的容器組裝體1的操作進(jìn)行說明的示意圖。此外,在圖7以及圖8中,對內(nèi)容物的狀態(tài)進(jìn)行說明,因此在流路2中表現(xiàn)出各容器而省略外形狀、接合構(gòu)造。
[0106]3-1.內(nèi)容物
[0107]圖7(a)表示圖1的狀態(tài)下的流路2內(nèi)的內(nèi)容物的狀態(tài)。流路2內(nèi)的內(nèi)容物從蓋110側(cè)朝向反應(yīng)容器400依次為吸附液10、第一油20、第一清洗液12、第二油22、第二清洗液14、第三油24、磁性粒子30、第三油24、第三清洗液16、第四油26、溶出液32、第四油26、以及試劑34。
[0108]對流路2的與容器組裝體1的長邊方向正交的面而言,剖面積較大的部分(流路2的較粗部分)與剖面積較小的部分(流路2的較細(xì)部分)交替配置。對第一油?第四油20、22、24、26以及溶出液32而言,該各液的一部分或全部收納于流路2的較細(xì)部分。流路2的較細(xì)部分的剖面積具有在鄰接的相互不混合的液體(也可以是流體。以下相同)的界面配置于流路2的較細(xì)部分的情況下能夠穩(wěn)定地維持該界面的面積。因此,能夠利用配置于流路2的較細(xì)部分的液體穩(wěn)定地維持該液體與配置于該液體的上下的其他液體的配置關(guān)系。另外,即使在配置于流路2的較細(xì)部分的液體與配置于流路2的較粗部分的其他液體的界面形成于流路2的較粗部分的情況下,該界面因強(qiáng)烈的沖擊而紊亂,也可以通過放置至靜止的狀態(tài)而在規(guī)定的位置穩(wěn)定地形成界面。
[0109]流路2的較細(xì)部分形成于吸附插入部122、第一插入部212、第二插入部222、第三插入部232、以及溶出插入部302的內(nèi)側(cè),并在溶出容器300中超過溶出插入部302向上方延伸。此外,收納于流路2的較細(xì)部分的液體即使在組裝容器之前也被穩(wěn)定地維持。
[0110]3-1-1.油
[0111]第一油?第四油20、22、24、26均由油構(gòu)成,在圖7的狀態(tài)下,它們在各油的前后的液體之間作為液柱而存在。由于第一油?第四油20、22、24、26作為液柱而存在,所以在各油的前后鄰接的液體被選擇相互相分離的液體即不混合的液體。另外,構(gòu)成第一油?第四油20、22、24、26的油也可以是相互不同的種類的油。作為能夠在它們中使用的油,例如,可以舉出從二甲基硅油等硅油系油、鏈烷烴系油、礦物油以及它們的混合物中選擇的一種。
[0112]3-1-2.吸附液
[0113]吸附液10是指成為使核酸吸附于磁性粒子30的場所的液體,例如是包含離液物質(zhì)的水溶液。作為吸附液10,例如可以使用5M胍硫氰酸鹽、2% Triton X_100、50mMTris-HCl (pH = 7.2)。吸附液10只要含有離液物質(zhì)就不特別限定,但也可以以細(xì)胞薄膜的破壞或使細(xì)胞中所包含的蛋白質(zhì)變性為目的而使吸附液10含有表面活性劑。作為該表面活性劑,只要是通常用于從細(xì)胞等提取核酸的表面活性劑就不特別限定,具體而言,能夠舉出Triton-X等Triton系表面活性劑、Tween20等Tween系表面活性劑之類的非離子性表面活性劑、以及N-月桂酰肌氨酸鈉(SDS)等陰離子性表面活性劑,但特別優(yōu)選以使非離子性表面活性劑成為0.1?2%的范圍的方式進(jìn)行使用。而且,優(yōu)選含有2-巰基乙醇或二硫蘇糖醇等還原劑。溶解液可以是緩沖液,但優(yōu)選為pH = 6?8的中性。考慮到這些,具體而言,優(yōu)選含有3M?7M的胍鹽、0 %?5 %的非離子性表面活性劑、OmM?0.2mM的EDTA、以及0M?0.2M的還原劑等。
[0114]這里,離液物質(zhì)只要具有在水溶液中產(chǎn)生離液離子(離子半徑大的1價的陰離子)、使疏水性分子的水溶性增加的作用,并有助于核酸的向固相載體的吸附,就不特別限定。具體而言,可舉出鹽酸胍鹽、碘化鈉、高氯酸鈉等,這些物質(zhì)中,優(yōu)選蛋白質(zhì)變質(zhì)作用較強(qiáng)的胍硫氰酸鹽或鹽酸胍鹽。這些離液物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)濃度因各物質(zhì)而不同,例如在使用胍硫氰酸鹽的情況下,優(yōu)選在3M?5.5M的范圍內(nèi)使用,在使用鹽酸胍鹽的情況下,優(yōu)選在5M以上使用。
[0115]離液物質(zhì)存在于水溶液中,由此,水溶液中的核酸以吸附于固體的方式存在比以被水分子包圍的方式存在,在熱力學(xué)上更為有利,因而吸附于磁性粒子30的表面。
[0116]3-1-3.清洗液
[0117]第一清洗液?第三清洗液12、14、16對核酸所結(jié)合的磁性粒子30進(jìn)行清洗。
[0118]第一清洗液12是與第一油20以及第二油22均相分離的液體。優(yōu)選第一清洗液12為水或低鹽濃度水溶液,在為低鹽濃度水溶液的情況下,優(yōu)選為緩沖液。低鹽濃度水溶液的鹽濃度優(yōu)選為100mM以下,更優(yōu)選為50mM以下,最優(yōu)選為10mM以下。另外,第一清洗液12可以含有如上所述的表面活性劑,pH并不特別限定。用于使第
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